家蚕中部丝腺生物反应器双启动子通用型质粒及其构建方法和应用

摘要

本发明公开了一种家蚕中部丝腺生物反应器双启动子通用型质粒及其构建方法和应用。获得丝胶蛋白1基因启动子、18s rRNA基因启动子、His 6序列、DDDDK、丝素轻链蛋白信号肽、丝素轻链基因3’末端序列、家蚕肌动蛋白基因A3启动子、EGFP基因和SV40的3’末端序列，然后再顺序连接构建成质粒，第一表达框包括A3启动子、EGFP基因和SV40序列，第二表达框包括丝胶蛋白1基因启动子、18s rRNA基因启动子、丝素轻链蛋白信号肽、His 6序列、DDDDK和丝素轻链基因3’末端序列，且在DDDDK和丝素轻链基因3’末端序列之间含有ApaI和NheI两个酶切位点。本发明质粒减少了构建donor质粒的工作量，提高了家蚕丝腺生物反应器工作效率，提高了外源蛋白的表达量。