包含N-乙酰基-L-色氨酸作为有效成分的牛用饲料添加剂

摘要

本申请涉及一种包含N‑乙酰基‑L‑色氨酸(NALT)的牛用饲料添加剂组合物，更具体地，涉及：一种用于降低牛的温度应激、增加平均日增重并增加采食量的饲料添加剂组合物，所述饲料添加剂组合物包含N‑乙酰基‑L‑色氨酸作为有效成分；一种包含所述牛用饲料添加剂组合物的饲料；和一种用于降低牛的温度应激、增加平均日增重并增加采食量的方法，所述方法包括给牛饲喂包含N‑乙酰基‑L‑色氨酸作为有效成分的牛用饲料添加剂组合物或饲料。

说明书

技术领域

本公开涉及一种包含N-乙酰基-L-色氨酸(NALT)作为活性成分的牛用饲料添加剂组合物，更具体地，涉及：一种用于降低牛的温度应激、增加牛的平均日增重并增加牛的采食量的饲料添加剂组合物，所述饲料添加剂组合物包含N-乙酰基-L-色氨酸作为有效成分；一种包含所述牛用饲料添加剂组合物的饲料；和用于降低牛的温度应激、增加牛的平均日增重以及增加牛的采食量的方法，所述方法包括给牛饲喂包含N-乙酰基-L-色氨酸作为有效成分的牛用饲料添加剂组合物或饲料。

背景技术

与其他环境相比，热环境非常重要，因为它直接影响恒温动物牛的体内平衡。针对牛的热环境是指温度、风速、太阳辐射能、相对湿度、产热、谷仓地板的材料和条件、屋顶的隔热程度、繁殖密度等。其中，根据国家动物科学研究所的报告，最重要的因素是温度，并且已知用于生产牛(例如韩国本土牛)的较低临界温度为-10℃。

在已知的针对牛的最佳温度范围内，产热被几乎恒定地保持在低水平，而生产率被几乎恒定地保持在高水平。相反，温度偏离最佳温度范围越多，生产率下降得越多。在生产环境的临界温度范围之外的温度下，生产率会大大降低。在全球变暖的影响下，温带地区的气候变得更加两极分化，导致夏天更热，冬天更冷。由于例如这样的原因，预计在冬季的低温环境和夏季的高温环境下，反刍动物的生产力下降将加速。

L-色氨酸是反刍动物中在营养上重要的必需氨基酸(EAA)之一，并且是蛋白质合成的必要组成部分。通常，L-色氨酸在代谢、生理反应、生长和器官发育中起关键作用。L-色氨酸缺乏症可能对采食量和生长性能产生不利影响。同时，由于在温度应激条件下，例如冷应激和热应激条件下牛的生产力下降，因此需要补充作为必需氨基酸的L-色氨酸，以最小化生产力的下降。

当向反刍动物补充L-色氨酸时，L-色氨酸被用于瘤胃微生物中，导致微生物蛋白合成增加。然而，因此，不能使用大量产生的氨，并且饲料蛋白质的效率降低。因此，需要以瘤胃旁路氨基酸的形式饲喂L-色氨酸，瘤胃旁路氨基酸不会被瘤胃中的微生物降解，而是会被反刍动物的小肠降解和吸收。通常，为了保护饲料蛋白质免受瘤胃中微生物的侵害，已经研究了各种物理化学处理方法，例如热处理、甲醛处理(Subuh等,Animal Feed Scienceand Technology,57卷(3),257–265)、单宁处理、乙醇处理和木质素磺酸盐处理，以及用脂肪酸与pH敏感性聚合物的混合物或不饱和脂肪酸与矿物质的混合物涂覆表面的方法。

发明内容

技术问题

由于大力开发饲料添加剂以最小化牛生产率的下降，本发明人发现，通过饲喂具有乙酸酯和L-色氨酸的共轭形式的N-乙酰基-L-色氨酸，降低了牛的温度应激，并且增加了牛的平均日增重和采食量，从而完成了本公开。

技术方案

本公开的目的是提供一种包含N-乙酰基-L-色氨酸作为活性成分的牛用饲料添加剂组合物。

本公开的另一个目的是提供一种包含牛用饲料添加剂组合物的饲料。

本公开的另一个目的是提供降低牛的温度应激、增加牛的平均日增重以及增加牛的采食量的方法，所述方法包括给牛饲喂包含N-乙酰基-L-色氨酸作为有效成分的饲料添加剂组合物或饲料。

公开的有利效果

根据本公开的N-乙酰基-L-色氨酸(NALT)降低了牛的温度应激并增加了牛的平均日增重和采食量，因此可以有效地用于饲料添加剂组合物或饲料中作为活性成分。

具体实施方式

在下文中，将详细描述本公开。同时，在本公开中公开的描述和实施方式各自可以在本文中应用于不同的描述和实施方式。换句话说，在本公开中公开的各个组成部分的所有组合都包括在本发明的范围内。此外，本公开的范围不应由以下提供的详细描述所限定。

用于实现上述目的的本公开的一方面提供了一种牛用饲料添加剂组合物，其包含N-乙酰基-L-色氨酸(NALT)作为活性成分。

具体地，本公开的牛用饲料添加剂组合物可以包含N-乙酰基-L-色氨酸或其盐。

如本文所用，术语“N-乙酰基-L-色氨酸(NALT)”是指具有由以下式1表示的结构的化合物。尽管已知N-乙酰基-L-色氨酸具有各种性质，例如对大脑、脊髓和神经损伤的治疗作用，以及与硫酸镁一起对蛋白质氧化的预防作用，但尚未报道包含NALT的饲料对降低牛的温度应激以及增加牛的平均日增重和采食量的作用，该作用被本发明人首先确定了。

式1

鉴于本公开的目的，可以使用N-乙酰基-L-色氨酸，而对其来源没有限制，并且可以使用本领域公知的任何方法来进行N-乙酰基-L-色氨酸的制备。

术语“L-色氨酸”是在反刍动物中在营养上重要的必需氨基酸(EAA)之一，并且是蛋白质合成的必需组分。L-色氨酸的代谢产物可通过调节营养物质的代谢而使器官保持体内平衡，并影响动物的生长、发育、繁殖和健康。此外，作为用作神经递质的血清素的前体的L-色氨酸可以通过穿过血脑屏障后调节情绪行为来缓解应激。此外，已知作为褪黑激素和烟酸的前体的L-色氨酸具有抗氧化作用；促进缩胆囊素(CCK)的分泌，缩胆囊素是小肠中的胃肠激素；并通过分泌和活化胰腺α-淀粉酶来提高淀粉的消化率。

在本公开中，N-乙酰基-L-色氨酸可以是瘤胃保护性的。如本文所用，术语“瘤胃保护性的”是指营养物质被加工以在小肠中降解和吸收而不会在反刍胃中被微生物酶降解，并且也被称为瘤胃旁路。术语“反刍胃”是指在一些偶蹄目动物中发现的一条特殊的消化道，其被分为四个腔室用于所谓的反刍，即瘤胃、网胃、重瓣胃和皱胃。将摄取物回流并重新咀嚼回流摄取物以进一步将其分解的过程称为反刍，而能够进行该过程的胃为反刍胃。由于微生物生活在反刍胃中，所以反刍动物具有消化植物纤维素(通常是其他动物无法消化的)的能力，以产生能量。

具有乙酸酯和L-色氨酸的缀合物形式的本公开的N-乙酰基-L-色氨酸是瘤胃保护性的，使得L-色氨酸在小肠中被吸收而不会被反刍胃中的微生物酶降解。

根据本公开的N-乙酰基-L-色氨酸的量可以由本领域的普通技术人员考虑目标动物、目标动物的种类和体重、饲喂时间、饲喂类型和饲喂目的等来确定。饲料，喂养目的等。具体地，基于饲料的总干重，N-乙酰基-L-色氨酸的量可以在0.01％(w/w)至3.0％(w/w)、0.01％(w/w)至2.0％(w/w)、0.01％(w/w)至0.1％(w/w)、0.05％(w/w)至3.0％(w/w)、0.05％(w/w)至2.0％(w/w)或0.05％(w/w)至1.5％(w/w)的范围内，更具体地为0.05％(w/w)至1.0％(w/w)，但不限于此。

如本文所用，术语“牛”是指作为牲畜饲养的公牛、奶牛、肉用牛等。如本文所用，术语“肉牛”是指作为牲畜饲养的那些之中为肉类生产而饲养的牛。在本公开中，肉牛是用于肉类生产的牛，并且无论品种、性别等如何都包括在本公开的范围内。更具体地，肉牛可以是韩国本土牛，但不限于此。

如本文所用，术语“饲料添加剂”是指为了提高目标对象的生产率或整体健康的目的或用于特定用途而添加到饲料中的物质，但不限于此。此外，饲料添加剂可以是在牲畜和鱼饲料法案控制下的辅助性饲料。

除N-乙酰基-L-色氨酸或其盐外，本公开的饲料添加剂组合物还可包含核苷酸、氨基酸、钙、磷酸和有机酸以增强目标对象的生产率或整体健康，但不限于此。

如本文所用，术语“盐”是指由通过静电吸引结合的阳离子和阴离子组成的物质，并且通常可以是金属盐、与有机碱形成的盐、与无机酸形成的盐、与有机酸形成的盐、与氨基酸形成的盐等。例如，金属盐可以是碱金属盐(例如钠盐和钾盐)、碱土金属盐(例如钙盐、镁盐和钡盐)、铝盐等；所述与有机碱形成的盐可以是与三乙胺、吡啶、甲基吡啶、2,6-二甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、环己胺、二环己胺、N,N-二苄基乙二胺等形成的盐；所述与无机酸形成的盐可以是与盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等形成的盐；所述与有机酸形成的盐可以是与甲酸、乙酸、三氟乙酸、邻苯二甲酸、富马酸、草酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、琥珀酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等形成的盐；所述与氨基酸的盐可以是与碱性或酸性氨基酸形成的盐，其中，所述与碱性氨基酸形成的盐可以为与精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸等形成的盐，所述与酸性氨基酸形成的盐可以是与天冬氨酸、谷氨酸等形成的盐。

在本公开中，饲料添加剂组合物可以用于降低温度应激。饲料添加剂组合物可以是用于降低温度应激的肉牛用饲料添加剂组合物。

如本文所用，术语“温度应激”是指牛的生产率根据温度变化而下降，特别是在最佳温度范围之外的温度下或由于突然的温度变化而导致的牛生产率的下降，并且可以是冷应激或热应激，但不限于此。具体地，冷应激可以是在低于最佳温度范围的温度下、在低于较低临界温度的温度下或由于突然的温度降低所引起的应激，而热应激可以是在高于较高最佳温度范围的温度下、在高于较高临界温度的温度下、或者由于突然的温度升高所引起的应激，但不限于此。引起冷应激的温度可以是低于+10℃的温度，或-50℃至+10℃、-40℃至+10℃、-30℃至+10℃、-20℃至+10℃、-10℃至+10℃或-10℃至0℃的温度，但不限于此。引起热应激的温度可以是高于10℃、15℃或20℃的温度，或10℃至50℃、15℃至50℃、20℃至50℃、30℃至50℃、10℃至40℃、15℃至40℃、20℃至40℃、30℃至40℃、15℃至35℃或20℃至35℃的温度，但不限于此。可以基于牛的平均日增重和采食量的增加来评价温度应激的降低，但不限于此。

根据国家畜牧研究所的报告，韩国本土牛的最佳温度范围和临界温度如表1所示。已知韩国本土牛的繁殖的较低临界温度为-10℃。

表1

韩国本土牛的最佳温度范围和临界温度

在本公开的一个具体实施方式中，通过将牛例如肉牛暴露于温度应激环境中来鉴定平均日增重和采食量的增加。在冷应激条件下，适应时段(第0-6天)的平均温度为4.3℃，实验时段的平均温度在-6.2℃至4.2℃的范围内，整个实验时段的平均温度(第7–48天)为-1.0℃。实验时段的平均温度保持在比适应时段的平均温度低的水平(表4)。

在热应激条件下，使用温湿度指数(THI)指示温度，该温湿度指数是热应激的参考指数。前三周期间的平均THI超过80，接下来的四周期间的平均THI超过72(表10)。

在本公开中，饲料添加剂组合物可以用于增加平均日增重。饲料添加剂组合物可以是用于增加平均日增重的肉牛用饲料添加剂组合物。饲料添加剂组合物可以是针对在热或冷应激条件下肉牛的平均日增重(平均日增重量)的饲料添加剂组合物。具体地，饲料添加剂组合物可以是用于增加饲料转化率(通过将平均日增重除以采食量而获得的值)为3至10的肉牛的平均日增重的饲料添加剂组合物。更具体地，饲料添加剂组合物可以是用于在热或冷应激条件下提增加饲料转化率为3至10的肉牛的平均日增重的饲料添加剂组合物。具体地，饲料添加剂组合物可以是用于增加具有比未饲喂NALT的肉牛低50％至80％的饲料转化率的肉牛平均日增重的饲料添加剂组合物。更具体地，饲料添加剂组合物可以是用于在热或冷应激条件下将增加具有比未饲喂NALT的肉牛低50％至80％的饲料转化率的肉牛的平均日增重的饲料添加剂组合物。

在本公开的一个具体实施方式中，当在冷应激条件下给牛饲喂本公开的包含NALT作为活性成分的饲料添加剂组合物时，在NALT处理组的总重量变化和对照组的总重量变化之间没有观察到统计学上的显著差异。但是，作为将从实验开始日(第0周)到实验中点(第4周)的平均日增重(ADG)与从实验中点(第4周)到实验的最后一天(第7周)的平均日增重(ADG)进行比较的结果，与对照相比，观察到NALT处理组(平均日增重(ADG)为0.753(p＝0.0301)和0.766(p＝0.0003))具有统计学上的显著差异(表5)。

在本公开的一个具体实施方式中，当在热应激条件下给牛饲喂本公开的包含NALT作为活性成分的饲料添加剂组合物时，与对照相比，在NALT处理组中观察到增加体重的效果。特别地，确认了在THI为约80，即在热应激条件下的时段期间，与对照的平均日增重相比，NALT处理组的平均日增重显著增加(表11)。

当在温度应激环境中给牛饲喂本公开的包含NALT作为活性成分的饲料添加剂组合物时，饲料转化率(是通过将平均日增重除以采食量而获得的值)可以在1至13、1至10、1至8、1至6、1至5、2至10、2至8、2至6、2至5、3至10、3至8、3至6或3至5的范围内。同时，基于此，当温度应激环境中给牛饲喂本公开的包含NALT作为活性成分的饲料添加剂组合物时，与未饲喂NALT的肉牛相比，饲料转化率降低了40％至80％、40％至70％、50％至80％、50％至70％或60％至70％。

在本公开中，饲料添加剂组合物可以用于增加牛的采食量。饲料添加剂组合物可以是用于增加采食量的肉牛用饲料添加剂组合物。饲料添加剂组合物可以是用于在热或冷应激条件下增加肉牛的采食量的饲料添加剂组合物。具体地，饲料添加剂组合物可以是用于在热或冷应激条件下将肉牛的采食量增加至少3％至8％(与未饲喂NALT的肉牛相比)的肉牛用饲料添加剂组合物。

在本公开的一个具体实施方式中，当在冷应激条件下给牛饲喂本公开的包含NALT作为活性成分的饲料添加剂组合物时，在适应时段(第0-6天)期间NALT处理组的摄入量和适应时段期间对照的摄入量之间未观察到统计学上的显著差异(p＝0.0883)。此外，尽管在第7-41天的实验时段期间NALT处理组的采食量与对照组同一实验时段期间的采食量之间未观察到统计学上的显著差异，但与相同实验时段期间对照的采食量相比，NALT处理组在第42-48天的实验时段期间的采食量增加了约1.02kg，表明两者之间存在统计学上的显著差异(p＝0.0384)。此外，作为计算了整个实验时段期间(第7-48天)的每头平均采食量的结果，NALT处理组表现出9.86kg/天/头的平均采食量，这比对照(9.43kg/天/头)的平均采食量高约4.6％，表明两者之间存在统计学上的显著差异(p＝0.0119)(表6)。

在本公开的一个具体实施方式中，当在热应激条件下给牛饲喂本公开的包含NALT作为活性成分的饲料添加剂组合物时，对照的平均采食量为13.38kg/天，而NALT处理组的的平均采食量13.62kg/天，表明两者之间没有统计学上的显著差异。但是，已经确认，在THI为80或更高下，与对照的采食量相比，NALT处理组的采食量显著增加(表12)。基于此，当在温度应激环境中给牛饲喂本公开的包含NALT作为活性成分的饲料添加剂组合物时，采食量可以增加至少2％至10％、2％至8％、4％至10％、3％至8％、4％至10％、3％至7％或4％至7％。

在本公开中，可以通过测量所提供的饲料总量和剩余量来计算肉牛的采食量，但不限于此。

在本公开中，饲料添加剂组合物可以用于降低与腰部组织中的脂肪代谢有关的蛋白质的表达。饲料添加剂组合物可以是用于降低与腰部组织中的脂肪代谢有关的蛋白质的表达的肉牛用饲料添加剂组合物。饲料添加剂组合物可以是用于在热或冷应激条件下降低与肉牛的腰部组织中的脂肪代谢有关的蛋白质的表达的饲料添加剂组合物。具体地，饲料添加剂组合物可以是用于降低与牛的腰部组织中的脂肪代谢有关的基因(PPARr、CEBPa和FABP4中的至少一种)的表达的饲料添加剂组合物。更具体地，饲料添加剂组合物可以是用于在热或冷应激条件下降低与牛的腰部组织中的脂肪代谢有关的基因(PPARr、CEBPa和FABP4中的至少一种)的表达的饲料添加剂组合物。

在本公开的一个具体实施方式中，当在冷应激条件下给牛饲喂本公开的包含NALT作为活性成分的饲料添加剂组合物时，与NALT处理组的腰部组织中的肌肉代谢相关的基因的表达和与对照的腰部组织中的肌肉代谢相关的基因的表达没有显示出在统计学上的显著差异，但与NALT处理组的腰部组织中的脂肪代谢相关的基因(PPARr、CEBPa和FABP4)的表达比与对照的腰部组织中的脂肪代谢相关的所述基因的表达更低(表8)。

本公开的另一个目的是提供一种包含牛用饲料添加剂组合物的饲料。

具体地，本公开的饲料可包含牛用饲料添加剂组合物，该牛用饲料添加剂组合物包含N-乙酰基-L-色氨酸或其盐。

在这方面，对“N-乙酰基-L-色氨酸”、“牛”、“肉牛”、“饲料添加剂”和“瘤胃保护性的”的描述如以上所提供。

如本文所用，术语“饲料”是指供个体食用、摄取和消化的或适合其的任何天然的或人造的饮食、一种膳食或膳食的成分。

对饲料的类型没有特别限制，并且也可以使用本领域中通常使用的任何饲料。饲料的非限制性示例可以包括植物饲料，例如谷物、根茎类植物、食品加工副产物、藻类、纤维、药物副产物、油、淀粉、葫芦科植物或谷物的副产物；以及动物饲料，例如蛋白质、无机物质、油脂、矿物质、单细胞蛋白质、浮游生物或食品。这些饲料可以单独使用或以其至少两种的组合使用。

本公开的另一个方面提供了降低牛的温度应激的方法，所述方法包括给牛饲喂包含N-乙酰基-L-色氨酸作为活性成分的牛用饲料添加剂组合物或饲料。具体地，提供了一种降低肉牛的温度应激的方法，所述方法包括以下步骤：给肉牛饲喂包含N-乙酰基-L-色氨酸作为活性成分的肉牛用饲料添加剂组合物或饲料。

此外，本公开的降低牛的温度应激的方法可以包括以下步骤：给牛饲喂包含N-乙酰基-L-色氨酸或其盐的牛用饲料添加剂组合物或饲料。

本公开的另一方面提供了一种增加牛的平均日增重的方法，所述方法包括给牛饲喂包含N-乙酰基-L-色氨酸作为活性成分的牛用饲料添加剂组合物或饲料。具体地，提供了一种增加肉牛的平均日增重的方法，所述方法包括以下步骤：给肉牛饲喂包含N-乙酰基-L-色氨酸作为有效成分的肉牛用饲料添加剂组合物或饲料。

此外，增加牛的平均日增重的方法可以包括给牛饲喂N-乙酰基-L-色氨酸或其盐。

本公开的另一方面提供了一种增加牛的采食量的方法，所述方法包括给牛饲喂包含N-乙酰基-L-色氨酸作为活性成分的牛用饲料添加剂组合物或饲料。具体地，提供了一种增加肉牛的采食量的方法，所述方法包括以下步骤：给肉牛饲喂包含N-乙酰基-L-色氨酸作为活性成分的肉牛用饲料添加剂组合物或饲料。

而且，根据本公开的增加牛的采食量的方法可以包括给牛饲喂N-乙酰基-L-色氨酸或其盐的步骤。

在本公开中，提供了一种降低与牛的腰部组织中的脂肪代谢有关的蛋白质的表达的方法，所述方法包括给牛饲喂包含N-乙酰基-L-色氨酸作为有效成分的牛用饲料添加剂组合物或饲料。具体地，提供了一种降低与肉牛的腰部组织中的脂肪代谢有关的蛋白质的表达的方法，所述方法包括以下步骤：给肉牛饲喂包含N-乙酰基-L-色氨酸作为活性成分的肉牛用饲料添加剂组合物或饲料。

此外，降低与牛的腰部组织中的脂肪代谢有关的蛋白质的表达的方法可以包括以下步骤：给牛饲喂包含N-乙酰基-L-色氨酸或其盐的牛用饲料添加剂组合物或饲料。

在这方面，对“N-乙酰基-L-色氨酸”、“肉牛”、“牛”、“饲料添加剂”、“瘤胃保护性的”和“饲料”的描述如以上所提供。

牛用饲料添加剂组合物中所含的N-乙酰基-L-色氨酸的量如上所述。

这些方法可以用本领域众所周知的饲养管理技术来执行，并且特别地，可以每天在特定时间饲喂饲料，但不限于此。此外，对所提供的饲料的量没有特别限制。

实施例

在下文中，将参考以下实施例更详细地描述本公开。然而，仅给出以下示例以对本公开进行举例说明，而本公开的范围不限于此。

在热或冷应激条件下，鉴定了N-乙酰基-L-色氨酸(NALT)用于牛，例如用作牛的饲料时的功效。

A.鉴定冷应激条件下NALT的功效

实施例1.实验动物、实验饲料和实验方法

实施例1-1实验用动物

在本公开中，选择并使用了8个韩国本土肉用牛(平均8.3±0.72个月大)。

如表2所示，测量了前哨动物的初始体重，并将这些肉用牛分配给成对照组和NALT处理组(0.1％NALT)，每组4个肉用牛，从而在两者之间不显示统计学上的显著差异。

表2

初始体重的比较

实施例1-2饲养实验饲料

饲喂不含抗生素的总混合口粮(TMR,Nonghyup Feed Co.,Ltd.,Yangju-si,韩国)作为基础饮食。对储存在-20℃的基础饮食的化学组成(水分、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分等)和氨基酸(19种)进行了分析，结果示于表3。

表3

基础饮食的化学组成和氨基酸

实施例1-3设计实验方法和统计学分析

在通过对初始体重的统计学分析将动物分组之后，在实验时段期间，将动物在1.0×1.5m

同时，通过统计学比较和分析对照组和NALT处理组之间的显著差异，获得了生长性能分析(体重和平均采食量)和腰部组织基因分析的结果，并且通过取决于NALT处理、实验时段(天数)和相互作用(处理×天数)的统计学比较和分析，获得了血液学分析的结果。这些数值表示为平均值，并使用JMP 5.0软件包(SAS Institute Inc.,Cary,NC,美国)使用Student's t检验在5％的水平上进行了显著性检验。

实施例2温度和相对湿度的分析

在1周的适应时段和6周的实验时段期间，使用便携式温湿度计每天记录温度(℃)和相对湿度(％)。使用在整个实验时段期间记录的温度和相对湿度，计算每周的平均温度和平均相对湿度。

平均温度和平均相对湿度的变化如表4所示。适应时段(第0-6天)期间的平均温度为4.3℃，实验时段期间的平均温度在-6.2℃至4.2℃的范围内，与适应时段的平均温度相比较低。此外，整个实验时段期间(第7-48天)的平均温度为-1.0℃。

表4

在整个实验时段期间平均温度和平均相对湿度的变化

实施例3体重分析

在提供早晨饲料之前，对前哨动物的初始体重(第0天)、中间体重(第27天)和结束重量(第48天)进行了测量，即总计三次。前哨动物的平均日增重(平均日增重量，ADG)是用初始体重和中间体重之间以及中间体重和最终体重之间的体重之差除以实验的总天数计算的。

对照组和NALT处理组的体重变化的分析结果如表5所示。作为在实验中点(第27天)和实验的最后一天(第48天)测量前哨动物体重变化的结果，在NALT处理组的总体重变化和对照组的总体重变化之间没有观察到统计学上的显著差异。但是，作为将从实验开始日(第0天)到实验中点(第27天)的平均日增重(ADG)与从实验中点(第27天)到实验的最后一天(第48天)的平均日增重(ADG)进行比较的结果，与对照(未使用NALT处理)相比，观察到NALT处理组(平均日增重(ADG)为0.753(p＝0.0301)和0.766(p＝0.0003))具有统计学上的显著差异。此外，作为比较相同实验时段期间的饲料转化率(FCR)的结果，确认了对照组和NALT处理组的饲料转化率(FCR)分别为13.3(p＝0.035)和4.82(p<0.001)，表明通过供应NALT提高了饲料效率。这表明，与对照相比，NALT处理组的饲料效率提高了，因为NALT处理组的饲料转化率为37％，与对照相比降低了63％。(饲料转化率是通过将平均日增重除以采食量而获得的值，而饲料转化率越低表示饲料效率越高。)

表5

根据NALT饲喂的体重变化

实施例4.采食量的分析

通过测量每天中所提供的饲料总量和剩余量来计算每个前哨动物的采食量。

对照组和NALT处理组的采食量变化的分析结果如表6所示。在适应时段(第0-6天)期间NALT处理组的采食量和在适应时段期间对照的采食量之间没有观察到统计学上的显著差异(p＝0.0883)。此外，尽管在第7-41天的实验时段期间NALT处理组的采食量与在同一实验时段期间对照的采食量之间没有观察到统计学上的显著差异，但与相同实验时段期间的对照的采食量相比，观察到在第42-48天的实验时段期间NALT处理组的采食量的统计学上的显著差异(p＝0.0384)，NALT处理组的采食量增加了约1.02kg。此外，作为计算整个实验时段期间(第7-48天)的每头平均采食量的结果，与对照的平均采食量(9.43Kg/天/头)相比，NALT处理组的平均采食量(9.86Kg/天/头)增加了约4.6％(p＝0.0119)，表明具有统计学上的显著差异。

表6

根据NALT饲喂的采食量变化

实施例5.血液学分析

在实验的起始日(第0周)、实验的中点(第4周)和实验的最后一天(第7周)，在提供饲料之前，从每只前哨动物的颈静脉收集血液，并添加到真空容器中(Becton Dickinson,Franklin Lakes,NJ,美国)。使用VetScan HM2血液学系统(Abaxis,Union City,CA,美国)进行血液学分析。

对照组和NALT处理组的血液学分析结果如表7所示。，在除单核细胞外的所有血液学指标方面，在对照组和NALT处理组之间均未观察到统计学上的显著差异，并且发现所有值都在正常范围内。

表7

根据NALT饲喂的血液学性质的变化

实施例6.与腰部组织发育有关的基因表达分析

使用大型动物用活检枪(TNT Research Co.,Ltd.,Gyeonggi-do,韩国)，在实验的最后一天(第48天)获得前哨动物的腰部组织样品，添加到2mL管中，并在液氮中温育。从每个组织样品提取RNA后，进行实时PCR以分析与每个动物的腰部组织的肌肉代谢(MYF6、MyoD和肌间线蛋白)和脂肪代谢(PPARr、CEBPa和FABP4)相关的基因的表达水平。

与对照组和NALT处理组的腰部组织发育有关的基因表达的分析结果如表8所示。在与NALT处理组的腰部组织的肌肉代谢有关的基因(MYF6、MyoD和肌间线蛋白)的表达和与对照的腰部组织的肌肉代谢相关的所述基因的表达之间未观察到统计学上的显著差异。但是，与NALT处理组的腰部组织中的脂肪代谢相关的基因(PPARr、CEBPa和FABP4)的表达水平比与对照的腰部组织中的脂肪代谢相关的所述基因的表达水平低。认为通过NALT补充的L-色氨酸在冷应激条件下抑制了脂肪代谢，因此脂肪代谢先前所需的能量被用于维持和改善体内的体内平衡(体温等)，因而由此增加了平均日增重并提高了饲料转化率。

表8

根据NALT饲喂，与腰部组织的肌肉代谢和脂肪代谢有关的基因的表达水平

B.鉴定热应激条件下NALT的功效

实施例1.实验动物、实验饲料和实验方法

实施例1-1.实验用动物

在本公开中，选择并使用了8个韩国本土肉用牛(平均15.9±0.16个月大)。实验过程和方法得到大韩民国首尔市建国大学动物保护与使用委员会的批准(批准号KU17136)。

如表9所示，测量了前哨动物的初始体重，并将这些肉用牛分配给成对照组和NALT处理组(0.1％NALT)，每组4个肉用牛，从而在两者之间不显示统计学上的显著差异。

表9

初始体重的比较

实施例1-2.饲喂实验饲料

饲喂不含抗生素的总混合口粮(TMR,Nonghyup Feed Co.,Ltd.,Yangju-si,韩国)作为基础饮食。对储存在-20℃的基础饮食的化学组成(水分、粗蛋白、粗脂肪、粗灰分等)和氨基酸(19种)进行了分析，结果示于表3。

实施例1-3.实验方法设计与统计学分析

在通过对初始体重的统计学分析将动物分组之后，在实验时段期间，将动物在1.0×1.5m

同时，通过统计学比较和分析对照组和NALT处理组之间的显著差异，获得了生长性能分析(体重和平均采食量)和腰部组织基因分析的结果，并且通过取决于NALT处理、实验时段(天数)和相互作用(处理×天数)的统计学比较和分析，获得了血液学分析的结果。这些数值表示为平均值，并使用JMP 5.0软件包(SAS Institute Inc.,Cary,NC,美国)使用Student's t检验在5％的水平上进行了显著性检验。

实施例2.温度和相对湿度的分析

在1周的适应时段和6周的实验时段期间，使用便携式温湿度计每天记录温度(℃)和相对湿度(％)。使用在整个实验时段期间记录的温度和相对湿度，计算每周的平均温度和平均相对湿度。此外，使用以下等式所示的温度和湿度来计算温湿度指数(THI)，并且可以使用THI作为热负荷的指数特征来诊断热应激状态。

THI＝(1.8×T+32)-[0.55-0.0055×RH]×(1.8×T-26.8)

在这方面，T是该区域的最高温度(℃)，而RH是测试当天的平均相对湿度(％)。

平均温度、最高温度、相对湿度和THI的变化如表10所示。在最初的3周期间，平均THI超过80，在随后的4周期间，平均THI超过72。

表10

在整个实验时段期间的平均温度、最高温度、平均相对湿度和THI

实施例3.体重分析

在提供早晨饲料之前，测量了前哨动物的初始体重(第0周)、中间体重(第5周)和最终重量(第10周)，即总计三次。前哨动物的平均日增重(ADG)是用初始体重和中间体重之间以及中间体重和最终体重之间的体重之差除以实验的总天数计算的。

对照组和NALT处理组的体重变化的分析结果如表11所示。作为在实验的中点(第5周)和实验的最后一天(第10周)测量前哨动物体重变化的结果，与对照相比，在NALT处理组中观察到平均日增重(ADG)增加。特别地，在THI超过80的时段期间，即在高热应激条件下，与对照的平均日增重相比，NALT处理组的平均日增重显著增加。

表11

根据NALT饲喂的体重变化

实施例4.采食量和饮水量的分析

通过测量每天提供的饲料总量和剩余量来计算每个前哨动物的采食量，并且通过测量提供的饮用水总量和剩余量来计算其饮水量。而且，由于剩余的饲料量以圈单位进行测量，因此使用等式DMI/BW％＝1.2425+1.9218×NEm-0.7259×(NEm)

表12

根据NALT饲喂(相对于THI 80)的采食量和饮水量的变化

实施例5.血液分析

在实验的起始日(第0周)、实验的中点(第5周)和实验的最后一天(第10周)，在提供饲料之前，从每个前哨动物的颈静脉收集血液样品，并存放在真空采血管中(BectonDickinson,Franklin Lakes,NJ,美国)。使用VetScan HM2(Abaxis,Union City,CA,美国)使用全血进行全血细胞计数(CBC)，并使用生化自动分析仪(FUJI DRI-CHEM 7000,Fujifilm,东京,日本)使用血清鉴定血液学性质。此外，还分析了与血液蛋白代谢有关的总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、肌酐磷酸激酶(CPK)和血尿素氮(BUN)；分析了与能量代谢有关的甘油三酯(TG)和非酯化脂肪酸(NEFA)；并分析了作为血液电解质的钠(Na)、氯(Cl)和钾(K)。

对照组和NALT处理组的CBC分析结果如下示出(表13)。通过用0.1％NALT处理，在所有CBC测试指标方面均未观察到统计学上的显著差异。尽管根据采样日期，RBC、HGB、MCV、MCH和GRA表现出显著差异，但已确认血液学指标的所有值均在正常范围内。

表13

根据NALT饲喂的CBC分析

对照组和NALT处理组的血液学分析结果如下示出(表14)。通过用0.1％NALT处理，在所有CBC测试指标方面均未观察到统计学上的显著差异，并且TP、ALB、BUN、GLU、Na和Cl如下示出。

表14

根据NALT饲喂的血液学性质的变化

TP：总蛋白；ALB：白蛋白；GLO：球蛋白(＝TP-ALB)；CPK：肌酐磷酸激酶；BUN：血尿素氮；GLU：葡萄糖；NEFA：非酯化脂肪酸；TG：甘油三酯；Na：钠；K：钾；Cl：氯

实施例6.与腰部组织发育有关的基因表达分析

在实验的最后一天(第10周)获得前哨动物的腰部组织样品。使用动物用活检枪(TNT Research Co.,Ltd.,Gyeonggi-do,韩国)获得样品，将其添加到2mL管中，并在液氮中温育。从每个组织样品中提取RNA后，进行实时PCR以分析与每只动物的腰部组织的脂肪分化(PPARr、CEBPa、FABP4、LPL和SCD)和肌肉分化(MYF6、MyoD和MyoG)相关的基因的表达水平。使用TRIzol RNA分离方案分离总RNA，并使用NanoDrop 1000(Thermo Scientific,Seoul,韩国)测量RNA的量。使用Agilent Bioanalyzer 2100系统(Agilent Technologies,Richardson,美国)的RNA Nano 6000测定试剂盒评价RNA完整值(RIN)，获得的RNA完整值(RIN)为6.5±0.27。从mRNA合成cDNA后，进行实时PCR以测量基因的表达水平。

与对照组和NALT处理组的腰部组织发育有关的基因表达的分析结果如下示出(表15)。与对照(p>0.05)相比，在通过用0.1％NALT处理的肌肉分化相关基因(MyoD)和脂肪分化相关基因(C/EBPα和PPARγ)的表达方面没有观察到统计学上的显著差异。但是，与对照组(p>0.05)相比，在0.1％NALT处理组的腰部组织中，肌肉分化相关基因(MYF6和MyoG)以及与脂解作用和脂肪运输相关的基因(FABP4和LPL)的表达水平更高，并且在0.1％NALT处理组中SCD的基因表达水平倾向于比对照组高。认为，在热应激条件下，补充的NALT不仅促进脂解作用，而且还促进运输降解脂肪的代谢和与肌肉代谢有关的基因，因此增加了平均日增重(表11)。

表15

根据NALT饲喂，与腰部组织的肌肉代谢和脂肪代谢有关的基因的表达水平

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