声明
摘要
符号及缩写词
1．1乳酸菌
1．1．1嗜热链球菌
1．1．2酸奶及其营养价值
1．2 B-半乳糖苷酶
1．3低聚半乳糖
1．3．1低聚半乳糖的生理功能
1．3．2低聚半乳糖的工业生产
1．4乳酸菌表面展示系统的建立
1．4．1表面展示的基本原理及应用
1．4．2嗜热链球菌表面展示系统的研究进展
1．4．3烯醇化酶
1．5立题背景及意义
1．6本论文研究内容
第二章嗜热链球菌中高活性β-半乳糖苷酶的筛选
2．1实验材料和方法
2．1．1菌株
2．1．2培养基与试剂
2．1．3主要实验仪器
2．1．4实验方法
2．2结果
2．2．2嗜热链球菌β-半乳糖苷酶活性的检测
2．2．3嗜热链球菌β-半乳糖苷酶转糖基活性检测
2．2．4嗜热链球菌发酵液中的半乳糖残留量
2．3讨论
第三章β-半乳糖苷酶BgaQ的酶学性质研究及其转糖基活性条件的优化
3．1实验材料及方法
3．1．1实验菌株与质粒
3．1．2培养基及试剂
3．1．3实验仪器
3．1．4实验方法
3．2结果
3．2．1表达质粒pET28a(+)-bgaQ的构建
3．2．2 SDS-PAGE凝胶电泳
3．2．3 BgaQ酶学性质的研究
3．2．4 BgaQ体外转糖基活性条件的优化
3．3讨论
第四章定点突变提高β-半乳糖苷酶的转糖基活性
4．1实验材料及方法
4．1．1菌株及质粒
4．1．2培养基及试剂
4．1．3实验方法
4．2结果
4．2．1 BgaQ的生物信息学分析
4．2．2突变蛋白mBgaQ的诱导表达及纯化
4．2．3 mBgaQ酶学性质的研究
4．2．4 mBgaQ转糖基活性研究
4．2．5低浓度乳糖条件下BgaQ和mBgaQ催化生成GOS的时间曲线
4．3讨论
第五章基于烯醇化酶建立嗜热链球菌的表面展示系统
5．1材料与方法
5．1．1实验菌株及质粒
5．1．2培养基
5．1．3试剂
5．1．4实验仪器
5．1．5实验方法
5．2结果
5．2．1嗜热链球菌EnoM的序列同源性分析
5．2．2表达载体pET28a(+)-gfp和pET28a(+)-gfp-enoM的构建
5．2．3 SDS-PAGE检测纯化结果
5．2．4 EnoM锚定功能的验证
5．2．5 EnoM锚定特异性的研究
5．2．6不同处理条件对EnoM锚定效率的影响
5．2．7 β-半乳糖苷酶的表达与展示
5．2．8 GFP蛋白在嗜热链球菌中的靶向表达
5．3讨论
全文总结与展望
参考文献
攻读硕士期间发表的论文
致谢
