水生栖热菌Thermus aquaticus FL-03嗜热麦芽糖转葡萄糖基酶基因的克隆及表达

摘要

以水生栖热菌FL-03菌株的基因组DNA为模板,PCR扩增编码嗜热麦芽糖转葡萄糖基酶的基因(MalQ)片段,克隆至pET-28a(+)原核表达载体,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定.重组蛋白经70℃钝化离心除杂蛋白后,经SDS-PAGE检测,可见单一条带.纯化酶液以10%麦芽糖为底物,经TLC法分析表明该酶具有转葡萄糖基的活性,比活力提高近5倍,且活力回收率达70%,具有重要的工业应用前景.