亲环素A对Aβ诱导PC12细胞损伤的保护作用

摘要

前言: 阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一种多见于老年人的神经系统变性疾病，表现为进行性记忆力减退和痴呆、认知障碍、运动障碍。其特征性病理学改变是神经纤维缠结(neuofibrillary tangle，NFT)，大量记忆性神经元数目减少，以及老年斑(senile plaque，SP)的形成。β淀粉样蛋白(Aβ)是老年斑的主要成分，它的异常沉积是AD发病的重要危险因素。β淀粉样蛋白具有神经毒性，可诱导神经元凋亡。用Aβ25-35直接诱导PC12细胞凋亡建立AD细胞模型是体外进行AD研究的理想模型。大量的实验已证明亲环素A(cyclophilin A，CyPA)可以保护神经元抵抗氧化应激等损伤。Boulos等研究了CyPA的作用，发现在大鼠皮层神经元由腺病毒介导CyPA的过表达可以明显保护神经元抵抗氧化应激和缺血性损伤，并且利用在培养的神经元中加入纯化的CyPA蛋白也可保护神经元抵抗氧化应激和缺血性损伤。因此本实验以Aβ25-35损伤PC12细胞为模型，研究CyPA是否对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有神经保护作用． 资料与方法: 将PC12细胞分为3组：正常对照组，Aβ损伤组，药物保护组。Aβ损伤组用Aβ25-35处理细胞，药物保护组在用Aβ25-35处理前30分钟加入重组的人亲环素A(rhCyPA)。 1、用MTT法检测细胞存活率：将PC12细胞接种于96孔细胞培养板，分组分别加药，加入MTTT15μl继续培养4 h，加入DMSO100μL，用酶标仪在570nm．波长处读取各组细胞的吸光值(OD值)，减去背景OD值。 2、采用HE染色法观察细胞形态。 3、用免疫组织化学方法检测bc1-2，bax蛋白的表达。采用SABC法，将PC12细胞爬片固定，按免疫组织化学方法染色。Metamorph软件分析吸光度，用吸光度(OD值)表示蛋白的表达水平。 4、Annexin-V流式细胞仪检测凋亡率。 将PC12细胞接种于25ml培养瓶中，按分组分别加药。收集细胞制备单细胞悬液，将等体积的细胞悬液和PI染液混合，送流式细胞仪检测。数据用SPSS12.0软件包进行分析，数据以均数士标准差表示，统计分析用t检验。认为P<0.05结果有统计学意义。 实验结果: 1、MTT法检测细胞存活率：Aβ损伤组与对照组相比较OD值及细胞存活率显著降低，药物保护组与Aβ损伤组相比OD值及细胞存活率显著升高。 2、HE染色光镜下观察：(1)对照组：正常PC12细胞单层生长，胞体饱满，细胞数量多，细胞间联系紧密，相互交织成簇状；(2)Aβ损伤组：胞核固缩、胞浆呈淡红色，细胞数量明显减少；(3)药物保护组：部分细胞可见胞核固缩，细胞数量较Aβ损伤组明显增多。 3、免疫组织化学实验结果可见Aβ损伤组中bcl-2的表达比正常对照组低，bax的表达比正常对照组高;药物保护组bcl-2的表达比Aβ损伤组升高，bax的表达比Aβ损伤组降低。 4、流式细胞仪检测凋亡率：Aβ损伤组细胞凋亡百分率明显升高，药物保护组细胞凋亡百分率明显降低。 结论: CyPA对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤具有一定的保护作用。CyPA能上调Aβ25—35诱导PC12细胞bcl-2的表达，抑制bax的表达。

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综述 亲环素A的研究进展

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