卵泡刺激素对上皮性卵巢癌细胞增殖凋亡的影响及其相关分子机制

摘要

目的:卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一,由于缺乏早期诊断方法,术后易复发和化疗耐药的存在使其5年生存率一直徘徊在30％[1],严重威胁妇女健康。目前发现约90％的人类卵巢肿瘤起源于卵巢表面上皮(ovarian surface epithelium,OSE),其病因和发病机制迄今仍不清楚。因此,研究上皮性卵巢癌(ovarian epithelium cancel OEC)的发病机制,对于防治卵巢癌具有重要意义。
　　 近年来的研究显示,卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)对上皮性卵巢癌的发生和发展具有重要作用。这种作用直接体现为FSH促进OSE细胞的恶性转化和FSH对上皮性卵巢癌细胞增殖的影响[2]。但FSH对上皮性卵巢癌的作用机制,特别是对上皮性卵巢癌细胞增殖及凋亡影响的具体作用机理仍不清楚。虽然普遍认为FSH对细胞的作用是通过存在于细胞表面的FSH受体而实现的,但FSH与受体结合后的信号转导途径是如何作用的仍不明确,有待进一步研究。国内学者对此问题的研究多局限于组织水平,从分子水平研究上皮性卵巢癌发生过程中所涉及的信号转导途径等问题已成为目前国内外研究的热点。促进或阻断这些信号及其转导过程的关键环节将成为防治卵巢癌的重要策略。
　　 本研究通过体外培养上皮性卵巢癌细胞株,观察FSH对上皮性卵巢癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,旨在探讨FSH在上皮性卵巢癌发生发展中的作用;同时通过研究PI3K/Akt(phosphoinositol-3-kinase/serine-threonine protein kinase B,PI3K/Akt),信号转导途径及其下游分子蛋白水平表达变化,旨在从分子水平探讨FSH调控上皮性卵巢癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的信号转导机制,为上皮性卵巢癌的治疗提供一种新的思路,并为其新的治疗策略提供实验依据。
　　 方法:将人卵巢浆液性囊腺癌细胞株SKOV-3、人卵巢粘液性囊腺癌细胞株3AO置于37℃,饱和湿度5％CO2,含10％胎牛血清RPMI-1640培养基中常规培养,待细胞进入对数生长期后用于实验。
　　 1.光镜观察:将不同浓度的FSH及PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002作用于SKOV-3和3AO细胞株,在倒置相差显微镜下定时观察细胞的生长情况。
　　 2.MTT法:调整细胞浓度为1×105/ml,以每孔100ul培养于96孔培养板中,进入对数生长期后用不同浓度FSH(0、10、20、40、80、160mIU/mL)作用不同时间(0h、12h、24h、48h、72h),以FSH0mIU/mL为对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测药物对细胞的生长促进作用,筛选出药物作用的峰浓度及时间。
　　 3.流式细胞术:碘化丙啶(propidium iodide,PI)标记的流式细胞术检测各实验组SKOV-3和3AO细胞的细胞凋亡和细胞周期情况。实验分组如下:①Control组:仅以含10％胎牛血清的RPMI-1640细胞培养液培养细胞②LY294002组:10μmol/L LY294002作用于细胞③FSH组:40mIU/mL的FSH作用于细胞;④LY2940024+FSH组:PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002作用30min后加40mIU/mL FSH。
　　 4.Western blot检测以上各实验组SKOV-3和3AO细胞FSHR、Akt、p-Akt(Thr308)、突变型p53蛋白的表达情况。SKOV-3各实验组蛋白为药物作用48h后提取,3AO为24h后提取。
　　 5.应用SPSS13.0统计软件进行统计学分析。
　　 结论:
　　 1.SKOV-3和3AO细胞均表达FSHR蛋白,但SKOV03细胞FSHR呈微量表达。
　　 2.FSH可促进体外SKOV-3和3AO细胞增殖,抑制其凋亡,PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002可抑制FSH引起的SKOV-3和3AO细胞增强的增殖能力,促进细胞凋亡。
　　 3.FSH可促进SKOV-3和3AO细胞周期的改变。FSH促进SKOV-3和3AO细胞周期向G1/S期转化,正性调控SKOV-3和3AO细胞周期进程,而PI3K/Akt通路阻断剂LY294002可阻滞SKOV-3和3AO细胞周期时相于G0/G1期,负性调控细胞周期进程。
　　 4.FSH在翻译水平可促进SKOV-3和3AO细胞P-Akt蛋白的表达,并引起突变型p53蛋白表达增加。PI3K/Akt通路阻断剂LY294002可抑制FSH引起的SKOV-3、3AO细胞中Akt磷酸化的上调,进而下调突变型p53蛋白的表达。
　　 5.FSH通过激活SKOV-3、3AO细胞中的PI3K对Akt的磷酸化,提高了PI3K/Akt信号通路的活性,进而导致突变型p53蛋白表达增加;这可能是其正性调控SKOV-3、3AO细胞周期、促进细胞增殖及抑制细胞凋亡的信号转导机制之一。
　　 6.体外实验提示FSH可能与卵巢癌的发生、发展有关。

目录

文摘

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前言

材料与方法

结果

附图

附表

讨论

结论

参考文献

综述 生殖激素与上皮性卵巢癌关系的研究进展

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