中国大陆汉族人群别嘌呤醇严重不良反应与HLA_B*5801等位基因的相关性研究

摘要

研究背景：别嘌呤醇属于黄嘌呤氧化酶抑制剂，能有效降低血尿酸，是一种常见的处方药物，用于治疗痛风、急性尿酸肾病变及高尿酸血症。然而，别嘌呤醇容易引起各种形式的药物不良反应，从轻微的斑疹（maculopapular eruption，MPE）到严重的药物不良反应，甚至包括超敏综合征（hypersensitivity syndrome，HSS）、Stevens-Johnson综合征（Stevens-Johnson syndrome，SJS）和中毒性表皮坏死综合症（toxic epidermal necrolysis，TEN）。严重药物不良反应的临床表现是多种多样的。HSS通常会伴随着一些全身性反应，如发热、关节痛、嗜酸性粒细胞增多、淋巴结肿大以及皮肤的斑丘疹和皮肤剥脱的现象。SJS/TEN的皮肤损害通常开始于躯干逐渐向全身扩大，区别在于其严重程度及表皮受累的范围。SJS早期症状为突发的发热、咽喉痛，头痛等类似感冒症状，约持续1~3天。接下来则会快速的出现红斑或紫斑，皮肤的伤口会进展成表皮坏死。若受影响的皮肤占体表面积的10％以下称之为SJS。TEN有着相似的临床表现伴随着更广泛的表皮剥脱与坏死，达到30%~40%。别嘌呤醇的不良反应实际上是机体其对在体内的氧化产物氧化嘌呤醇（oxypurinol）产生的超敏反应，后者生物半衰期比前者明显延长，加上患者原来存在的肾功能受损，致使药物容易积蓄。
　　研究报道台湾汉族人群别嘌呤醇诱导的严重药物不良反应与 HLA-B*5801之间存在强烈的关联性。台湾学者调查了51例别嘌呤醇严重药物不良反应患者全部含有HLA-B*5801基因，但是在对照组及健康人群中分别只有15%及20%携带有HLA-B*5801，其优势比很突出。在欧洲及日本病人中也证实了之间存在关联性，但是关联性要比汉族人群中弱得多。
　　从药理学方面很难预测药物不良反应。最近随着基因多态性研究的进展，为探讨药物和基因组学之间的联系创造了机会。
　　最近药物基因组学和分子生物学研究进一步揭示遗传倾向及免疫介质对SJS及TEN发生的重要性。尽管先前认为Fas-FasL相互作用是触发角质形成细胞凋亡的主要效应器，然而最近研究显示一种由细胞毒性T细胞及NK细胞释放的细胞毒蛋白颗粒溶解素是调节广泛性角质形成细胞凋亡的开关。人类白细胞抗原（human leukocyte antigan，HLA）基因的单核苷酸多态性变异（single-nucleotide polymorphisms，SNPs）参与多种药物不良事件（adverse drug events，ADE），药物引起过敏反应的机制均与TCR、特定的MHC分子及药物三者之间的结合有关，药物或其代谢产物与肽链结合然后通过HLA-B分子连结角质形成细胞呈递到具有专一性TCR的CD8+T细胞，后者被活化，并增生和转化为效应细胞，释放出颗粒溶解素、穿孔蛋白及颗粒溶解酶B造成的表皮细胞凋亡坏死。HLA-B是人类最复杂的遗传多态系统，在不同种族或同一种族不同的群体中分布具体明显的种群特征，到目前为止没有关于中国大陆汉族人群别嘌呤醇严重药物不良反应与HLA-B*5801之间关联性的报道。因此，有必要对中国大陆汉族人群与别嘌呤醇严重不良反应之间的关联性进行研究。
　　研究目的：了解中国大陆汉族人群 HLA-B*5801等位基因的携带情况，并分析其与别嘌呤醇引起的严重皮肤不良反应的相关性。
　　方法：筛查对象均为国内户籍的汉族人，包括别嘌呤醇重症药疹的病人（A组）6例（其中SJS患者4例，TEN患者2例）、别嘌呤醇引起的斑丘疹型药疹（MPE）病人（B组）4例、连续服用别嘌呤醇超过6个月未出现过敏现象的病人（C组）20例和无药物过敏史且未服用过别嘌呤醇的健康人（D组）185例。采受检者静脉血分离白细胞，提取 DNA，用序列特异引物聚合酶链反应（PCR-SSP）检测样本的HLA-B*5801等位基因。
　　结果：HLA-B*5801基因阳性例数和频率分别为：A组（SJS和TEN病人）6/6（100%），B组（MPE病人）1/4（25%），C组2/20（10%），D组17/185（9.19%），别嘌呤醇重症药疹（SJS和TEN）病人的HLA-B*5801基因型频率明显高于其他组，其差异有统计学意义（c2=45.25，P<0.05）；别嘌呤醇诱发 MPE病人的HLA-B*5801基因型频率与非药疹组比较的差异无显著性意义（c2分别为1.14和0.68，P均＞0.05）。
　　结论：中国大陆汉族人群 HLA-B*5801的携带率较高，并与别嘌呤醇严重药物不良反应有强烈关联性，而HLA-B*5801与别嘌呤醇引起的MPE的关联性不大。建议汉族患者服用别嘌呤醇之前检测HLA-B*5801基因预测发生严重药物不良反应的风险。

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封面

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缩略词表

中文摘要

英文摘要

前 言

研究对象和方法

1 研究对象

2 标本采集及处理

3 主要实验设备

4 实验试剂

5实验方法

结 果

1 PCR-SSP检测HLA-B*5801基因的结果

2 S1、S2、S3、C1、C2扩增凝胶实验图谱

讨 论

结 论

本研究的创新之处

存在问题和展望

参考文献

综 述

攻读硕士学位期间完成和发表的论文

致谢

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