广金钱草不同部位提取物对减轻草酸钙结晶肾损伤的保护作用及机制的研究

摘要

近年来，泌尿系统结石的发病率不断上升，已占据临床泌尿外科疾病发病率的首位，约为1%-10%，我国每年有将近200/10万例新发病例。泌尿系统结石又称为尿路结石或尿石症，包括肾结石、输尿管结石、尿道结石、膀胱结石等，可引起炎症、尿道梗阻、水肿，导致肾积水，是危害人类健康的重要疾病之一。泌尿系统结石的病因和发病机理复杂，尽管已有近百年的研究历史，但仍难以阐明，其发生及复发几率居高不下，半年复发率高达6%，1年复发率为14%，2年复发率为22.8%，10年复发率为30%，且复发率有升高趋势。 尽管肾结石的诊断水平及治疗技术在过去的几十年中取得了长足的进步，但其发病率和复发率仍高居不下且呈上升趋势，究其原因主要是由于对肾结石的发病机制还不清楚，因此，便捷而稳定的实验动物草酸钙结晶模型是肾结石研究的重要手段和工具，这对探索肾结晶的产生和防治机理具有重要意义。利用中草药治疗肾脏结石的历史悠久，效果显著且副作用较少。中药治疗尿路结石有悠久的历史，其疗效肯定，不良反应少，已成为治疗尿路结石的重要手段。金钱草属蝶形花科家族中的成员，包括349种植物，部分可作为中药材，其中约30种进行了化学和药理学的研究。金钱草植物的提取物在体内外已进行了抗结石、抗炎、细胞毒性、抗糖尿病等一系列研究。目前在临床上，金钱草类药品是治疗尿路结石的最常用中草药。目前已形成商品药材的主要有广金钱草、四川金钱草、连钱草和江西金钱四大品种，其中以广金钱草的药用效果最为显著。 第一部分 广金钱草不同部位提取物对减轻草酸钙结晶肾损伤的表型 目的：广金钱草各提取部位减轻草酸钙结晶肾损伤的作用。 方法：60只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组（A组）、乙醛酸盐结晶组（B组）、石油醚部位干预组（C组）、乙酸乙酯部位干预组（D组）、正丁醇部位干预组（E组）和剩余水溶液干预组（F组），每组10只。A组腹腔注射100mg/kg生理盐水，B组腹腔注射100mg/kg乙醛酸盐，C组腹腔注射100mg/kg乙醛酸盐+20mL/kg石油醚浸膏，D组腹腔注射100mg/kg乙醛酸盐+20mL/kg乙酸乙酯浸膏，E组腹腔注射100mg/kg乙醛酸盐+20mg/kg正丁醇浸膏，F组腹腔注射100mg/kg乙醛酸盐+20mL/kg剩余水溶液，连续给药5天后，检测各组小鼠血生化指标、肾组织钙含量、各组小鼠肾组织切片中草酸钙结晶体分布及组织病理改变结果：与单纯乙醛酸盐结晶组相比，石油醚部位干预组、乙酸乙酯部位干预组和正丁醇部位干预组小鼠血肌酐及尿素氮水平显著下降（P＜0.05）；肾脏组织钙含量显著下降（P＜0.05）；肾组织草酸钙结晶沉积及肾脏病理组织损伤均显著减轻（P＜0.05）。 结论：广金钱草三个提取部位（石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位）可以有效减轻草酸钙结晶从而起到保护肾脏的作用。 第二部分 广金钱草不同部位提取物对减轻草酸钙结晶肾损伤的机制 目的：广金钱草不同部位提取物减轻草酸钙结晶肾损伤的治疗作用。 方法：60只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组（A组）、乙醛酸盐结晶组（B组）、广金钱草石油醚部位干预组（C组）、广金钱草乙酸乙酯部位干预组（D组）、广金钱草正丁醇部位干预组（E组）和广金钱草剩余水溶液干预组（F组），每组10只。A组腹腔注射100mg/kg生理盐水，B组腹腔注射100mg/kg乙醛酸盐，C组腹腔注射100mg/kg乙醛酸盐+20ml/kg石油醚浸膏，D组腹腔注射100mg/kg乙醛酸盐+20ml/kg乙酸乙酯浸膏，E组腹腔注射100mg/kg乙醛酸盐+20ml/kg正丁醇浸膏，F组腹腔注射100mg/kg乙醛酸盐+20ml/kg剩余水溶液，连续给药5天后，利用相关试剂盒、荧光实时定量PCR技术和免疫组化技术检测CAT、CuZn-SOD，GSH、MDA、TRPV5、Calbindin-D28、骨桥蛋白、CD44、Ki67和TUNEL表达改变。 结果：与单纯乙醛酸盐结晶组相比，石油醚部位干预组、乙酸乙酯部位干预组和正丁醇部位干预组小鼠肾脏组织中CAT、CuZn-SOD、GSH、骨桥蛋白、CD44、TRPV5、Calbindin-D28和Ki67水平显著升高；MDA和TUNEL含量显著降低。 结论：广金钱草各萃取部位提取物可能通过抑制过氧化应激途径减轻小鼠草酸钙结晶性肾损伤，同时促进肾小管上皮细胞增殖、抑制凋亡，起到了保护肾小管上皮细胞的作用。另外，三个萃取部位能够上调肾脏TRPV5及Calbindin-D28k的表达，同时抑制骨桥蛋白和CD44的含量，从而降尿液中钙离子的含量，减少草酸钙结晶的形成。

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摘 要

Abstract

缩略词表

前 言

第一部分 广金钱草不同部位提取物对减轻草酸钙结晶肾损伤的表型研究

材料与方法

一、实验动物

二、主要试剂及仪器

三? 实验方法

结 果

讨 论

第二部分 广金钱草不同部位提取物对减轻草酸钙结晶肾损伤的机制研究

材料与方法

一、实验动物

二、主要试剂及仪器

三、实验方法

结 果

讨 论

参考文献

全文小结

综 述

在读期间发表论文情况

致 谢