牡丹籽粕中芍药苷类成分的分析及大孔吸附树脂提取工艺研究

摘要

牡丹是我国的著名花卉，不仅极具观赏价值，也有很多的保健功能。牡丹籽富含油脂，其中亚麻酸等不饱和脂肪酸含量丰富，已成为一种名贵新食品资源，得到规模化的开发利用。牡丹籽粕为牡丹籽油的生产剩余物，以往未见较系统的研究，本文以这一生物资源为材料，对其化学成分进行了分析，成功分离鉴定出6种主要成分;再以此为对照品，建立了这些成分的高效液相色谱(HPLC)分析方法，最后采用大孔吸附树脂法等步骤开发出牡丹籽粕中芍药苷类成分的提取纯化方法，为牡丹籽天然产物资源的综合开发利用提供科学根据。
　　采用30％乙醇对1kg的牡丹籽粕中的有效成分进行提取，先经大孔吸附树脂初步纯化，再以甲醇为流动相经制备HPLC精制得到6种主要成分，质量分别为142、310、61、549、127、71mg，峰面积百分比法检测其纯度均在95％以上，结合LC-MS和1H核磁共振的方法对其进行了结构鉴定，分别为6'-O-β-D-葡萄糖芍药内酯苷、芍药内酯苷、β-gentiobiosylpaeoniflorin、芍药苷、苯甲酸和芍药苷元。
　　以纯化的6种成分为对照品，建立了一种可用于牡丹籽粕中芍药苷类成分定量分析的梯度洗脱HPLC方法，6种芍药苷类物质在17min内实现良好分离。色谱条件为:色谱柱:Kromasil C18(200×4.6mm，5μm);流动相:A:500μL/L甲酸水溶液;B:甲醇含500μL/L的甲酸;梯度洗脱程序:(min/B％)0/40，4/40，8/60，15/60,16/40,20/40;流速:0.8mL/min;温度:30℃;DAD检测器，检测波长:230nm;进样量:10μL;峰面积外标法定量。用该方法对牡丹籽粕进行分析，各成分分离良好，重复测定的相对标准偏差在1.91％～2.72％之间，最低检出限为2.8ng～16.1ng之间，在进样量12.5ng～10000 ng范围内，线性回归方程的相关系数r介于0.9992～0.9999之间，加标回收率在93.0％～100.0％之间。
　　以牡丹籽粕中的4种主要成分（芍药苷、芍药内酯苷、6'-O-β-D-葡萄糖芍药内酯苷和β-gentiobiosylpaeoniflorin）为指标，优化了大孔吸附树脂法的纯化工艺。选用HPD-200A型树脂，最优的吸附条件为样液浓度8.0mg/mL，上样速度1/16BV（柱床体积）/min，上样量4.5BV，洗脱液乙醇浓度50％，洗脱流速1/16BV/min，洗脱体积为4BV。在此条件下纯化的产物中含有芍药苷32.3％，芍药内酯苷16.5％，6'-O-β-D-葡萄糖芍药内酯苷8.02％，β-gentiobiosylpaeoniflorin6.63％。

目录

声明

摘要

第一章 引言

1．1 我国牡丹资源及药用历史概况

1．2 牡丹的研究现状

1．2．1 牡丹皮的研究现状

1．2．2 牡丹花的研究现状

1．2．3 牡丹籽及牡丹籽油的研究现状

1．3 芍药苷类物质的研究现状

1．3．1 芍药苷类物质的生理活性及作用机理

1．3．2 芍药苷类物质的提取及纯化方法

1．3．3 芍药苷类物质的分析检测方法

1．4 本课题的研究意义和内容

第二章 牡丹籽饼粕中芍药苷类成分分析

2．1 材料与仪器

2．1．1 植物材料

2．1．2 试剂

2．1．3 仪器

2．2 试验方法

2．2．1 粗提液的制备

2．2．2 大孔吸附树脂初步纯化

2．2．3 制备HPLC分离纯化

2．2．4 HPLC色谱分析条件

2．2．5 LC-MS分析条件

2．2．6 1H-NMR分析

2．3 结果与分析

2．3．1 粗提液的成分分析

2．3．2 HPD-200A大孔吸附树脂分离

2．3．3 化合物1～6的分离纯化

2．3．4 1～6号化合物的结构分析

2．4 讨论

2．5 小结

第三章 牡丹籽粕中芍药苷类成分的HPLC分析方法

3．1 材料与仪器

3．1．1 植物材料

3．1．2 试剂

3．1．3 仪器

3．2 试验方法

3．2．1 样品前处理

3．2．2 HPLC分析条件

3．3 结果与分析

3．3．1 HPLC方法条件的选择

3．3．2 芍药苷类成分HPLC分析

3．3．3 方法的精密度试验

3．3．4 方法的回归方程、线性范围、最低检出限

3．3．5 方法的回收率试验

3．3．6 实际样品分析

3．4 小结

第四章 牡丹籽粕中芍药苷类成分的树脂纯化研究

4．1 材料与仪器

4．1．1 植物材料

4．1．2 试剂

4．1．3 仪器

4．2 试验方法

4．2．1 样液的制备

4．2．2 HPLC定量方法

4．2．3 树脂的预处理

4．2．4 树脂装柱步骤

4．2．5 树脂静态吸附量与解吸率的测定

4．2．6 静态吸附动力曲线

4．2．7 上样浓度对HPD-200A树脂吸附效果的影响

4．2．8 流速对HPD-200A树脂吸附效果的影响

4．2．9 乙醇浓度对洗脱效果的影响

4．2．10 洗脱液用量对洗脱效果的影响

4．2．11 树脂重复使用周期的考察

4．3 结果与分析

4．3．1 牡丹籽粕粗提液成分分析

4．3．2 树脂的筛选

4．3．3 静态吸附动力学曲线

4．3．4 上样浓度对HPD-200A树脂吸附效果的影响

4．3．5 上样速度对HPD-200A树脂吸附效果的影响

4．3．6 乙醇浓度对洗脱效果的影响

4．3．7 洗脱液用量对洗脱效果的影响

4．3．8 树脂重复使用周期的考察

4．4 讨论

4．5 小结

第五章 结论

参考文献

附录

作者简历

在读期间发表学术论文

致谢