德氏乳杆菌QS701产ACE抑制肽条件的优化及其活性的研究

摘要

本文对具有ACE抑制活性的德式乳杆菌QS701，通过单因素试验和响应面设计，优化了菌株QS701在发酵脱脂乳中产ACE抑制肽的培养基和发酵条件，确定了菌株QS701发酵产ACE抑制肽的最适条件。得到的发酵乳清经过超滤和Sephadex G-15凝胶层析粗分离出ACE抑制肽，并对其抗氧化性和稳定性进行了探讨。本文主要研究结果如下：
　　（1）菌株QS701在还原脱脂乳中前期生长缓慢，培养2d后生长速度加快，3d时其生物量、蛋白质水解活性和ACE抑制率均达到了最大值，分别为9.57（OD410nm×10）、451.34(μg/mL Tyr)和65.2％。
　　（2）采用单因素和响应面优化试验对菌株QS701的培养基和发酵条件进行了优化，优化后的发酵培养基配比为：蔗糖浓度为0.6%，酪蛋白胨浓度为0.9%，CaCl2浓度为0.09%；发酵条件为：接种量3%、温度44℃、发酵时间76h。在此条件下测得ACE抑制率和IC50分别为80.11%和1.047mg/mL，与优化前相比菌株产ACE抑制肽的能力有了显著的提高。
　　（3）菌株 QS701的脱脂乳发酵液经超滤分离后，得到了 M>10kDa、10kDa　　（4）对粗分离出来的ACE抑制肽进行理化特性研究发现：分子量在3-10kDa组分的抗氧化效果最好，其中对DPPH自由基的清除率为45.69％，对羟自由基的清除能力为31.09％，对O-2清除能力为16.33％。分子量小于3kDa的组分在40~60℃和酸性条件下，ACE抑制率变化不大，具有较好的稳定性。

目录

声明

1 前言

1.1 高血压

1.2 高血压的治疗

1.3 ACE与血压调控体系

1.4 ACE抑制肽

1.4.1 ACE抑制肽的概述

1.4.2 乳酸菌与ACE抑制肽

1.4.3 ACE抑制肽的分离纯化

1.5.1 研究的目的及意义

1.5.2 主要内容

2.1 材料

2.1.1 供试菌株

2.1.2 主要试剂葡萄糖

2.1.3 培养基

2.1.4 仪器与设备

2.2 实验方法

2.2.1 菌株QS701在脱脂乳中的生长特性

2.2.2 pH值测定

2.2.3 发酵乳中乳酸菌生物量的测定

2.2.4 发酵乳中乳酸菌蛋白质水解活力的测定

2.2.5 发酵乳ACE抑制活性的测定

2.2.6 半抑制浓度（IC50）测定

2.2.7 菌株QS701发酵培养基的优化

2.2.8 菌株QS701发酵条件的优化

2.2.9 ACE抑制肽的分离纯化

2.2.10 ACE抑制肽理化特性的研究

3 结果与分析

3.1 菌株QS701发酵过程中生长情况的测定

3.2 菌株QS701发酵乳培养基的优化

3.2.1 不同碳源对菌株QS701产ACE抑制肽的影响

3.2.2 不同氮源对菌株QS701产ACE抑制肽的影响

3.2.3 不同盐离子对菌株QS701产ACE抑制肽的影响

3.2.4 QS701发酵脱脂乳产ACE抑制肽培养基成分的筛选

3.3 菌株QS701发酵脱脂乳产ACE抑制肽条件的优化

3.3.1 不同发酵温度对菌株QS701产ACE抑制肽的影响

3.3.2 不同接种量对菌株QS701产ACE抑制肽的影响

3.3.3 不同发酵时间对菌株QS701产ACE抑制肽的影响

3.3.4 QS701发酵脱脂乳产ACE抑制肽条件的优化

3.3.5 优化前后ACE抑制率活性比较（IC50）

3.4 ACE抑制肽的分离纯化

3.4.1 发酵乳中ACE抑制肽的超滤分离

3.4.2 葡聚糖凝胶层析分离ACE抑制肽

3.5 ACE抑制肽理化特性的研究

3.5.1 ACE抑制肽的抗氧化活性

3.5.2 ACE抑制肽的温度稳定性研究

3.5.3 ACE抑制肽pH稳定性研究

4 结论

致谢

参考文献

个 人 简 介