藠头多糖的分离纯化及活性研究

摘要

采用响应面法对内部沸腾法提取藠头多糖的工艺条件进行优化。在单因素试验的基础上选取提取时间、提取温度、液料比三因素，利用Box-Benhnken试验和响应面分析法，研究了各自变量交互作用及其对藠头粗多糖得率的影响，模拟得到二次多项式回归方程的预测模型。结果表明内部沸腾法提取藠头粗多糖的最佳提取条件为:提取温度85℃，提取时间6min，液料比17∶1。在此条件下可达到较高藠头粗多糖得率，即34.7％。
　　 采用内部沸腾法提取的藠头粗多糖，用DEAE-52纤维素柱和SephadexG-75凝胶柱层析进行分离纯化，获得2种均一组分:藠头水组分多糖与藠头NaCl组分多糖。经过SephadexG-200凝胶柱色谱进行纯度鉴定，表明水组分多糖与NaCl组分多糖是均一多糖。在初级结构的对比研究中，水组分多糖与NaCl组分多糖初级结构一致，经紫外扫描图谱表明两组多糖样品均为非蛋白结合多糖;红外光谱分析显示藠头水组分多糖与NaCl组分多糖都含有多糖类物质的特征吸收峰，均为α吡喃环结构;X衍射图谱中藠头水组分多糖与藠头NaCl组分多糖样品均处于无定形状态，其中NaCl组分多糖有部分结晶，水组分多糖有部分结晶的趋势。用凝胶过滤法测定藠头水组分多糖的分子量为16460Da，藠头NaCl组分多糖的分子量为65310Da。利用蒽酮—硫酸法检测纯化后的藠头多糖纯度:水组分多糖的纯度为92.15％; NaCl组分多糖的纯度为85.41％。
　　 在体外抗氧化性的对比研究中，藠头水组分多糖与NaCl组分多糖能够清除一定的羟自由基、O2-·自由基、DPPH自由基并且具备还原力，但作用效果都远不及Vc;水组分多糖自由基清除效果强于NaCl组分多糖;两组多糖对DPPH的清除效果以及还原能力有浓度依赖性，呈现随浓度增加而递增的趋势:藠头水组分多糖对DPPH自由基的清除作用最强，在试验条件下，可达到51.24％，对·OH自由基清除效果次之，对O2-·自由基的清除作用最弱。
　　 在研究不同实验因素影响藠头多糖抑制α-葡萄糖苷酶活性时，结果表明:两种组分的藠头多糖对其都有一定的抑制活性，同样浓度下藠头NaCl组分多糖的抑制率大于水组分多糖，达到43.48％;同样的反应时间下，水组分多糖抑制率高于NaCl组分多糖;样品添加量为20μL时多糖对α-葡萄糖苷酶抑制率可以达到最大:随pH增高，样品对α-葡萄糖苷酶抑制率增加，但是pH到10.52以后，抑制率降低。两种组分多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制率在pH为10.52分别为46.79％和47.89％。

目录

声明

摘要

缩略语

第1章 引言

1．1 概述

1．2 国内外研究现状

1．2．1 蕌头的营养成分

1．2．2 蕌头的化学成分

1．3 多糖的研究现状

1．3．1 多糖的提取研究

1．3．2 多糖的分离纯化研究

1．3．3 多糖的生物活性研究

1．4 蕌头多糖的研究现状

1．4．1 蕌头多糖提取研究

1．4．2 蕌头多糖分离、纯化研究

1．4．3 蕌头多糖结构研究

1．4．4 蕌头多糖活性研究

1．5 研究价值及意义

1．5．1 广阔的发展前景

1．5．2 为企业提供技术指导

第2章 内部沸腾法提取蕌头多糖工艺的研究

2．1 材料与仪器

2．1．1 材料与试剂

2．1．2 仪器

2．2 实验方法

2．2．1 内部沸腾法提取蕌头多糖

2．2．2 蕌头粗多糖含量测定与得率计算

2．2．3 单因素试验

2．2．4 响应面实验

2．3 实验结果与分析

2．3．1 蕌头粗多糖含量测定与得率计算

2．3．2 单因素试验结果

2．3．3 响应面优化试验结果

2．4 讨论与小结

第3章 蕌头多糖的分离纯化

3．1 材料与仪器

3．1．1 材料与试剂

3．1．2 仪器

3．2 实验方法

3．2．1 蕌头多糖的分离纯化流程

3．2．2 Sevage法脱蛋白

3．2．3 过氧化氢脱色

3．2．4 透析

3．2．5 DEAE-52纤维素柱层析

3．2．6 Sephadex G-75凝胶柱层析

3．3 实验结果与分析

3．3．1 DEAE-52柱层析分离

3．3．2 Sephadex G-75凝胶柱层析分离

3．4 讨论与小结

第4章 蕌头多糖理化性质、初级结构的研究

4．1 引言

4．2 实验材料

4．2．1 原料

4．2．2 主要试剂

4．2．3 主要仪器

4．3 实验方法

4．3．1 多糖纯度鉴定

4．3．2 蕌头多糖初级结构研究

4．4 实验结果与讨论

4．4．1 蕌头多糖理化性质的研究

4．4．2 蕌头多糖初级结构的研究

4．5 本章小结

第5章 蕌头多糖抗氧化活性研究

5．1 引言

5．2 实验材料

5．2．1 实验原料

5．2．2 主要试剂

5．2．3 主要仪器

5．3 实验方法

5．3．1 样品溶液的配制

5．3．2 羟自由基(·OH)清除活性的测定

5．3．3 超氧阴离子自由基(O2-·)清除活性的测定

5．3．4 DPPH自由基清除活性的测定

5．3．5 还原力的计算

5．4 实验结果与讨论

5．4．1 羟自由基(·OH)的清除试验结果

5．4．2 超氧阴离子自由基(O2-·)的清除试验结果

5．4．3 DPPH自由基的清除试验结果

5．4．4 还原力试验结果

5．5 本章小结

第6章 蕌头多糖对α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究

6．1 引言

6．2 实验材料和仪器

6．2．1 实验材料

6．2．2 实验动物

6．2．3 仪器与设备

6．3 实验方法

6．3．1 试剂的配制

6．3．2 鼠源α-葡萄糖苷酶韵提取

6．3．3 不同因素影响蕌头多糖对鼠源α-葡萄糖苷酶的抑制活性

6．3．4 蕌头多糖对鼠源α-葡萄糖苷酶的抑制作用类型

6．4 实验结果与分析

6．4．1 不同因素影响蕌头多糖对鼠源α-葡萄糖苷酶的抑制活性

6．4．2 蕌头多糖对鼠源α-葡萄糖苷酶的抑制作用类型

6．5 本章小结

第7章 结论与展望

7．1 结论

7．2 主要创新

7．3 进一步研究方向

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果