一种高转糖苷活性低水解活性的β-半乳糖苷酶双点突变体及其制备方法

摘要

本发明提供一种兼具高转糖苷活性、低水解活性的β‑半乳糖苷酶双点突变体，该突变体是对β‑半乳糖苷酶BgaB的E303和F341两个位点进行定点突变，其中，E303点位由原谷氨酸Glu突变为半胱氨酸Cys，F341点位由原苯丙氨酸Phe突变为丝氨酸Ser，然后将双点突变体经KI氧化处理所得。本发明还涉及所述双点突变体的构建方法及应用。本发明以嗜热脂肪芽孢杆菌来源β‑半乳糖苷酶BgaB为功能改造对象，所得的双点突变体催化底物乳糖能够获得大于二糖的低聚糖混合物，合成量达到9.5％，且降低了其对合成产物的降解能力。此外，本发明的突变体适用于中性、高温度条件下催化乳糖水解与低聚半乳糖合成。