杂色云芝液体发酵制备高活力漆酶的研究

摘要

本论文以杂色云芝为菌种，研究了部分金属离子及诱导剂对云芝分泌漆酶量的影响；并对发酵过程进行了分批补料和pH的调控；研究了云芝与丝状真菌共培养对漆酶分泌量的影响，建立了适宜的云芝发酵产漆酶的条件，达到了提高漆酶产量，降低漆酶生产成本的目的。研究结果如下：
　　 (1)添加Cu2+适宜的浓度为300μmol/L且在发酵接种2d后添加，漆酶活力达到4558.4U/L，胞外蛋白含量达到2.65mg/ml；在发酵3d后添加500μmol/L的Mn2+较适宜。
　　 (2)添加香兰素和愈创木酚的适宜浓度分别为250μmol/L和20μmol/L。自制两种价廉、易得的小分子介质A和B作为诱导剂能有效促进漆酶的合成。其中，小分子介质A作为诱导剂时漆酶酶活达到3493U/L。
　　 (3)发酵培养基中最适的麸皮初始浓度和pH值分别为20g/L和5.0。发酵过程中进行pH调控和分批补料发酵均有利于云芝分泌漆酶。当以20g/L为补料量，连续补料三次，最高酶活达到3366.7U/L，且胞外蛋白含量也得到显著提高；当补料总量相同时，可以以递增、恒定、递减三种补料顺序进行补料，其中，以递减方式补料效果最好。
　　 (4)云芝与丝状真菌液态共培养中，适宜的接种时间为云芝培养后第3d，漆酶酶活是空白样的2.2倍。

目录

文摘

英文文摘

声明

致谢

前言

1.课题研究的背景及意义

2.本论文研究的主要内容

3.本论文的创新之处

第1章 文献综述

1.1漆酶的来源

1.2漆酶的结构及理化性质

1.2.1漆酶的化学组成

1.2.2漆酶的结构特征及活性中心

1.2.3漆酶的分子生物学

1.3漆酶的酶学性质

1.4漆酶的发酵方式

1.4.1液体发酵产漆酶

1.4.2固态发酵产漆酶

1.5影响漆酶合成的条件

1.5.1碳源和氮源对真菌漆酶合成的影响

1.5.2金属离子对真菌漆酶合成的影响

1.5.3某些化合物对真菌漆酶合成的诱导

1.5.4其它因素

1.6漆酶催化氧化反应机理及其介质系统

1.6.1催化氧化反应机理

1.6.2漆酶的介质系统

1.7漆酶的应用

1.7.1在造纸工业中的应用

1.7.2生物修复

1.7.3环境保护

1.7.4在生物传感器和检测中的应用

1.7.5在食品工业中的应用

第2章 部分金属离子及诱导剂对云芝产漆酶的影响

2.1材料与方法

2.1.1材料

2.1.2制备及检测方法

2.2结果与讨论

2.2.1 Cu2+对漆酶合成的影响

2.2.2 Mn2+对云芝产漆酶的影响

2.2.3香兰素对云芝产漆酶的影响

2.2.4愈创木酚对云芝产漆酶的影响

2.2.5自制小分子介质对云芝产漆酶的影响

2.3小结

第3章 分批补料和pH调控对云芝产漆酶的影响

3.1材料与方法

3.1.1材料

3.1.2制备及检测方法

3.2结果与讨论

3.2.1麸皮用量对云芝产漆酶的影响

3.2.2分批补料对云芝产漆酶的影响

3.2.3初始pH值对漆酶合成的影响

3.2.4产酶过程中pH值调控

3.3小结

第4章 云芝与丝状真菌共培养制备漆酶

4.1材料与方法

4.1.1材料

4.1.2制备及检测方法

4.2结果与讨论

4.2.1云芝与丝状真菌液态发酵共培养产漆酶的研究

4.3小结

第5章 结论与讨论

5.1结论

5.2存在的问题和下一步的研究

参考文献