重组猪α干扰素抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的应用研究

摘要

利用本实验室成功构建的猪α干扰素原核达载体PETIFN-α，在大肠杆菌BL21中表达了猪α干扰素，表达产物为一融合蛋白。SDS-PAGE电泳后在约40.2kDa处出现一条带，同预期结果一致。经过优化IPTG的浓度和诱导时间，猪α干扰素的表达量明显提高，表达量约占细菌总蛋白量的20％。应用镍琼脂糖凝胶树脂层析柱吸附纯化猪α干扰素融合蛋白，不同浓度咪唑缓冲液洗脱吸附蛋白，SDS-PAGE电泳鉴定表明，400mM咪唑的缓冲液洗脱的猪α干扰素蛋白，纯度最高，达到蛋白纯化的预期目的，可以用于抗病毒活性试验。 用细胞病变抑制法在Marc-145细胞上测定重组猪α干扰素活性，测定重组猪α干扰素抗PRRSV的病毒活性为5.0×103U/mg。将干扰素做不同浓度梯度稀释后，在单层Marc-145细胞上做猪α干扰素抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒试验，测得干扰素对Marc-145细胞的无毒浓度为0.20mg/ml，最小抑制浓度为0.14mg/ml。结果表明，重组猪α干扰素在体外对PRRSV有较低的抑制作用。 重组猪α干扰素体内抑制PRRSV试验研究表明，使用重组干扰素配合抗生素可以治疗猪病毒病，缩短治疗疗程2-3d，治愈率高于不含干扰素的药物治疗组但差异不显著，使用干扰素治疗，停药后不易复发。干扰素的预防试验结果表明，与对照Ⅱ组相比，在断奶后第14天，健康仔猪断奶应激造成的腹泻率降低。

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致谢

文献综述

1.干扰素研究进展

1.1.干扰素的分类及基因结构

1.2.干扰素产生机理

1.3.干扰素的生物学活性及作用机理

1.4.干扰素的基因工程

1.5.干扰素的应用

2.猪α干素的研究进展

2.1.猪干扰素的分类

2.2.猪α干扰素的生物学特性

2.3.猪α干扰素的分子结构

2.4.猪α干扰素基因工程

2.5.猪α干扰素的应用及前景展望

3.猪繁殖与呼吸综合征病毒

4.结语

引言

试验一猪α干扰素的表达及纯化

1.材料与方法

2.结果与分析

3.讨论

试验二猪α干扰素对猪繁殖与呼吸综合征病毒体外抑制作用的试验研究

1.材料与方法

2.结果与分析

3.讨论

试验三猪α干扰素抗猪繁殖与呼吸综合征病毒临床效果研究

1.材料与方法

2.结果与分析

3.讨论

全文总结

参考文献