一种2-酮基葡萄糖酸激酶的优化基因、表达载体及应用

摘要

本发明公开了一种2‑酮基葡萄糖酸激酶的优化基因、表达载体及应用，属于生物工程技术领域。本发明2‑酮基葡萄糖酸激酶的优化基因如SEQ ID NO.3所示。以穿梭表达质粒pPICZαB为载体，采用酶切和无缝克隆技术对其进行无分泌表达功能的定向化改造，并将经密码子偏向性优化的2‑酮基葡萄糖酸激酶基因(kguK)插入到载体启动子AOX1的下游。以毕赤酵母(Pichia pastoris)X‑33为宿主菌，通过电转化和博来霉素抗性平板筛选获取具有高拷贝kguK基因且稳定表达具有生物活性的KguK的重组菌株P.pastoris X/pPICZ(Δα)B‑kguK。经细胞破碎、亲和层析、透析和超滤浓缩等步骤，可以获得比活力达700U/g以上的KguK。