酿酒酵母单一含硒蛋白的制备方法

摘要

本发明公开了一种酿酒酵母单一含硒蛋白的制备方法。步骤如下：克隆酿酒酵母中含有半胱氨酸的蛋白相对应的基因，连接到原核表达载体上，转入原核表达宿主；构建好的菌株活化后转接到新鲜的LB培养基中培养，冰上冷却，然后加入终浓度为0.1‑0.5mM的IPTG，培养10h，加入终浓度为0.5‑2.5mM的硒源培养0.5‑1h；收集菌体，去除上清，然后用BindingBuffer重悬细胞，超声破碎，4℃，6500‑8500G离心20‑40min，取上清，用镍柱纯化目的蛋白，洗脱液为Elution Buffer。本发明获得了酿酒酵母单一含硒蛋白，纯化后的蛋白纯度高，成本廉价，操作简单。