本发明涉及检验检疫领域,旨在提供一种检测猪病毒性腹泻症候群病原核酸的MLPA检测试剂盒。该试剂盒中包括:(1)反转录和预扩增混合液:反转录和预扩增引物的序列如SEQ ID NO:1~12所示;其中,反转录引物为12碱基随机引物;(2)多重连接探针混合液:其中,探针的序列如SEQ ID NO:13~24所示,通用引物的序列如SEQ ID NO:25~26所示;(3)MLPA缓冲液;(4)连接缓冲液A和B;(5)连接酶Ligase‑65;(6)PCR反应混合液,其包括序列表SEQ ID NO:25~26所示的通用引物;(7)SALSA聚合酶;(8)阴性对照;(9)阳性对照,包含6种猪病毒性腹泻症候群的病原的阳性对照质粒。与现有方法比较,本发明具有高通量、节省费用、特异性好、灵敏度高的优点。
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