无毒性稻瘟病菌T-DNA插入区侧翼序列的克隆与分析

摘要

本文利用广泛无致病力，产孢正常且能进行有性杂交的野生型稻瘟病菌CY2，采用T-DNA插入构建了转化子库，然后，在水稻近等基因系上进行群体筛选，获取感病型病斑，单孢分离和接种确认共获得了7个分别对水稻近等基因系IRBL-3(Pi-i)、IRBL10(Pi-z5)、IRBL13(Pi-ta)、IRBL15(Pi-t)、IRBL17(Pi-sh)、IRBL21(Pi-t)、IRBL24(Pi-l9)致病的T23、T30、T33、T35、T37、T41及T44的突变体。以Hph基因作为探针，对获得7个致病相关突变体进行了Southern blotting分析，证明它们均为单拷贝的插入。采用改良的TAIL-PCR分离T-DNA插入区侧翼序列，扩增到了长度介于666～4761bp的7个DNA片段，运用DNAMAN软件及在线工具对所得到的序列进行了生物信息学分析。