荔枝壳贮藏过程中原花青素的稳定性及其胆固醇代谢调节作用

摘要

荔枝是亚热带代地区的主要特色水果，我国是荔枝的主产国。随着荔枝果汁、果酒和罐头等加工业的不断发展，荔枝果壳等副产物的数量不断增长，充分利用这一资源成为荔枝产业亟待解决的关键问题。项目组前期研究发现荔枝果壳含有丰富的原花青素等酚类物质，且其原花青素为自然界较少见的A型结构，通过动物实验发现其具有抗动脉粥样硬化的活性。但由于荔枝果壳原花青素包含不同连接方式和不同聚合度的多个化合物，其抗动脉粥样硬化作用活性差异及其作用机制尚不清楚。为此，本文在比较了不同贮藏温度下荔枝果壳中原花青素等酚类物质组成、含量及抗氧化活性的变化以确定其贮藏条件的基础上，通过建立小鼠Raw264.7巨噬泡沫细胞模型，分析荔枝果壳中原花青素A2、原花青素B2、表儿茶素等不同单体组分对巨噬泡沫细胞胆固醇代谢的调节作用，从调节巨噬细胞胆固醇稳态的角度探讨其抗动脉粥样硬化作用机制，为揭示其量效和构效关系提供基础。
　　（1）不同贮藏温度条件下荔枝果壳酚类构成普及抗氧化活性的变化：比较30℃和4℃贮藏条件下荔枝果壳总原花青素、总酚、总黄酮、总花色苷及其单体组成的含量变化，发现荔枝果壳在30℃下贮藏72 h，其酚类物质含量和抗氧化活性均显著下降（P＜0.05），其中总原花青素、总酚、总黄酮、总花色苷含量由84.42、116.95、97.64、1.73 mg/g DW下降至44.07、72.70、53.15、0.48 mg/g DW，分别下降47.80％、37.84%、45.56%、73.02%；其单体酚中表儿茶素、原花青素A2、原花青素B2、咖啡酸、槲皮素-3-O-芸香糖-7-O-α-L-鼠李糖苷、阿魏酸含量由9.83、17.61、4.71、0.76、1.63、0.82 mg/g DW下降至5.04、12.09、2.47、0.44、1.18、0.51 mg/g DW，分别下降48.73%、31.35%、47.56%、42.11%、27.61%、37.80%；其 ORAC和CAA抗氧化活性由1777.01μmolTE/g DW和100.89μmolQE/g DW下降至1360.70μmolTE/g DW和34.30μmolQE/g DW，分别下降23.43%和66.01%；但其酚类物质含量和抗氧化活性基本保持50%以上。在4℃贮藏7 d，其酚类物质含量和抗氧化活性亦显著下降（P＜0.05），其中总原花青素、总酚、总黄酮、总花色苷含量由84.42、116.95、97.64、1.73 mg/g DW下降至63.96、93.3、61.33、1.06 mg/g DW，分别下降24.24%、41.26%、37.19%、20.17%；其单体酚中表儿茶素、原花青素A2、原花青素B2、咖啡酸、槲皮素-3-O-芸香糖-7-O-α-L-鼠李糖苷、阿魏酸含量由9.83、17.61、4.71、0.76、1.63、0.82 mg/g DW下降至7.26、13.71、2.37、0.61、1.24、0.51 mg/g DW，分别下降19.74%、23.93%、37.80%、26.14%、22.15%、49.68%；其ORAC和CAA抗氧化活性由1777.01μmolTE/g DW和100.89μmolQE/g DW下降至1463.93μmolTE/g DW和41.67μmolQE/g DW，分别下降17.62%和58.70%；但其酚类物质含量和抗氧化活性亦基本保持50%以上，且荔枝果壳经4℃贮藏7 d后，其酚类物质含量和抗氧化活性基本高于30℃贮藏3 d。由此表明，低温（4℃）较常温（30℃）更有利于保护荔枝果壳中的原花青素等酚类物质，荔枝果壳在常温下仅适合短时间内贮藏，在低温下可较长时间内贮藏。
　　（2）巨噬泡沫细胞模型的建立：以Raw264.7巨噬细胞为研究对象，用30、50、80、100μg/mL四种不同浓度的ox-LDL刺激巨噬细胞诱导泡沫细胞形成，结果表明，用100μg/mL ox-LDL刺激巨噬细胞24 h后，油红O染色可见细胞内红色脂滴明显增多，细胞体积明显增大且伸出伪足，符合泡沫细胞形态学特征，且与正常细胞相比，总胆固醇（TC）含量显著增加，胆固醇酯/总胆固醇（CE/TC）大于50%，提示100μg/mL ox-LDL刺激巨噬细胞24 h可以成功诱导巨噬泡沫细胞形成。
　　（3）荔枝果壳原花青素单体组分对巨噬泡沫细胞胆固醇代谢的调节作用：比较不同浓度的原花青素A2、原花青素B2、表儿茶素3种单体对ox-LDL刺激的巨噬泡沫细胞胆固醇摄入和外流的影响，结果表明，3种原花青素单体组分均能抑制巨噬细胞对ox-LDL的摄入，在浓度为40μg/mL时，原花青素A2、原花青素B2、表儿茶素干预组其CE/TC的值最小，分别为17.75%、41.76%、36.40%；在低（10μg/mL）、中（20μg/mL）、高剂量（40μg/mL）三个不同剂量条件下，原花青素A2对巨噬细胞胆固醇摄入的抑制作用均显著强于原花青素B2和表儿茶素（P＜0.05），在中（20μg/mL）和高剂量（40μg/mL）条件下，表儿茶素对巨噬细胞胆固醇摄入的抑制作用强于原花青素B2。同时，3种原花青素单体组分亦均能促进泡沫细胞胆固醇外流，在浓度为40μg/mL时，原花青素A2、原花青素B2、表儿茶素干预组胆固醇外流率最大，分别为49.82%、31.22%、39.09%；在低（10μg/mL）、中（20μg/mL）、高剂量（40μg/mL）三个不同剂量条件下， 原花青素A2对泡沫细胞胆固醇外流的调节作用均显著强于原花青素B2和表儿茶素（P＜0.05），表儿茶素对泡沫细胞胆固醇外流的调节作用强于原花青素B2。由此表明，3种不同单体中，原花青素A2抑制巨噬细胞胆固醇摄入和促进泡沫细胞胆固醇外流活性最强，即其抗动脉粥样硬化活性最强，这可能与其结构中存在C2-O-C7键（A键）的结合有关。

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缩略图

第一章 前言

1.1 荔枝副产物的研究现状

1.2 原花青素概述

1.3 动脉粥样硬化概述

1.4 立题背景、研究意义和主要研究内容

第二章 不同贮藏条件下荔枝壳酚类构成谱及其抗氧化活性的变化

2.0 引言

2.1 材料与仪器

2.2 实验方案

2.3 结果与分析

2.4 讨论

第三章 巨噬泡沫细胞模型的建立

3.0 前言

3.1 材料与仪器

3.2 实验方法

3.3 结果分析

3.4 讨论

第四章 荔枝壳原花青素单体组分调节巨噬泡沫细胞胆固醇代谢研究

4.0 前言

4.1 材料与仪器

4.2 实验方法

4.3 结果分析

4.4 讨论

第五章 总结与创新点

5.1 总结

5.2 创新点

参考文献

致谢