Sjogren-Larsson综合征ALDH3A2基因突变筛查及致病机理研究

摘要

目的：对一例 sjogren-Larsson综合征（Sjogren-Larsson syndrome,SLS）患者的ALDH3A2基因进行突变检测和功能学实验。研究SLS患者ALDH3A2基因突变的类型和特点，为进一步研究ALDH3A2基因突变导致SLS的致病机理奠定基础。
　　方法：该实验对象为山东省青岛市1例SLS患儿及其父母。采集患儿及其父母外周静脉血并提取DNA，采用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)扩增ALDH3A2基因编码区的全部外显子并测序。本实验第二部分对在ALDH3A2基因筛查中发现的新突变(c.723C＞G)进行功能学研究。从新鲜的肝组织中提取RNA并进行逆转录，设计相应引物扩增ALDH3A2全编码基因，构建ALDH3A2野生型真核表达载体，利用定点诱变试剂盒构建ALDH3A2突变体，对野生型表达载体和突变型表达载体进行正反向测序验证。用野生型和突变型质粒分别转染人皮肤成纤维细胞，转染48h后收集、裂解细胞，提取总蛋白，用多功能酶标仪检测突变对脂肪醛脱氢酶活性的影响，与野生型比较分析得出突变体活性的改变。
　　结果：在受检者ALDH3A2基因发现c.723C＞G（编码区第723号核苷酸由C变为G）、c.1157A>G（编码区第1157号核苷酸由A变为G）的复合杂合核苷酸变异，上述变异分别导致第241号氨基酸由Cys变为Trp（p.Cys241Trp）、第386号氨基酸由Asn变为Ser（p.Asn386Ser），均为错义变异。受检者其父在位点c.723发现C＞G的杂合变异，其母该位点未见异常；受检者其母在位点c.1157发现A>G的杂合变异，其父该位点未见异常。对野生型和突变型表达载体进行酶活检测，与野生型相比较，c.723C＞G造成FALDH活性的降低。
　　结论：在受检者 ALDH3A2基因所发现的复合杂合变异分别遗传自受检者其父母，父母均为杂合子，该变异是导致受检者发病的致病性变异。变异c.1157A>G的致病性已经文献报道，与Sjoegren-Larsson综合症相关。变异c.723C＞G的致病性尚未见文献报道，对其进行功能学研究，证实了c.723C＞G是导致患者发病的致病性突变。

目录

引言

实验材料与实验方法

1.实验材料

1.1 研究对象

1.2 实验耗材

1.3 主要仪器

1.4 主要试剂

1.5 常用试剂配置

1.6 软件与数据库

2 实验方法

2.1 ALDH3A2基因突变筛查

2.2 真核表达载体的构建

2.3 脂肪醛脱氢酶活性检测

结果

1 ALDH3A2基因突变筛查

2 真核表达载体的构建

3 G418筛选人皮肤成纤维细胞的最佳浓度

4 RT-PCR检测转染效果

5 FALDH 活性变化差异

讨论

结论

参考文献

综述:Sjogren-Larsson综合征的研究进展

攻读学位期间的研究成果

致谢

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