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辽宁、山东和河南三省玉米籽粒中伏马毒素B1和B2污染情况研究

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引言

1 伏马毒素研究现状

1.1 概述

1.2 伏马毒素对动物的毒性

1.3 伏马毒素对人类的影响

1.4 环境因素对镰刀菌产生伏马毒素的影响

1.5 玉米中伏马毒素的污染情况

1.6 伏马毒素检测方法

1.7 研究目的和意义

第一章 玉米中FB1和FB2高效液相色谱-柱后衍生分析方法的建立

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

1.3 方法验证

1.4 试验条件的优化

2 结果与分析

2.1 方法验证

2.2 提取方法的优化

2.3 净化条件的选择

2.4 色谱和柱后衍生条件的优化

3 讨论

第二章 辽宁、山东和河南三省玉米中FBl和FB2检测及玉米籽粒分离层出镰刀菌菌株产毒能力测定

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果与分析

2.1 三省玉米籽粒中污染率及FBl和FB2检测

2.2 分离层出镰刀菌菌株在玉米基质上产生FB1和FB2能力的测定

3 讨论

第三章 不同地区霉变玉米中多毒素的检测及环境因素对拟轮生和层出镰刀菌产毒影响

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

2 结果与分析

2.1 方法验证

2.2 霉变玉米中真菌毒素的检测

2.3 温度对拟轮生和层出镰刀菌产FBl和FB2的影响

2.4 不同温度下禾谷镰刀菌对拟轮生和层出镰刀菌产FB1和FB2的影响

3 讨论

第四章 结论

参考文献

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摘要

伏马毒素是一类由拟轮生镰刀菌(Fusarium verticillioides)和层出镰刀菌(Fusarium proliferatum)产生的次生代谢产物,是一类致癌毒素。伏马毒素不仅可以导致马脑蛋白质软化、猪的肺水肿等致命病症,而且能增加人类食道癌风险。基于它们的毒性,国际癌症研究署(IARC)已将FB1列为可能的致癌物质(2B组)。
   本文建立了HPLC-柱后衍生检测玉米中FB1和FB2的方法。对辽宁、山东和河南三省玉米中FB1和FB2污染情况作了评估,并对温度和禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)对层出镰刀菌(E proliferatum)和拟轮生镰刀菌(F.verticillioides)产FB1和FB2的影响作了探讨。研究结果如下:建立了以乙腈/水为提取溶剂,SAX为净化柱,C18柱分离,OPA和2-巯基乙醇衍生,荧光检测器检测玉米中FB1和FB2的HPLC-柱后衍生方法,克服了柱前衍生衍生物不稳定、低灵敏度、多次接触有毒溶剂等缺点。
   对2010年来自辽宁、山东和河南三省玉米样品中FB1和FB2进行了检测,结果显示,三省玉米样品中伏马毒素含量及污染水平显著不同。辽宁玉米样品污染水平(FB1为80.0%,FB2为54.3%)显著高于山东(FB1为40.5%,FB2为27.4%)和河南(FB1为42.6%,FB2为18.8%)。45.7%的辽宁样品中伏马毒素(FB1+FB2)含量超过美国限量标准(2000μg/kg),而山东和河南分别有14.3%和7.9%的样品高于这一标准。辽宁、山东和河南三省玉米样品平均伏马毒素(FB1+FB2)含量分别为3990、845和665μg/kg。
   室内离体条件下,测定了从辽宁玉米样品上分离到的23株层出镰刀菌菌株(F.proliferatum)在玉米基质上产生FB1和FB2的能力。所有供试菌株在玉米培养基上都能产生FB1和FB2,其中产生FB1的量在12.0~3626.7mg/kg之间,产生FB2的量在1.3~654mg/kg之间,其中56.5%的菌株为高产毒菌株(≥500mg/kg)。不同菌株之间在产毒能力上存在差异。所有菌株产生FB1的量都高于FB2。
   对2009年来自不同地区霉变玉米中多种毒素进行了检测。结果表明DON、ZEN、FB1和FB2在霉变玉米中分布不均,而AFs在供试的霉变玉米中均未检出。
   初步研究了温度和禾谷镰刀菌(F.graminearum)对层出镰刀菌(F.proliferatum)和拟轮生镰刀菌(F.verticillioides)产生伏马毒素的影响。在水活度(aw)一定的条件下,层出镰刀菌(F.proliferatum)和拟轮生镰刀菌(F.verticillioides)产毒能力受温度影响明显。20℃时,层出镰刀菌(F.proliferatum)和拟轮生镰刀菌(F.verticillioides)产毒量最大,随着温度升高产毒量明显减少。20℃时,禾谷镰刀菌(F.graminearum)对层出镰刀菌(F.proliferatum)和拟轮生镰刀菌(F.verticillioides)产毒有明显抑制作用。25℃和30℃,禾谷镰刀菌(F.graminearum)对层出镰刀菌(F.proliferatum)产毒有一定的促进作用,对拟轮生镰刀菌(F.verticillioides)促进作用不明显。

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