黑木耳多糖分离纯化、理化性质及抗疲劳功能的研究

摘要

黑木耳(Auricularia auricula)隶属于真菌门，担子菌纲，木耳目，木耳科，是我国重要的药食兼用真菌，其主要活性成分——黑木耳多糖具有调节人体免疫系统、降血压、降血脂、抗肿瘤、增强肠胃功能和护肝等功效。
　　本文以黑木耳子实体为原料，利用现代分离分析手段，对黑木耳多糖的提取工艺、分离纯化、理化性质以及抗疲劳活性进行了研究，主要结果如下：
　　1、分别对传统水提法、微波和超声辅助提取法提取多糖的工艺进行优化，并研究了微波和超声波对提取多糖的分子量分布的影响。在优化的最佳工艺条件下，传统水提法、微波和超声辅助提取法的一次提取得率分别为18％～19％、28％～29％和24％-25％，二次提取得率分别达22％～23％、33％～34％和30％～31％。微波和超声辅助提取法均能显著提高黑木耳多糖得率，促进大分子量组分溶出，但对小分子量组分的溶出会产生一定影响。
　　2、精制多糖(AAP，经脱蛋白、脱色和透析处理)经DEAE Sephadex A-25离子交换层析和Sephadex G-200排阻层析分离纯化后，得到了三个主要组分，分别为AAPⅠ-a、AAPⅡ-a和AAPⅢ-a，经紫外扫描表明它们不含核酸和蛋白质，经凝胶柱层析和高效液相色谱鉴定均为单一组分。
　　3、黑木耳多糖的主要组分AAPⅠ-a、AAPⅡ-a和AAPⅢ-a均为淡黄色絮状固体。经凝胶渗透色谱分析，它们的重均分子量(M)w分别为1.37×104Dal、1.55×104Dal、8.68×105Dal，数均分子量(M)N分别为1.26×104Dal、1.27×104Dal和4.12×104Dal。经高效液相色谱分析，AAPⅠ-a由葡萄糖组成;AAPⅡ-a由木糖和葡萄糖组成，摩尔比为1.33∶1; AAPⅢ-a由木糖和葡萄糖组成，摩尔比为1∶2.28。经红外光谱确定AAPⅠ-a和AAPⅡ-a为β-构型的吡喃糖，AAPⅢ-a为呋喃糖。
　　4、AAP和AAPⅢ-a均能显著延长小鼠的力竭游泳时间;提高小鼠体内肝糖原和肌糖原的储备量和恢复率;降低小鼠运动后血乳酸的增长量，加速小鼠体内血乳酸的清除率;AAPⅢ-a能降低小鼠运动后血尿素氮的增长量，加速小鼠体内血尿素氮的清除率;AAPⅢ-a的效果优于AAP，以AAP-Ⅲ-a100 mg/(kg·bw·d)效果最好。

目录

摘要

1 绪论

1．1 真菌多糖的研究概况

1．1．1 真菌多糖的提取和精制

1．1．2 真菌多糖的分离纯化

1．1．3 真菌多糖的结构分析

1．1．4 真菌多糖的生物活性

1．1．5 真菌多糖的构效关系

1．2 黑木耳的研究概况

1．2．1 黑木耳的主要化学成分

1．2．2 黑木耳的生物活性

1．2．3 黑木耳多糖的分离分析方法

1．3 研究内容和意义

2 黑木耳多糖提取工艺的研究

2．1 试验材料

2．1．1 原料

2．1．2 试剂

2．1．3 仪器

2．2 试验方法

2．2．1 原料预处理

2．2．2 黑木耳多糖提取的工艺流程

2．2．3 多糖含量测定方法

2．2．4 传统水提法提取黑木耳多糖

2．2．5 微波辅助法提取黑木耳多糖

2．2．6 超声辅助法提取黑木耳多糖

2．2．7 黑木耳多糖分子量分布的测定

2．2．8 数据分析

2．3 结果与讨论

2．3．1 多糖含量标准曲线的绘制

2．3．2 传统水提法提取黑木耳多糖的结果分析

2．3．3 微波辅助法提取黑木耳多糖的结果分析

2．3．4 超声辅助提取黑木耳多糖的结果分析

2．3．5 三种提取方法的比较

2．3．6 讨论

2．4 本章小结

3 黑木耳多糖分离纯化的研究

3．1 试验材料

3．1．1 原料

3．1．2 试剂

3．1．3 仪器

3．2 试验方法

3．2．1 黑木耳多糖分离纯化的工艺流程

3．2．2 黑木耳多糖的离子交换层析

3．2．3 黑木耳多糖的排阻层析

3．2．4 黑木耳多糖组分的纯度鉴定

3．3 结果与讨论

3．3．1 黑木耳多糖的离子交换层析

3．3．2 排阻层析制备黑木耳多糖组分

3．3．3 黑木耳多糖组分的纯度鉴定

3．4 本章小结

4 黑木耳多糖组分理化性质的研究

4．1 试验材料

4．1．1 材料

4．1．2 试剂

4．1．3 仪器

4．2 试验方法

4．2．1 黑木耳多糖组分的基本理化性质分析

4．2．2 黑木耳多糖组分的相对分子质量测定

4．2．3 黑木耳多糖组分的单糖组成分析

4．2．4 黑木耳多糖组分的红外光谱分析

4．3 结果与讨论

4．3．1 黑木耳多糖组分的基本理化性质分析

4．3．2 黑木耳多糖组分的相对分子质量测定

4．3．3 黑木耳多糖组分的单糖组成分析

4．3．4 黑木耳多糖组分的红外光谱分析

4．3．5 讨论

4．4 本章小结

5 黑木耳多糖抗疲劳活性的研究

5．1 试验材料

5．1．1 受试物

5．1．2 实验动物

5．1．3 试剂

5．1．4 仪器

5．2 试验方法

5．2．1 动物分组与给药

5．2．2 负重游泳实验及力竭游泳时间的测定

5．2．3 血乳酸(BLA)和血尿素氮(BUN)含量的测定

5．2．4 肝糖原(LG)和肌糖原(MG)含量的测定

5．2．5 数据分析

5．3 结果与讨论

5．3．1 黑木耳多糖对小鼠体重的影响

5．3．2 黑木耳多糖对小鼠耐力的影响

5．3．3 黑木耳多糖对小鼠血乳酸(BLA)和血尿素氮(BUN)的影响

5．3．4 黑木耳多糖对小鼠肝糖原(LG)和肌糖原(MG)的影响

5．3．5 讨论

5．4 本章小结

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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