大豆球蛋白、β—伴球蛋白的分离提取及对猪外周血淋巴细胞增殖和免疫功能的影响

摘要

本研究采用实验研究方法，以分离纯化豆粕中的抗原蛋白作实验材料，研究纯化抗原蛋白的特性和体外对体液免疫及细胞免疫的影响。研究分两个实验： 实验一：大豆球蛋白和β-伴球蛋白分离提取。利用豆粕中7S和11S球蛋白在pH6.1-6.6之间溶解度不同的特点，首先对两种球蛋白进行初步分离，然后利用硫酸铵进行盐析和凝胶过滤，除去非抗原蛋白组分，得到纯度相对较高的大豆球蛋白和β一伴球蛋白。 结果表明：豆粕粉经0.03mMTris-HCI、料液比1：20、室温、PH8.0，提取2h，豆粕总蛋白提取率为32.88％。可分离出蛋白质含量71.53％的llS粗组分9.1％和蛋白质含量60.73％的7S粗组分7.9％；经盐析和凝胶过滤后，可得到蛋白含量84.19％的纯化大豆球蛋白4.3％和蛋白含量79.47％的纯化β-伴球蛋白6.0％；经过SDS-PAGE电泳鉴定，11S粗组分纯度达到87.0％，7S粗组分纯度达到62.5％：纯化后的大豆球蛋白纯度达到93.8％，β-伴大豆球蛋白达到67.2％，单位豆粕含大豆球蛋白182.34g/kg，β-伴大豆球蛋白126.94 g/kg。 实验二：利用细胞培养技术，研究了不同水平纯化大豆球蛋白、β-伴球蛋白(0、0.5 mg/ml、1.25mg/ml、2.5mg/ml、5 mg/ml、10 mg/ml)对猪外周血单核淋巴细胞(PBMC)增殖和免疫功能的影响。 结果表明：大豆球蛋白、β-伴球蛋白显著增加体外培养的猪外周单核淋巴细胞数量，极显著影响细胞MTT 0D值(P<0.01)。β-伴球蛋白与培养液IL-2、IL-6、IFN-γ、IgA含量呈显著正相关(P<0.05)，大豆球蛋白对培养液中IL-2、IL-6、IFN-γ、IgG、IgM、IgA含量影响不显著(P>0.05)。 本实验研究表明，豆粕可分离出纯度达到93.8％的大豆球蛋白丑82.34g/kg和纯度达到67.2％的β-伴大豆球蛋白126.94 g/kg。大豆球蛋白、β-伴球蛋白促进体外培养断奶仔猪外周淋巴血细胞转化和过度增殖，β-伴球蛋白可促使体外培养断奶仔猪外周血淋巴细胞产生炎性细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-6和提高IgA水平。由结果可知：β-伴球蛋白抗原性强于大豆球蛋白。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

第一部分文献综述

1大豆抗原蛋白的结构分类和理化特性

2大豆主要抗原蛋白的实验室测定方法

2.1等电点沉淀法

2.2冷沉淀法

2.3盐析法

2.4按离子强度不同而沉淀分离法

2.5免疫法

3大豆主要抗原引起断奶仔猪过敏反应的类型

3.1 Ⅰ型过敏反应

3.2 Ⅲ型过敏反应

3.3Ⅳ型过敏反应

4大豆主要抗原蛋白引起断奶仔猪的过敏反应的途径

4.1体液免疫

4.2细胞免疫

5存在的问题

6本研究的目的与意义

6.1本研究的目的

6.2本研究的意义

第二部分实验部分

实验一大豆球蛋白、B-伴球蛋白的提取、分离

1.材料

2方法

3结果与分析

实验二大豆球蛋白、B-伴球蛋白对猪外周血淋巴细胞增殖和免疫功能的影响

1试验材料

2试验方法

3接种细胞

4细胞观察和指标测定

5数据处理和统计分析

6结果与讨论

结论

参考文献

硕士期间文章发表情况

致谢