一种高效获得T-DNA插入侧翼序列的方法及其应用

摘要

本发明涉及Transfer DNA(T‑DNA)插入真核生物基因组后，其相关插入位点侧翼序列信息获得的方法及其应用，属于生物技术研究领域。本发明在双元质粒T‑DNA区域的左边界(Left Border)或者右边界(Right Border)附近设计一条生物素标记的特异引物；利用该引物可以同时结合靶标序列片段以及链霉亲和素的特性，将含有T‑DNA插入的边界核酸序列分离并纯化；接着将一个已知序列的接头连接到纯化片段的5’端，并进行PCR扩增；最后将PCR序列克隆至载体测序，获得插入序列信息。和传统的iPCR和TAIL‑PCR相比，该方法可以显著提高鉴定T‑DNA插入位点的效率和准确率。