评价去磷酸化试剂的品质的方法和检测目标核酸的方法

摘要

本发明的目的是提供评价含有碱性磷酸酶的去磷酸化试剂的品质的方法、和使用通过该评价方法而评价为品质高的去磷酸化试剂来检测目标核酸的方法，为了实现该目的，本发明提供评价去磷酸化试剂的品质的方法该方法包括以下工序：(1‑1)准备含有碱性磷酸酶、和所述碱性磷酸酶来源的肽片段的去磷酸化试剂的工序；和(1‑2)在所述肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率为规定的基准值以下的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高的工序。

说明书

技术领域

本发明涉及评价含有碱性磷酸酶的去磷酸化试剂的品质的方法、和使用通过该评价方法而评价为品质高的去磷酸化试剂来检测目标核酸的方法。

背景技术

碱性磷酸酶具有水解磷酸单酯的催化功能，在测定蛋白质、核酸等生物体物质的量的方法(例如，免疫染色法、ELISA、核酸微阵列法等)中被广泛使用。例如，在基因工程学的研究领域，为了DNA、RNA等核酸的标记化的前处理、防止载体的自身连接等，而使用碱性磷酸酶进行核酸的5’末端和/或3’末端的去磷酸化。

作为碱性磷酸酶的工业制法，由于其比活性高，因而主要以牛的小肠或大肠作为原料的制造方法被广泛采用。碱性磷酸酶的比活性的评价一般通过测定在对硝基苯基磷酸酯分解时生成的对硝基苯酚来源的405nm的吸光度来进行。

碱性磷酸酶的品质基于碱性磷酸酶比活性来评价。并且，为了获得比牛肠来源的碱性磷酸酶比活性高的碱性磷酸酶，一直以来通过纯化过程来分离高比活性的碱性磷酸酶，或者使用基因工程学的手法通过重组大肠菌来生产高比活性的碱性磷酸酶。

专利文献1中公开了使用导入了栗褐芽胞杆菌属来源的基因的重组大肠菌来制造具有高比活性的碱性磷酸酶的方法。另外，专利文献2中公开了使用导入了希瓦氏菌属来源的基因的重组大肠菌制造具有高比活性和耐热性的碱性磷酸酶的方法。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开平10-262674号

专利文献2：国际公开第2012/115023号

发明内容

发明所要解决的课题

含有碱性磷酸酶的去磷酸化试剂(例如，市售的碱性磷酸酶制品)是在含有碱性磷酸酶的同时，含有其他成分的组合物。含有碱性磷酸酶的去磷酸化试剂的品质基于碱性磷酸酶比活性进行评价。

然而，判明了即使是具有几乎相同的碱性磷酸酶比活性的去磷酸化试剂，使用该去磷酸化试剂制备的标记化核酸(通过该去磷酸化试剂将核酸的5’末端和/或3’末端去磷酸化，使去磷酸化后的核酸的5’末端和/或3’末端结合标记物质而得的标记化核酸)在核酸检测法中的检测灵敏度也产生较大的差异。即，判明了含有碱性磷酸酶的去磷酸化试剂的品质不能够以碱性磷酸酶比活性作为指标正确地评价。

于是，本发明的目的在于提供评价含有碱性磷酸酶的去磷酸化试剂的品质的方法、和使用通过该评价方法评价为品质高的去磷酸化试剂来检测目标核酸的方法。

用于解决课题的手段

本发明者们为了解决上述课题而进行了深入研究，结果发现，含有碱性磷酸酶的去磷酸化试剂(例如，市售的碱性磷酸酶制品)中能够混合存在以下的杂质的任意1种以上。

·由2种以上的肽片段构成的肽片段组(A1)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列(牛来源的碱性磷酸酶的氨基酸序列)的71～130位中的连续5～50个氨基酸残基组成

·由2种以上的肽片段构成的肽片段组(A2)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位中的连续5～50个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的86～90位

·由2种以上的肽片段构成的肽片段组(A3)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位中的连续13～50个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的93～105位

·由1种以上的肽片段构成的肽片段组(B1)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位中的连续5～20个氨基酸残基组成

·由1种以上的肽片段构成的肽片段组(B2)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位中的连续11～20个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的177～187位

·由1种以上的肽片段构成的肽片段组(C1)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位中的连续5～20个氨基酸残基组成

·由1种以上的肽片段构成的肽片段组(C2)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位中的连续9～20个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的469～477位

·由2种以上的肽片段构成的肽片段组(D1)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位中的连续5～50个氨基酸残基组成

·由2种以上的肽片段构成的肽片段组(D2)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位中的连续13～50个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的516～528位

·由2种以上的肽片段构成的肽片段组(D3)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位中的连续12～50个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的534～545位

·由序列号1所记载的氨基酸序列组成的第1肽片段

·由序列号2所记载的氨基酸序列组成的第2肽片段

·由序列号3所记载的氨基酸序列组成的第3肽片段

·由序列号4所记载的氨基酸序列组成的第4肽片段

·由序列号5所记载的氨基酸序列组成的第5肽片段

·由序列号6所记载的氨基酸序列组成的第6肽片段

·由序列号7所记载的氨基酸序列组成的第7肽片段

·由序列号8所记载的氨基酸序列组成的第8肽片段

·由序列号9所记载的氨基酸序列组成的第9肽片段

并且，本发明者们发现，通过降低

·肽片段组(A1)的含量、

·肽片段组(A2)的含量、

·肽片段组(A3)的含量、

·肽片段组(B1)的含量、

·肽片段组(B2)的含量、

·肽片段组(C1)的含量、

·肽片段组(C2)的含量、

·肽片段组(D1)的含量、

·肽片段组(D2)的含量、

·肽片段组(D3)的含量、

·第2肽片段的含量(优选为第2肽片段的含量、以及选自第1和第3肽片段中的1种或2种肽片段的含量)、

·第4肽片段的含量、

·第5肽片段的含量、

·第7肽片段的含量(优选为第7肽片段的含量、以及选自第6、第8和第9肽片段中的1种、2种或3种肽片段的含量)、

·第8肽片段的含量(优选为第8肽片段的含量、以及选自第6、第7和第9肽片段中的1种、2种或3种肽片段的含量)、

·第9肽片段的含量(优选为第9肽片段的含量、以及选自第6、第7和第8肽片段中的1种、2种或3种肽片段的含量)、或

·第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段的含量(优选为第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段的含量、以及选自第1、第3和第6肽片段中的1种、2种或3种肽片段的含量)，

能够提高使用去磷酸化试剂制备的标记化核酸(通过该去磷酸化试剂将核酸的5’末端和/或3’末端去磷酸化，使去磷酸化后的核酸的5’末端和/或3’末端结合标记物质而得的标记化核酸)在核酸检测法中的检测灵敏度，从而完成了本发明。即，本发明包含以下发明。

[1]评价去磷酸化试剂的品质的方法，该方法包括以下工序：

工序(1-1)，准备含有碱性磷酸酶、和所述碱性磷酸酶来源的肽片段的去磷酸化试剂；和

工序(1-2)，在所述肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率为规定的基准值以下的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

[2]根据[1]所述的方法，所述去磷酸化试剂具有2000U/mg以上的碱性磷酸酶比活性。

[3]根据[1]或[2]所述的方法，所述碱性磷酸酶选自以下(a)和(b)：

(a)具有由序列号10所记载的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶；和

(b)具有由与序列号10所记载的氨基酸序列有70％以上的序列同一性的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶。

[4]根据[1]～[3]的任一项所述的方法，所述去磷酸化试剂含有由2种以上的肽片段构成的肽片段组(A1)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位中的连续5～50个氨基酸残基组成，

所述肽片段组(A1)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(A1)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[5]根据[4]所述的方法，所述肽片段组(A1)包含选自由序列号1所记载的氨基酸序列组成的第1肽片段、由序列号2所记载的氨基酸序列组成的第2肽片段、和由序列号3所记载的氨基酸序列组成的第3肽片段中的1种、2种或3种肽片段。

[6]根据[5]所述的方法，所述肽片段组(A1)包含所述第1肽片段，

所述肽片段组(A1)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(A1)、并且所述第1肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(1)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[7]根据[5]或[6]所述的方法，所述肽片段组(A1)包含所述第2肽片段，

在所述肽片段组(A1)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(A1)、并且所述第2肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(2)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[8]根据[5]～[7]的任一项所述的方法，所述肽片段组(A1)包含所述第3肽片段，

在所述肽片段组(A1)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(A1)、并且所述第3肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(3)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[9]根据[1]～[3]的任一项所述的方法，所述去磷酸化试剂含有由2种以上的肽片段构成的肽片段组(A2)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位中的连续5～50个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的86～90位，

在所述肽片段组(A2)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足以下的式(A2)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[10]根据[9]所述的方法，所述肽片段组(A2)包含选自由序列号1所记载的氨基酸序列组成的第1肽片段、和由序列号2所记载的氨基酸序列组成的第2肽片段中的1种或2种肽片段。

[11]根据[10]所述的方法，所述肽片段组(A2)包含所述第1肽片段，

在所述肽片段组(A2)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(A2)、并且所述第1肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(1)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[12]根据[10]或[11]所述的方法，所述肽片段组(A2)包含所述第2肽片段，

在所述肽片段组(A2)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(A2)、并且所述第2肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(2)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[13]根据[1]～[3]的任一项所述的方法，所述去磷酸化试剂含有由2种以上的肽片段构成的肽片段组(A3)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位中的连续13～50个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的93～105位，

在所述肽片段组(A3)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足以下的式(A3)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[14]根据[13]所述的方法，所述肽片段组(A3)包含选自由序列号1所记载的氨基酸序列组成的第1肽片段、和由序列号3所记载的氨基酸序列组成的第3肽片段中的1种或2种肽片段。

[15]根据[14]所述的方法，所述肽片段组(A3)包含所述第1肽片段，

在所述肽片段组(A3)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(A3)、并且所述第1肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(1)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[16]根据[14]或[15]所述的方法，所述肽片段组(A3)包含所述第3肽片段，

在所述肽片段组(A3)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(A3)、并且所述第3肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(3)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[17]根据[1]～[3]的任一项所述的方法，所述去磷酸化试剂含有由序列号2所记载的氨基酸序列组成的第2肽片段，

在所述第2肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(2)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[18]根据[17]所述的方法，所述去磷酸化试剂进一步含有由序列号1所记载的氨基酸序列组成的第1肽片段，

在所述第2肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(2)、并且所述第1肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(1)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[19]根据[17]或[18]所述的方法，所述去磷酸化试剂进一步含有由序列号3所记载的氨基酸序列组成的第3肽片段，

所述第2肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(2)、并且所述第3肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(3)：

(X

[式中，X

[20]根据[4]～[19]的任一项所述的方法，所述碱性磷酸酶选自以下的(a)和(b1)：

(a)具有由序列号10所记载的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶；和

(b1)具有由与序列号10所记载的氨基酸序列有70％以上的序列同一性、且包含序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶。

[21]根据[1]～[3]的任一项所述的方法，所述去磷酸化试剂含有由1种以上的肽片段构成的肽片段组(B1)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位中的连续5～20个氨基酸残基组成，

在所述肽片段组(B1)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足以下的式(B1)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[22]根据[21]所述的方法，所述肽片段组(B1)包含由序列号4所记载的氨基酸序列组成的第4肽片段。

[23]根据[22]所述的方法，在所述肽片段组(B1)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(B1)、并且所述第4肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(4)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[24]根据[1]～[3]的任一项所述的方法，所述去磷酸化试剂含有由1种以上的肽片段构成的肽片段组(B2)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位中的连续11～20个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的177～187位，

在所述肽片段组(B2)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足以下的式(B2)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[25]根据[24]所述的方法，所述肽片段组(B2)包含由序列号4所记载的氨基酸序列组成的第4肽片段。

[26]根据[25]所述的方法，在所述肽片段组(B2)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(B2)、并且所述第4肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(4)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[27]根据[1]～[3]的任一项所述的方法，所述去磷酸化试剂含有由序列号4所记载的氨基酸序列组成的第4肽片段，

在所述第4肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(4)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[28]根据[21]～[27]的任一项所述的方法，所述碱性磷酸酶选自以下的(a)和(b2)：

(a)具有由序列号10所记载的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶；和

(b2)具有由与序列号10所记载的氨基酸序列有70％以上的序列同一性、且包含序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶。

[29]根据[1]～[3]的任一项所述的方法，所述去磷酸化试剂含有由1种以上的肽片段构成的肽片段组(C1)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位中的连续5～20个氨基酸残基组成，

在所述肽片段组(C1)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足以下的式(C1)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[30]根据[29]所述的方法，所述肽片段(C1)包含由序列号5所记载的氨基酸序列组成的第5肽片段。

[31]根据[30]所述的方法，在所述肽片段组(C1)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(C1)、并且所述第5肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(5)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[32]根据[1]～[3]的任一项所述的方法，所述去磷酸化试剂含有由1种以上的肽片段构成的肽片段组(C2)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位中的连续9～20个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的469～477位，

在所述肽片段组(C2)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足以下的式(C2)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(XC

[式中，X

[33]根据[32]所述的方法，所述肽片段(C2)包含由序列号5所记载的氨基酸序列组成的第5肽片段。

[34]根据[33]所述的方法，在所述肽片段组(C2)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(C2)、并且所述第5肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(5)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[35]根据[1]～[3]的任一项所述的方法，所述去磷酸化试剂含有由序列号5所记载的氨基酸序列组成的第5肽片段，

在所述第5肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(5)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[36]根据[29]～[35]的任一项所述的方法，所述碱性磷酸酶选自以下的(a)和(b3)：

(a)具有由序列号10所记载的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶；和

(b3)具有由与序列号10所记载的氨基酸序列有70％以上的序列同一性、且包含序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶。

[37]根据[1]～[3]的任一项所述的方法，所述去磷酸化试剂含有由2种以上的肽片段构成的肽片段组(D1)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位中的连续5～50个氨基酸残基组成，

在所述肽片段组(D1)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足以下的式(D1)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[38]根据[37]所述的方法，所述肽片段(D1)包含选自由序列号6所记载的氨基酸序列组成的第6肽片段、由序列号7所记载的氨基酸序列组成的第7肽片段、由序列号8所记载的氨基酸序列组成的第8肽片段、和由序列号9所记载的氨基酸序列组成的第9肽片段中的1种、2种、3种或4种肽片段。

[39]根据[38]所述的方法，所述肽片段组(D1)包含所述第6肽片段，

在所述肽片段组(D1)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(D1)、并且所述第6肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(6)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[40]根据[38]或[39]所述的方法，所述肽片段组(D1)包含所述第7肽片段，

在所述肽片段组(D1)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(D1)、并且所述第7肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(7)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[41]根据[38]～[40]的任一项所述的方法，所述肽片段(D1)包含所述第8肽片段，

在所述肽片段组(D1)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(D1)、并且所述第8肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(8)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[42]根据[38]～[41]的任一项所述的方法，所述肽片段(D1)包含所述第9肽片段，

在所述肽片段组(D1)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(D1)、并且所述第9肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(9)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[43]根据[1]～[3]的任一项所述的方法，所述去磷酸化试剂含有由2种以上的肽片段构成的肽片段组(D2)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位中的连续13～50个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的516～528位，

在所述肽片段组(D2)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足以下的式(D2)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[44]根据[43]所述的方法，所述肽片段组(D2)包含选自由序列号6所记载的氨基酸序列组成的第6肽片段、和由序列号7所记载的氨基酸序列组成的第7肽片段中的1种或2种肽片段。

[45]根据[44]所述的方法，所述肽片段组(D2)包含所述第6肽片段，

在所述肽片段组(D2)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(D2)、并且所述第6肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(6)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[46]根据[44]或[45]所述的方法，所述肽片段组(D2)包含所述第7肽片段，

在所述肽片段组(D2)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(D2)、并且所述第7肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(7)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[47]根据[1]～[3]的任一项所述的方法，所述去磷酸化试剂含有由2种以上的肽片段构成的肽片段组(D3)，所述肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位中的连续12～50个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的534～545位，

在所述肽片段组(D3)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足以下的式(D3)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[48]根据[47]所述的方法，所述肽片段组(D3)包含选自由序列号8所记载的氨基酸序列组成的第8肽片段、和由序列号9所记载的氨基酸序列组成的第9肽片段中的1种或2种肽片段。

[49]根据[48]所述的方法，所述肽片段组(D3)包含所述第8肽片段，

在所述肽片段组(D3)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(D3)、并且所述第8肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(8)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[50]根据[48]或[49]所述的方法，所述肽片段组(D3)包含所述第9肽片段，

在所述肽片段组(D3)的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(D3)、并且所述第9肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(9)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[51]根据[1]～[3]的任一项所述的方法，所述去磷酸化试剂含有由序列号7所记载的氨基酸序列组成的第7肽片段，

在所述第7肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(7)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[52]根据[51]所述的方法，所述去磷酸化试剂进一步含有由序列号6所记载的氨基酸序列组成的第6肽片段，

在所述第7肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(7)、并且所述第6肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量满足下述式(6)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[53]根据[51]或[52]所述的方法，所述去磷酸化试剂进一步含有由序列号8所记载的氨基酸序列组成的第8肽片段，

在所述第7肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(7)、并且所述第8肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量满足下述式(8)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[54]根据[51]～[53]的任一项所述的方法，所述去磷酸化试剂进一步含有由序列号9所记载的氨基酸序列组成的第9肽片段，

在所述第7肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(7)、并且所述第9肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量满足下述式(9)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[55]根据[1]～[3]的任一项所述的方法，所述去磷酸化试剂含有由序列号8所记载的氨基酸序列组成的第8肽片段，

在所述第8肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(8)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[56]根据[55]所述的方法，所述去磷酸化试剂进一步含有由序列号6所记载的氨基酸序列组成的第6肽片段，

在所述第8肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(8)、并且所述第6肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(6)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[57]根据[55]或[56]所述的方法，所述去磷酸化试剂进一步含有由序列号9所记载的氨基酸序列组成的第9肽片段，

所述第8肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(8)、并且所述第9肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量满足下述式(9)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[58]根据[1]～[3]的任一项所述的方法，所述去磷酸化试剂含有由序列号9所记载的氨基酸序列组成的第9肽片段，

在所述第9肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(9)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[59]根据[58]所述的方法，所述去磷酸化试剂进一步含有由序列号6所记载的氨基酸序列组成的第6肽片段，

在所述第9肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足所述式(9)、并且所述第6肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(6)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[60]根据[37]～[59]的任一项所述的方法，所述碱性磷酸酶选自以下的(a)和(b4)：

(a)具有由序列号10所记载的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶；和

(b4)具有由与序列号10所记载的氨基酸序列有70％以上的序列同一性、且包含序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶。

[61]根据[1]～[3]的任一项所述的方法，所述去磷酸化试剂含有

由序列号2所记载的氨基酸序列组成的第2肽片段、

由序列号4所记载的氨基酸序列组成的第4肽片段、

由序列号5所记载的氨基酸序列组成的第5肽片段、

由序列号7所记载的氨基酸序列组成的第7肽片段、

由序列号8所记载的氨基酸序列组成的第8肽片段、和

由序列号9所记载的氨基酸序列组成的第9肽片段，

在所述第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量分别满足下述式(2)、(4)、(5)、(7)、(8)和(9)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

(X

(X

(X

(X

(X

[式中，X

[62]根据[61]所述的方法，所述去磷酸化试剂进一步含有由序列号1所记载的氨基酸序列组成的第1肽片段，

在所述第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量分别满足下述式(2)、(4)、(5)、(7)、(8)和(9)、并且所述第1肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(1)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[63]根据[61]或[62]所述的方法，所述去磷酸化试剂进一步含有由序列号3所记载的氨基酸序列组成的第3肽片段，

在所述第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量分别满足下述式(2)、(4)、(5)、(7)、(8)和(9)、并且所述第3肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(3)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[64]根据[61]～[63]的任一项所述的方法，所述去磷酸化试剂进一步含有由序列号6所记载的氨基酸序列组成的第6肽片段，

在所述第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量分别满足下述式(2)、(4)、(5)、(7)、(8)和(9)、并且所述第6肽片段的含量相对于所述碱性磷酸酶的含量的比率满足下述式(6)的情况下，评价为所述去磷酸化试剂的品质高。

(X

[式中，X

[65]根据[61]～[64]的任一项所述的方法，所述碱性磷酸酶选自以下的(a)和(b5)：

(a)具有由序列号10所记载的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶；和

(b5)具有由与序列号10所记载的氨基酸序列有70％以上的序列同一性、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的78～90位、177～187位、469～477位、516～528位和534～551位的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶。

[66]根据[65]所述的方法，所述碱性磷酸酶(b5)包含选自序列号10所记载的氨基酸序列的91～109位、93～105位和529～531位中的1种或2种以上。

[67]根据[65]所述的方法，所述碱性磷酸酶(b5)包含序列号10所记载的氨基酸序列的91～109位和529～531位。

[68]检测目标核酸的方法，

所述方法包括以下工序：

工序(2-1)，准备包含所述目标核酸的样品；

工序(2-2)，准备含有碱性磷酸酶、和所述碱性磷酸酶来源的肽片段组的去磷酸化试剂；

工序(2-3)，将所述样品用所述去磷酸化试剂处理而将所述目标核酸去磷酸化；

工序(2-4)，将去磷酸化后的所述目标核酸进行标记化；

工序(2-5)，检测标记化后的所述目标核酸，

所述工序(2-2)中准备的所述去磷酸化试剂是通过权利要求1～67的任一项所述的方法评价为品质高的去磷酸化试剂。

[69]根据[68]所述的方法，所述目标核酸是RNA。

[70]根据[68]或[69]所述的方法，在所述工序(2-5)中，使所述目标核酸、和能与所述目标核酸杂交的探针接触，检测与所述探针杂交后的所述目标核酸。

[71]根据[70]所述的方法，所述探针固定于支撑体。

发明的效果

通过本发明，提供评价含有碱性磷酸酶的去磷酸化试剂的品质的方法、和使用通过该评价方法而评价为品质高的去磷酸化试剂来检测目标核酸的方法。

附图说明

图1显示比较例2中通过组合物C2的LC-MS/MS分析而得的、关于第1肽片段的提取离子色谱。

图2显示比较例2中通过组合物C2的LC-MS/MS分析而得的、关于第2肽片段的提取离子色谱。

图3显示比较例2中通过组合物C2的LC-MS/MS分析而得的、关于第3肽片段的提取离子色谱。

图4显示比较例2中通过组合物C2的LC-MS/MS分析而得的、关于第4肽片段的提取离子色谱。

图5显示比较例2中通过组合物C2的LC-MS/MS分析而得的、关于第5肽片段的提取离子色谱。

图6显示比较例2中通过组合物C2的LC-MS/MS分析而得的、关于第6肽片段的提取离子色谱。

图7显示比较例2中通过组合物C2的LC-MS/MS分析而得的、关于第7肽片段的提取离子色谱。

图8显示比较例2中通过组合物C2的LC-MS/MS分析而得的、关于第8肽片段的提取离子色谱。

图9显示比较例2中通过组合物C2的LC-MS/MS分析而得的、关于第9肽片段的提取离子色谱。

图10显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-MS/MS分析而得的、关于第1肽片段的提取离子色谱。

图11显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-MS/MS分析而得的、关于第2肽片段的提取离子色谱。

图12显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-MS/MS分析而得的、关于第3肽片段的提取离子色谱。

图13显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-MS/MS分析而得的、关于第4肽片段的提取离子色谱。

图14显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-MS/MS分析而得的、关于第5肽片段的提取离子色谱。

图15显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-MS/MS分析而得的、关于第6肽片段的提取离子色谱。

图16显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-MS/MS分析而得的、关于第7肽片段的提取离子色谱。

图17显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-MS/MS分析而得的、关于第8肽片段的提取离子色谱。

图18显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-MS/MS分析而得的、关于第9肽片段的提取离子色谱。

图19显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-UV分析而得的、关于碱性磷酸酶的色谱。

具体实施方式

以下，详细说明本发明。可以将以下说明的方案中2种以上方案组合，以及将以下说明的实施方式中的2种以上实施方式组合，这样的组合也包含在本发明中。此外，本说明书中使用的“数值M～数值N”这样的表述是指为数值M以上且为数值N以下的范围。

《术语的说明》

以下，说明在本说明书中使用的术语。

[碱性磷酸酶]

碱性磷酸酶是具有碱性磷酸酶活性的酶。碱性磷酸酶只要具有碱性磷酸酶活性就不特别限定。碱性磷酸酶活性是在碱性(pH8～11、例如，pH8～10或pH9～11)下水解磷酸单酯键的活性，其反应形式分类为EC3.1.3.1。碱性磷酸酶可以是1种碱性磷酸酶，也可以是2种以上的碱性磷酸酶的混合物。

碱性磷酸酶的结构(例如，一级结构、二级结构、三级结构、四级结构等)不特别限定。例如，碱性磷酸酶可以具有糖链，也可以不具有糖链。另外，碱性磷酸酶可以是基于蛋白质分子的结构(例如，蛋白质分子的氨基酸序列)、糖链修饰等差异而可以存在的任意同工酶。另外，碱性磷酸酶可以是由1个亚基形成的单体(monomer)，也可以是由2个以上的亚基形成的寡聚物(例如，2聚体、4聚体等)。寡聚物可以是同源寡聚物，也可以是异源寡聚物。

碱性磷酸酶所来源的动物不特别限定。作为碱性磷酸酶所来源的动物，可列举例如，牛、虾、导入了编码碱性磷酸酶的基因的微生物等。因为牛来源的碱性磷酸酶的碱性磷酸酶活性高，所以碱性磷酸酶所来源的动物优选为牛。在碱性磷酸酶为牛来源的情况下，碱性磷酸酶所来源的脏器优选为小肠或大肠。

碱性磷酸酶可以是野生型，也可以是突变型。突变型碱性磷酸酶具有例如，由在野生型碱性磷酸酶所具有的蛋白质分子的氨基酸序列中缺失、替换、插入或添加了1个以上氨基酸的氨基酸序列组成的蛋白质分子。突变型碱性磷酸酶所具有的蛋白质分子的氨基酸序列，相对于野生型碱性磷酸酶所具有的蛋白质分子的氨基酸序列，具有优选为70％以上、更优选为75％以上、更进一步优选为80％以上、更进一步优选为85％以上、更进一步优选为90％以上、更进一步优选为95％以上的序列同一性。

在一个实施方式中，碱性磷酸酶选自以下的(a)和(b)：

(a)具有由序列号10所记载的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶；和

(b)具有由与序列号10所记载的氨基酸序列有70％以上的序列同一性的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶。

在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，碱性磷酸酶选自以下的(a)和(b1)：

(a)具有由序列号10所记载的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶；和

(b1)具有由与序列号10所记载的氨基酸序列有70％以上的序列同一性、且包含序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶。

在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，碱性磷酸酶选自以下的(a)和(b2)：

(a)具有由序列号10所记载的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶；和

(b2)具有由与序列号10所记载的氨基酸序列有70％以上的序列同一性、且包含序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶。

在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b2)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，碱性磷酸酶选自以下的(a)和(b3)：

(a)具有由序列号10所记载的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶；和

(b3)具有由与序列号10所记载的氨基酸序列有70％以上的序列同一性、且包含序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶。

在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b3)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，碱性磷酸酶选自以下的(a)和(b4)：

(a)具有由序列号10所记载的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶；和

(b4)具有由与序列号10所记载的氨基酸序列有70％以上的序列同一性、且包含序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶。

在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，碱性磷酸酶选自以下的(a)和(b5)：

(a)具有由序列号10所记载的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶；和

(b5)具有由与序列号10所记载的氨基酸序列有70％以上的序列同一性、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的78～90位、177～187位、469～477位、516～528位和534～551位的氨基酸序列组成的蛋白质分子的碱性磷酸酶。

在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b5)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在优选的实施方式中，上述碱性磷酸酶(b5)进一步包含选自序列号10所记载的氨基酸序列的91～109位、93～105位和529～531位中的1种或2种以上。

在进一步优选的实施方式中，上述碱性磷酸酶(b5)进一步包含序列号10所记载的氨基酸序列的91～109位和529～531位。

上述碱性磷酸酶(a)所具有的蛋白质分子的氨基酸序列(即，序列号10所记载的氨基酸序列)相当于牛来源的碱性磷酸酶所具有的蛋白质分子的氨基酸序列。因此，上述碱性磷酸酶(a)包含牛来源的碱性磷酸酶。

上述碱性磷酸酶(b)所具有的蛋白质分子的氨基酸序列与序列号10所记载的氨基酸序列有70％以上、优选为75％以上、更进一步优选为80％以上、更进一步优选为85％以上、更进一步优选为90％以上、更进一步优选为95％以上的序列同一性。上述碱性磷酸酶(b1)～(b5)所具有的蛋白质分子的氨基酸序列也同样。

上述碱性磷酸酶(b)包含野生型碱性磷酸酶(例如，牛以外的动物来源的碱性磷酸酶、具有多态性的牛来源的碱性磷酸酶等)和突变型碱性磷酸酶两者。上述碱性磷酸酶(b1)～(b5)也同样。

关于上述碱性磷酸酶(b1)，在序列号10所记载的氨基酸序列中缺失、替换、插入或添加1个以上的氨基酸的位置，是序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位以外的位置。

关于上述碱性磷酸酶(b2)，在序列号10所记载的氨基酸序列中缺失、替换、插入或添加1个以上的氨基酸的位置，是序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位以外的位置。

关于上述碱性磷酸酶(b3)，在序列号10所记载的氨基酸序列中缺失、替换、插入或添加1个以上的氨基酸的位置，是序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位以外的位置。

关于上述碱性磷酸酶(b4)，在序列号10所记载的氨基酸序列中缺失、替换、插入或添加1个以上的氨基酸的位置，是序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位以外的位置。

关于上述碱性磷酸酶(b5)，在序列号10所记载的氨基酸序列中缺失、替换、插入或添加1个以上的氨基酸的位置，是序列号10所记载的氨基酸序列的78～90位、177～187位、469～477位、516～528位和534～551位以外的位置。

在上述碱性磷酸酶(b5)包含选自序列号10所记载的氨基酸序列的91～109位、93～105位和529～531位中的1种或2种以上的实施方式中，在序列号10所记载的氨基酸序列中缺失、替换、插入或添加1个以上的氨基酸的位置，是所选择的1种或2种以上的序列以外的位置。

在上述碱性磷酸酶(b5)包含选自序列号10所记载的氨基酸序列的91～109位和529～531位的实施方式中，在序列号10所记载的氨基酸序列中缺失、替换、插入或添加1个以上的氨基酸的位置，是91～109位和529～531位以外的位置。

[第1肽片段]

第1肽片段由序列号1所记载的氨基酸序列组成。第1肽片段的氨基酸序列(序列号1：EAEAEFLIPAEEENPAFWNRQAAQ)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的86～109位。

在去磷酸化试剂含有第1肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂优选进一步含有选自由序列号2所记载的氨基酸序列组成的第2肽片段、和由序列号3所记载的氨基酸序列组成的第3肽片段中的1种或2种肽片段。在该实施方式中，去磷酸化试剂可以包含除第1～第3肽片段以外的肽片段，也可以不包含。

第1肽片段通过包含序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位的碱性磷酸酶的分解而生成。第1肽片段也可以是由去磷酸化试剂中不含有的碱性磷酸酶的分解而产生的，但通常是通过去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶的分解而产生的。因此，在去磷酸化试剂含有第1肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶通常是能生成第1肽片段的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，能生成第1肽片段的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

[第2肽片段]

第2肽片段由序列号2所记载的氨基酸序列组成。第2肽片段的氨基酸序列(序列号2：EGVSLEKREAEAE)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的78～90位。

在去磷酸化试剂含有第2肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂优选进一步含有选自由序列号1所记载的氨基酸序列组成的第1肽片段、和由序列号3所记载的氨基酸序列组成的第3肽片段中的1种或2种肽片段。在该实施方式中，去磷酸化试剂可以包含除了第1～第3肽片段以外的肽片段，也可以不包含。

第2肽片段可以通过包含序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位的碱性磷酸酶的分解而产生。第2肽片段也可以是由去磷酸化试剂中不含有的碱性磷酸酶的分解而产生的，但通常是通过去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶的分解而产生的。因此，在去磷酸化试剂含有第2肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶通常是可以产生第2肽片段的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生第2肽片段的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

[第3肽片段]

第3肽片段由序列号3所记载的氨基酸序列组成。第3肽片段的氨基酸序列(序列号3：IPAEEENPAFWNR)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的93～105位。

在去磷酸化试剂含有第3肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂优选进一步含有选自由序列号1所记载的氨基酸序列组成的第1肽片段、和由序列号2所记载的氨基酸序列组成的第2肽片段中的1种或2种肽片段。在该实施方式中，去磷酸化试剂可以包含除了第1～第3肽片段以外的肽片段，也可以不包含。

第3肽片段可以通过包含序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位的碱性磷酸酶的分解而产生。第3肽片段也可以是由去磷酸化试剂中不含有的碱性磷酸酶的分解而产生的，但通常是通过去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶的分解而产生的。因此，在去磷酸化试剂含有第3肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶通常是可以产生第3肽片段的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生第3肽片段的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

[第4肽片段]

第4肽片段由序列号4所记载的氨基酸序列组成。第4肽片段的氨基酸序列(序列号4：DRQVPDSAGTA)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的177～187位。

在去磷酸化试剂含有第4肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂可以包含除了第4肽片段以外的肽片段，也可以不包含。

第4肽片段可以通过包含序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位的碱性磷酸酶的分解而产生。第4肽片段也可以是由去磷酸化试剂中不含有的碱性磷酸酶的分解而产生的，但通常是通过去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶的分解而产生的。因此，在去磷酸化试剂含有第4肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶是可以产生第4肽片段的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生第4肽片段的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b2)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b2)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

[第5肽片段]

第5肽片段由序列号5所记载的氨基酸序列组成。第5肽片段的氨基酸序列(序列号5：APGKALDSK)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的469～477位。

在去磷酸化试剂含有第5肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂可以包含除了第5肽片段以外的肽片段，也可以不包含。

第5肽片段可以通过包含序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位的碱性磷酸酶的分解而产生。第5肽片段也可以是由去磷酸化试剂中不含有的碱性磷酸酶的分解而产生的，但通常是通过去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶的分解而产生的。因此，在去磷酸化试剂含有第5肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶是能够产生第5肽片段的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，能够产生第5肽片段的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b3)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b3)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

[第6肽片段]

第6肽片段由序列号6所记载的氨基酸序列组成。第6肽片段的氨基酸序列(序列号6：VPLASETHGGEDVAVF)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的516～531位。

在去磷酸化试剂含有第6肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂优选进一步含有选自由序列号7所记载的氨基酸序列组成的第7肽片段、由序列号8所记载的氨基酸序列组成的第8肽片段、和由序列号9所记载的氨基酸序列组成的第9肽片段中的1种、2种或3种肽片段。在该实施方式中，去磷酸化试剂可以包含除了第6～第9肽片段以外的肽片段，也可以不包含。

第6肽片段可以通过包含序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位的碱性磷酸酶的分解而产生。第6肽片段也可以是由去磷酸化试剂中不含有的碱性磷酸酶的分解而产生的，但通常是通过去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶的分解而产生的。因此，在去磷酸化试剂含有第6肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶是能够产生第6肽片段的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，能够产生第6肽片段的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

[第7肽片段]

第7肽片段由序列号7所记载的氨基酸序列组成。第7肽片段的氨基酸序列(序列号7：VPLASETHGGEDV)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的516～528位。

在去磷酸化试剂含有第7肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂优选进一步含有选自由序列号6所记载的氨基酸序列组成的第6肽片段、由序列号8所记载的氨基酸序列组成的第8肽片段、和由序列号9所记载的氨基酸序列组成的第9肽片段中的1种、2种或3种肽片段。在该实施方式中，去磷酸化试剂可以包含除了第6～第9肽片段以外的肽片段，也可以不包含。

第7肽片段可以通过包含序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位的碱性磷酸酶的分解而产生。第7肽片段也可以是由去磷酸化试剂中不含有的碱性磷酸酶的分解而产生的，但通常是通过去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶的分解而产生的。因此，在去磷酸化试剂含有第7肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶是能够产生第7肽片段的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，能够产生第7肽片段的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

[第8肽片段]

第8肽片段由序列号8所记载的氨基酸序列组成。第8肽片段的氨基酸序列(序列号8：GPQAHLVHGVQEETFVAH)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的534～551位。

在去磷酸化试剂含有第8肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂优选进一步含有选自由序列号6所记载的氨基酸序列组成的第6肽片段、由序列号7所记载的氨基酸序列组成的第7肽片段、和由序列号9所记载的氨基酸序列组成的第9肽片段中的1种、2种或3种肽片段。在该实施方式中，去磷酸化试剂可以包含除了第6～第9肽片段以外的肽片段，也可以不包含。

第8肽片段可以通过包含序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位的碱性磷酸酶的分解而产生。第8肽片段也可以是由去磷酸化试剂中不含有的碱性磷酸酶的分解而产生的，但通常是通过去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶的分解而产生的。因此，在去磷酸化试剂含有第8肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶是能够产生第8肽片段的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，能够产生第8肽片段的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

[第9肽片段]

第9肽片段由序列号9所记载的氨基酸序列组成。第9肽片段的氨基酸序列(序列号9：GPQAHLVHGVQE)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的534～545位。

在去磷酸化试剂含有第9肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂优选进一步含有选自由序列号6所记载的氨基酸序列组成的第6肽片段、由序列号7所记载的氨基酸序列组成的第7肽片段、和由序列号8所记载的氨基酸序列组成的第8肽片段中的1种、2种或3种肽片段。在该实施方式中，去磷酸化试剂可以包含除了第6～第9肽片段以外的肽片段，也可以不包含。

第9肽片段可以通过包含序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位的碱性磷酸酶的分解而产生。第9肽片段也可以是由去磷酸化试剂中不合有的碱性磷酸酶的分解而产生的，但通常是通过去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶的分解而产生的。因此，在去磷酸化试剂含有第9肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶是能够产生第9肽片段的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，能够产生第9肽片段的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

[肽片段组(A1)]

肽片段组(A1)由2种以上的肽片段构成，构成肽片段组(A1)的各肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位中的连续5～50个氨基酸残基组成。肽片段组(A1)由去磷酸化试剂所含有的肽片段中，相当于由选自序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位中的连续5～50个氨基酸残基组成的肽片段的全部肽片段构成。在优选的实施方式中，肽片段组(A1)由3种以上的肽片段构成。

构成肽片段组(A1)的各肽片段的氨基酸序列，是序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位的一部分(由连续的多个氨基酸残基组成的部分)。即，肽片段组(A1)可以通过序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位的分解而产生。这并不意味着去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶必须包含序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位。去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶也可以不包含序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位。但是，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶优选包含序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位。

构成肽片段组(A1)的各肽片段的氨基酸序列，只要是序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位的一部分就不特别限定，优选为序列号10所记载的氨基酸序列的75～130位的一部分、更优选为序列号10所记载的氨基酸序列的75～125位的一部分、更进一步优选为序列号10所记载的氨基酸序列的75～120位的一部分。

构成用于构成肽片段组(A1)的各肽片段的氨基酸残基的个数只要为5～50个就不特别限定，优选为5～45个、更优选为10～40个、更进一步优选为10～30个。

在优选的实施方式中，肽片段组(A1)包含选自由序列号1所记载的氨基酸序列组成的第1肽片段、由序列号2所记载的氨基酸序列组成的第2肽片段、和由序列号3所记载的氨基酸序列组成的第3肽片段中的1种、2种或3种肽片段。在该实施方式中，肽片段组(A1)可以包含除了第1～第3肽片段以外的肽片段，也可以不包含。

第1肽片段的氨基酸序列(序列号1：EAEAEFLIPAEEENPAFWNRQAAQ)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的86～109位。第2肽片段的氨基酸序列(序列号2：EGVSLEKREAEAE)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的78～90位。第3肽片段的氨基酸序列(序列号3：IPAEEENPAFWNR)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的93～105位。

肽片段组(A1)可以通过包含序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位的碱性磷酸酶的分解而产生。肽片段组(A1)也可以是通过去磷酸化试剂中不含有的碱性磷酸酶的分解而产生的，但通常是通过去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶的分解而产生的。因此，在去磷酸化试剂含有肽片段组(A1)的实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶通常是可以产生肽片段组(A1)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(A1)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

[肽片段组(A2)]

肽片段组(A2)由2种以上的肽片段构成，构成肽片段组(A2)的各肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位中的连续5～50个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的86～90位(EAEAE)。肽片段组(A2)由去磷酸化试剂所含有的肽片段中，相当于由选自序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位中的连续5～50个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的86～90位的肽片段的全部肽片段构成。

在构成肽片段组(A2)的各肽片段的氨基酸序列中，包含序列号10所记载的氨基酸序列的86～90位的位置不特别限定。包含序列号10所记载的氨基酸序列的86～90位的位置可以在肽片段的N末端部分、肽片段的C末端部分、以及肽片段的除了N末端部分和C末端部分以外的任意部分。

构成肽片段组(A2)的各肽片段的氨基酸序列，是序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位的一部分(由连续的多个氨基酸残基组成的部分)。即，肽片段组(A2)可以通过序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位的分解而产生。这并不意味着去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶必须包含序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位。去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶也可以不包含序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位。但是，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶优选包含序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位。

构成肽片段组(A2)的各肽片段的氨基酸序列，只要是序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位的一部分、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的86～90位就不特别限定，优选为序列号10所记载的氨基酸序列的71～125位的一部分、更优选为序列号10所记载的氨基酸序列的75～120位的一部分、更进一步优选为序列号10所记载的氨基酸序列的75～115位的一部分。

构成用于构成肽片段组(A2)的各肽片段的氨基酸残基的个数只要为5～50个就不特别限定，优选为5～40个、更优选为10～40个、更进一步优选为10～30个。

在优选的实施方式中，肽片段组(A2)包含选自由序列号1所记载的氨基酸序列组成的第1肽片段、和由序列号2所记载的氨基酸序列组成的第2肽片段中的1种或2种肽片段。在该实施方式中，肽片段组(A2)可以包含除了第1和第2肽片段以外的肽片段，也可以不包含。

第1肽片段的氨基酸序列(序列号1：

肽片段组(A2)可以通过包含序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位的碱性磷酸酶的分解而产生。肽片段组(A2)也可以是通过去磷酸化试剂中不含有的碱性磷酸酶的分解而产生的，但通常是通过去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶的分解而产生的。因此，在去磷酸化试剂含有肽片段组(A2)的实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶通常是可以产生肽片段组(A2)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(A2)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

[肽片段组(A3)]

肽片段组(A3)由2种以上的肽片段构成，构成肽片段组(A3)的各个肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位中的连续13～50个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的93～105位(IPAEEENPAFWNR)。肽片段组(A3)由去磷酸化试剂所含有的肽片段中，相当于由选自序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位中的连续13～50个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的93～105位的肽片段的全部肽片段构成。

在构成肽片段组(A3)的各肽片段的氨基酸序列中，包含序列号10所记载的氨基酸序列的93～105位的位置可以在肽片段的N末端部分、肽片段的C末端部分、以及肽片段的除了N末端部分和C末端部分以外的任意部分。

构成肽片段组(A3)的各肽片段的氨基酸序列，是序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位的一部分(由连续的多个氨基酸残基组成的部分)。即，肽片段组(A3)可以通过序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位的分解而产生。这并不意味着去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶必须包含序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位。去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶也可以不包含序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位。但是，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶优选包含序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位。

构成肽片段组(A3)的各肽片段的氨基酸序列，只要是序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位的一部分、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的93～105位就不特别限定，优选为序列号10所记载的氨基酸序列的75～130位的一部分、更优选为序列号10所记载的氨基酸序列的85～130位的一部分、更进一步优选为序列号10所记载的氨基酸序列的85～120位的一部分。

构成用于构成肽片段组(A3)的各肽片段的氨基酸残基的个数只要为13～50个就不特别限定，优选为13～45个、更优选为13～40个、更进一步优选为13～30个。

在优选的实施方式中，肽片段组(A3)包含选自由序列号1所记载的氨基酸序列组成的第1肽片段、和由序列号3所记载的氨基酸序列组成的第3肽片段中的1种或2种肽片段。在该实施方式中，肽片段组(A3)可以包含除了第1和第3肽片段以外的肽片段，也可以不包含。

第1肽片段的氨基酸序列(序列号1：EAEAEFL

肽片段组(A3)可以通过包含序列号10所记载的氨基酸序列的71～130位的碱性磷酸酶的分解而产生。肽片段组(A3)也可以是通过去磷酸化试剂中不含有的碱性磷酸酶的分解而产生的，但通常是通过去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶的分解而产生的。因此，在去磷酸化试剂含有肽片段组(A3)的实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶通常是可以产生肽片段组(A3)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(A3)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

[肽片段组(B1)]

肽片段组(B1)由1种以上的肽片段构成，构成肽片段组(B1)的各肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位中的连续5～20个氨基酸残基组成。肽片段组(B1)可以由1种以上的肽片段构成，也可以由2种以上的肽片段构成。肽片段组(B1)由去磷酸化试剂所含有的肽片段中，相当于由选自序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位中的连续5～20个氨基酸残基组成的肽片段的全部肽片段构成。

构成肽片段组(B1)的各肽片段的氨基酸序列，是序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位的一部分(由连续的多个氨基酸残基组成的部分)。即，肽片段组(B1)可以通过序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位的分解而产生。这并不意味着去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶必须包含序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位。去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶也可以不包含序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位。但是，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶优选包含序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位。

构成肽片段组(B1)的各肽片段的氨基酸序列，只要是序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位的一部分就不特别限定，优选为序列号10所记载的氨基酸序列的161～195位的一部分、更优选为序列号10所记载的氨基酸序列的165～195位的一部分、更进一步优选为序列号10所记载的氨基酸序列的165～190位的一部分。

构成用于构成肽片段组(B1)的各肽片段的氨基酸残基的个数只要为5～20个就不特别限定，优选为8～20个、更优选为10～20个、更进一步优选为12～20个。

在优选的实施方式中，肽片段组(B1)包含由序列号4所记载的氨基酸序列组成的第4肽片段。在该实施方式中，肽片段组(B1)可以包含除了第4肽片段以外的肽片段，也可以不包含。

第4肽片段的氨基酸序列(序列号4：DRQVPDSAGTA)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的177～187位。

肽片段组(B1)可以通过包含序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位的碱性磷酸酶的分解而产生。肽片段组(B1)也可以是通过去磷酸化试剂中不含有的碱性磷酸酶的分解而产生的，但通常是通过去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶的分解而产生的。因此，在去磷酸化试剂含有肽片段组(B1)的实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶通常是可以产生肽片段组(B1)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(B1)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b2)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b2)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

[肽片段组(B2)]

肽片段组(B2)由1种以上的肽片段构成，构成肽片段组(B2)的各肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位中的连续11～20个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的177～187位(DRQVPDSAGTA)。肽片段组(B2)可以由1种以上的肽片段构成，也可以由2种以上的肽片段构成。肽片段组(B2)由去磷酸化试剂所含有的肽片段中，相当于由选自序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位中的连续11～20个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的177～187位的肽片段的全部肽片段构成。

在构成肽片段组(B2)的各肽片段的氨基酸序列中，包含序列号10所记载的氨基酸序列的177～187位的位置不特别限定。包含序列号10所记载的氨基酸序列的177～187位的位置可以在肽片段的N末端部分、肽片段的C末端部分、以及肽片段的除了N末端部分和C末端部分以外的任意部分。

构成肽片段组(B2)的各肽片段的氨基酸序列，是序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位的一部分(由连续的多个氨基酸残基组成的部分)。即，肽片段组(B2)可以通过序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位的分解而产生。这并不意味着去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶必须包含序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位。去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶也可以不包含序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位。但是，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶优选包含序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位。

构成肽片段组(B2)的各肽片段的氨基酸序列，只要是序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位的一部分、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的177～187位就不特别限定，优选为序列号10所记载的氨基酸序列的161～195位的一部分、更优选为序列号10所记载的氨基酸序列的161～190位的一部分、更进一步优选为序列号10所记载的氨基酸序列的165～190位的一部分。

构成用于构成肽片段组(B2)的各肽片段的氨基酸残基的个数只要为11～20个就不特别限定，优选为8～20个、更优选为10～20个、更进一步优选为12～20个。

在优选的实施方式中，肽片段组(B2)包含由序列号4所记载的氨基酸序列组成的第4肽片段。在该实施方式中，肽片段组(B2)可以包含除了第4肽片段以外的肽片段，也可以不包含。

第4肽片段的氨基酸序列(序列号4：DRQVPDSAGTA)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的177～187位。

肽片段组(B2)可以通过包含序列号10所记载的氨基酸序列的161～200位的碱性磷酸酶的分解而产生。肽片段组(B2)也可以是通过去磷酸化试剂中不含有的碱性磷酸酶的分解而产生的，但通常是通过去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶的分解而产生的。因此，在去磷酸化试剂含有肽片段组(B2)的实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶通常是可以产生肽片段组(B2)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(B2)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b2)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b2)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

[肽片段组(C1)]

肽片段组(C1)由1种以上的肽片段构成，构成肽片段组(C1)的各肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位中的连续5～20个氨基酸残基组成。肽片段组(C1)可以由1种以上的肽片段构成，也可以由2种以上的肽片段构成。肽片段组(C1)由去磷酸化试剂所含有的肽片段中，相当于由选自序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位中的连续5～20个氨基酸残基组成的肽片段的全部肽片段构成。

构成肽片段组(C1)的各肽片段的氨基酸序列，是序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位的一部分(由连续的多个氨基酸残基组成的部分)。即，肽片段组(C1)可以通过序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位的分解而产生。这并不意味着去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶必须包含序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位。去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶也可以不包含序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位。但是，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶优选包含序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位。

构成肽片段组(C1)的各肽片段的氨基酸序列，只要是序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位的一部分就不特别限定，优选为序列号10所记载的氨基酸序列的455～490位的一部分、更优选为序列号10所记载的氨基酸序列的461～490位的一部分、更进一步优选为序列号10所记载的氨基酸序列的465～490位的一部分。

构成用于构成肽片段组(C1)的各肽片段的氨基酸残基的个数只要为5～20个就不特别限定，优选为6～20个、更优选为7～20个、更进一步优选为8～20个。

在优选的实施方式中，肽片段组(C1)包含由序列号5所记载的氨基酸序列组成的第5肽片段。在该实施方式中，肽片段组(C1)可以包含除了第5肽片段以外的肽片段，也可以不包含。

第5肽片段的氨基酸序列(序列号5：APGKALDSK)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的469～477位。

肽片段组(C1)可以通过包含序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位的碱性磷酸酶的分解而产生。肽片段组(C1)也可以是通过去磷酸化试剂中不含有的碱性磷酸酶的分解而产生的，但通常是通过去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶的分解而产生的。因此，在去磷酸化试剂含有肽片段组(C1)的实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶通常是可以产生肽片段组(C1)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(C1)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b3)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b3)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

[肽片段组(C2)]

肽片段组(C2)由1种以上的肽片段构成，构成肽片段组(C2)的各肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位中的连续9～20个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的469～477位(APGKALDSK)。肽片段组(C2)可以由1种以上的肽片段构成，也可以由2种以上的肽片段构成。肽片段组(C2)由去磷酸化试剂所含有的肽片段中，相当于由选自序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位中的连续9～20个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的469～477位的肽片段的全部肽片段构成。

在构成肽片段组(C2)的各肽片段的氨基酸序列中，包含序列号10所记载的氨基酸序列的469～477位的位置不特别限定。包含序列号10所记载的氨基酸序列的469～477位的位置可以在肽片段的N末端部分、肽片段的C末端部分、以及肽片段的除了N末端部分和C末端部分以外的任意部分。

构成肽片段组(C2)的各肽片段的氨基酸序列，是序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位的一部分(由连续的多个氨基酸残基组成的部分)。即，肽片段组(C2)可以通过序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位的分解而产生。这并不意味着去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶必须包含序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位。去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶也可以不包含序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位。但是，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶优选包含序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位。

构成肽片段组(C2)的各肽片段的氨基酸序列，只要是序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位的一部分、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的469～477位就不特别限定，优选为序列号10所记载的氨基酸序列的455～490位的一部分、更优选为序列号10所记载的氨基酸序列的461～490位的一部分、更进一步优选为序列号10所记载的氨基酸序列的465～490位的一部分。

构成用于构成肽片段组(C2)的各肽片段的氨基酸残基的个数只要为9～20个就不特别限定，优选为9～19个、更优选为9～18个、更进一步优选为9～17个。

在优选的实施方式中，肽片段组(C2)包含由序列号5所记载的氨基酸序列组成的第5肽片段。在该实施方式中，肽片段组(C2)可以包含除了第5肽片段以外的肽片段，也可以不包含。

第5肽片段的氨基酸序列(序列号5：APGKALDSK)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的469～477位。

肽片段组(C2)可以通过包含序列号10所记载的氨基酸序列的451～490位的碱性磷酸酶的分解而产生。肽片段组(C2)也可以是通过去磷酸化试剂中不含有的碱性磷酸酶的分解而产生的，但通常是通过去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶的分解而产生的。因此，在去磷酸化试剂含有肽片段组(C2)的实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶是可以产生肽片段组(C2)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(C2)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b3)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b3)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

[肽片段组(D1)]

肽片段组(D1)由2种以上的肽片段构成，构成肽片段组(D1)的各肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位中的连续5～50个氨基酸残基组成。肽片段组(D1)由去磷酸化试剂所含有的肽片段中，相当于由选自序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位中的连续5～50个氨基酸残基组成的肽片段的全部肽片段构成。在优选的实施方式中，肽片段组(D1)由3种以上的肽片段构成。在进一步优选的实施方式中，肽片段组(D1)由4种以上的肽片段构成。

构成肽片段组(D1)的各肽片段的氨基酸序列，是序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位的一部分(由连续的多个氨基酸残基组成的部分)。即，肽片段组(D1)可以通过序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位的分解而产生。这并不意味着去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶必须包含序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位。去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶也可以不包含序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位。但是，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶优选包含序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位。

构成肽片段组(D1)的各肽片段的氨基酸序列，只要是序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位的一部分就不特别限定，优选为序列号10所记载的氨基酸序列的505～578位的一部分、更优选为序列号10所记载的氨基酸序列的511～578位的一部分、更进一步优选为序列号10所记载的氨基酸序列的511～571位的一部分。

构成用于构成肽片段组(D1)的各肽片段的氨基酸残基的个数只要为5～50个就不特别限定，优选为5～45个、更优选为10～40个、更进一步优选为10～30个。

在优选的实施方式中，肽片段组(D1)包含选自由序列号6所记载的氨基酸序列组成的第6肽片段、由序列号7所记载的氨基酸序列组成的第7肽片段、由序列号8所记载的氨基酸序列组成的第8肽片段、和由序列号9所记载的氨基酸序列组成的第9肽片段中的1种、2种、3种或4种肽片段。在该实施方式中，肽片段组(D1)可以包含除了第6～第9肽片段以外的肽片段，也可以不包含。

第6肽片段的氨基酸序列(序列号6：VPLASETHGGEDVAVF)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的516～531位。第7肽片段的氨基酸序列(序列号7：VPLASETHGGEDV)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的516～528位。第8肽片段的氨基酸序列(序列号8：GPQAHLVHGVQEETFVAH)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的534～551位。第9肽片段的氨基酸序列(序列号9：GPQAHLVHGVQE)相当于序列号10所记载的氨基酸序列的534～545位。

肽片段组(D1)可以通过包含序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位的碱性磷酸酶的分解而产生。肽片段组(D1)也可以是通过去磷酸化试剂中不含有的碱性磷酸酶的分解而产生的，但通常是通过去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶的分解而产生的。因此，在去磷酸化试剂含有肽片段组(D1)的实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶通常是可以产生肽片段组(D1)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(D1)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

[肽片段组(D2)]

肽片段组(D2)由2种以上的肽片段构成，构成肽片段组(D2)的各肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位中的连续13～50个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的516～528位(VPLASETHGGEDV)。肽片段组(D2)由去磷酸化试剂所含有的肽片段中，相当于由选自序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位中的连续13～50个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的516～528位的肽片段的全部肽片段构成。

在构成肽片段组(D2)的各肽片段的氨基酸序列中，包含序列号10所记载的氨基酸序列的516～528位的位置不特别限定。包含序列号10所记载的氨基酸序列的516～528位的位置可以在肽片段的N末端部分、肽片段的C末端部分、以及肽片段的除了N末端部分和C末端部分以外的任意部分。

构成肽片段组(D2)的各肽片段的氨基酸序列，是序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位的一部分(由连续的多个氨基酸残基组成的部分)。即，肽片段组(D2)可以通过序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位的分解而产生。这并不意味着去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶必须包含序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位。去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶也可以不包含序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位。但是，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶优选包含序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位。

构成肽片段组(D2)的各肽片段的氨基酸序列，只要是序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位的一部分、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的516～528位就不特别限定，优选为序列号10所记载的氨基酸序列的501～570位的一部分、更优选为序列号10所记载的氨基酸序列的501～560位的一部分、更进一步优选为序列号10所记载的氨基酸序列的501～555位的一部分。

构成用于构成肽片段组(D2)的各肽片段的氨基酸残基的个数只要为13～50个就不特别限定，优选为13～45个、更优选为13～40个、更进一步优选为13～35个。

在优选的实施方式中，肽片段组(D2)包含选自由序列号6所记载的氨基酸序列组成的第6肽片段、和由序列号7所记载的氨基酸序列组成的第7肽片段中的1种或2种肽片段。在该实施方式中，肽片段组(D2)可以包含除了第6和第7肽片段以外的肽片段，也可以不包含。

第6肽片段的氨基酸序列(序列号6：

肽片段组(D2)可以通过包含序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位的碱性磷酸酶的分解而产生。肽片段组(D2)也可以是通过去磷酸化试剂中不含有的碱性磷酸酶的分解而产生的，但通常是通过去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶的分解而产生的。因此，在去磷酸化试剂含有肽片段组(D2)的实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶是可以产生肽片段组(D2)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(D2)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

[肽片段组(D3)]

肽片段组(D3)由2种以上的肽片段构成，构成肽片段组(D3)的各肽片段由选自序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位中的连续12～50个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的534～545位(GPQAHLVHGVQE)。肽片段组(D3)由去磷酸化试剂所含有的肽片段中，相当于由选自序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位中的连续12～50个氨基酸残基组成、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的534～545位的肽片段的全部肽片段构成。

在构成肽片段组(D3)的各肽片段的氨基酸序列中，包含序列号10所记载的氨基酸序列的534～545位的位置可以在肽片段的N末端部分、肽片段的C末端部分、以及肽片段的除了N末端部分和C末端部分以外的任意部分。

构成肽片段组(D3)的各肽片段的氨基酸序列，是序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位的一部分(由连续的多个氨基酸残基组成的部分)。即，肽片段组(D3)可以通过序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位的分解而产生。这并不意味着去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶必须包含序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位。去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶也可以不包含序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位。但是，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶优选包含序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位。

构成肽片段组(D3)的各肽片段的氨基酸序列，只要是序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位的一部分、并且包含序列号10所记载的氨基酸序列的534～545位就不特别限定，优选为序列号10所记载的氨基酸序列的506～578位的一部分、更优选为序列号10所记载的氨基酸序列的511～578位的一部分、更进一步优选为序列号10所记载的氨基酸序列的521～578位的一部分。

构成用于构成肽片段组(D3)的各肽片段的氨基酸残基的个数只要为12～50个就不特别限定，优选为12～45个、更优选为12～40个、更进一步优选为12～35个。

在优选的实施方式中，肽片段组(D3)包含选自由序列号8所记载的氨基酸序列组成的第8肽片段、和由序列号9所记载的氨基酸序列组成的第9肽片段中的1种或2种肽片段。在该实施方式中，肽片段组(D3)可以包含除了第8和第9肽片段以外的肽片段，也可以不包含。

第8肽片段的氨基酸序列(序列号8：

肽片段组(D3)可以通过包含序列号10所记载的氨基酸序列的501～578位的碱性磷酸酶的分解而产生。肽片段组(D3)也可以是通过去磷酸化试剂中不含有的碱性磷酸酶的分解而产生的，但通常是通过去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶的分解而产生的。因此，在去磷酸化试剂含有肽片段组(D3)的实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶是可以产生肽片段组(D3)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(D3)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

《式的说明》

以下，对于本说明书中使用的式进行说明。

本说明书中使用的式如下。

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

上述式(A1)中，X

上述式(A2)中，X

上述式(A3)中，X

上述式(B1)中，X

上述式(B2)中，X

上述式(C1)中，X

上述式(C2)中，X

上述式(D1)中，X

上述式(D2)中，X

上述式(D3)中，X

上述式(1)中，X

上述式(2)中，X

上述式(3)中，X

上述式(4)中，X

上述式(5)中，X

上述式(6)中，X

上述式(7)中，X

上述式(8)中，X

上述式(9)中，X

上述式(A1)～(A3)、(B1)、(B2)、(C1)、(C2)、(D1)～(D3)和(1)～(9)中，Y表示由通过去磷酸化试剂的LC-UV分析而得的色谱利用自动积分法计算出的、碱性磷酸酶的峰面积值。“碱性磷酸酶的峰面积值”在去磷酸化试剂含有1种碱性磷酸酶的情况下，是指该1种碱性磷酸酶的峰面积值，在去磷酸化试剂含有2种以上的碱性磷酸酶的情况下，是指该2种以上的碱性磷酸酶的合计峰面积值(即，去磷酸化试剂所包含的全部种类的碱性磷酸酶的合计峰面积值)。

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

(X

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱利用自动积分法计算出的、肽片段组(A1)的峰面积值越小越优选。肽片段组(A1)的峰面积优选为14000以下、更优选为12000以下、更进一步优选为10000以下。肽片段组(A1)的峰面积值的下限值为检出限值。但是，从获得与用于减小肽片段组(A1)的峰面积值的劳动力(例如，通过纯化的肽片段组(A1)的分离除去)相符合的效果的观点考虑，肽片段组(A1)的峰面积优选为600以上、更优选为800以上、更进一步优选为1000以上。

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱利用自动积分法计算出的、肽片段组(A2)的峰面积值越小越优选。肽片段组(A2)的峰面积优选为6000以下、更优选为5000以下、更进一步优选为4000以下。肽片段组(A2)的峰面积值的下限值为检出限值。但.是，从获得与用于减小肽片段组(A2)的峰面积值的劳动力(例如，通过纯化的肽片段组(A2)的分离除去)相符合的效果的观点考虑，肽片段组(A2)的峰面积优选为500以上、更优选为800以上、更进一步优选为1000以上。

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱利用自动积分法计算出的、肽片段组(A3)的峰面积值越小越优选。肽片段组(A3)的峰面积优选为12000以下、更优选为10000以下、更进一步优选为8000以下。肽片段组(A3)的峰面积值的下限值为检出限值。但是，从获得与用于减小肽片段组(A3)的峰面积值的劳动力(例如，通过纯化的肽片段组(A3)的分离除去)相符合的效果的观点考虑，肽片段组(A3)的峰面积优选为500以上、更优选为800以上、更进一步优选为1000以上。

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱利用自动积分法计算出的、肽片段组(B1)的峰面积值越小越优选。肽片段组(B1)的峰面积优选为1500以下、更优选为1200以下、更进一步优选为1000以下。肽片段组(B1)的峰面积值的下限值为检出限值。但是，从获得与用于减小肽片段组(B1)的峰面积值的劳动力(例如，通过纯化的肽片段组(B1)的分离除去)相符合的效果的观点考虑，肽片段组(B1)的峰面积优选为100以上、更优选为150以上、更进一步优选为200以上。

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱利用自动积分法计算出的、肽片段组(B2)的峰面积值越小越优选。肽片段组(B2)的峰面积优选为1500以下、更优选为1200以下、更进一步优选为1000以下。肽片段组(B2)的峰面积值的下限值为检出限值。但是，从获得与用于减小肽片段组(B2)的峰面积值的劳动力(例如，通过纯化的肽片段组(B2)的分离除去)相符合的效果的观点考虑，肽片段组(B2)的峰面积优选为100以上、更优选为150以上、更进一步优选为200以上。

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱利用自动积分法计算出的、肽片段组(C1)的峰面积值越小越优选。肽片段组(C1)的峰面积优选为400以下、更优选为380以下、更进一步优选为350以下。肽片段组(C1)的峰面积值的下限值为检出限值。但是，从获得与用于减小肽片段组(C1)的峰面积值的劳动力(例如，通过纯化的肽片段组(C1)的分离除去)相符合的效果的观点考虑，肽片段组(C1)的峰面积优选为100以上、更优选为130以上、更进一步优选为150以上。

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱利用自动积分法计算出的、肽片段组(C2)的峰面积值越小越优选。肽片段组(C2)的峰面积优选为400以下、更优选为380以下、更进一步优选为350以下。肽片段组(C2)的峰面积值的下限值为检出限值。但是，从获得与用于减小肽片段组(C2)的峰面积值的劳动力(例如，通过纯化的肽片段组(C2)的分离除去)相符合的效果的观点考虑，肽片段组(C2)的峰面积优选为100以上、更优选为130以上、更进一步优选为150以上。

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱利用自动积分法计算出的、肽片段组(D1)的峰面积值越小越优选。肽片段组(D1)的峰面积优选为10000以下、更优选为8000以下、更进一步优选为7000以下。肽片段组(D1)的峰面积值的下限值为检出限值。但是，从获得与用于减小肽片段组(D1)的峰面积值的劳动力(例如，通过纯化的肽片段组(D1)的分离除去)相符合的效果的观点考虑，肽片段组(D1)的峰面积值为优选为600以上、更优选为800以上、更进一步优选为1000以上。

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱利用自动积分法计算出的、肽片段组(D2)的峰面积值越小越优选。肽片段组(D2)的峰面积优选为7500以下、更优选为7000以下、更进一步优选为6000以下。肽片段组(D2)的峰面积值的下限值为检出限值。但是，从获得与用于减小肽片段组(D2)的峰面积值的劳动力(例如，通过纯化的肽片段组(D2)的分离除去)相符合的效果的观点考虑，肽片段组(D2)的峰面积优选为500以上、更优选为600以上、更进一步优选为800以上。

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱利用自动积分法计算出的、肽片段组(D3)的峰面积值越小越优选。肽片段组(D3)的峰面积优选为2400以下、更优选为2000以下、更进一步优选为1500以下。肽片段组(D3)的峰面积值的下限值为检出限值。但是，从获得与用于减小肽片段组(D3)的峰面积值的劳动力(例如，通过纯化的肽片段组(D3)的分离除去)相符合的效果的观点考虑，肽片段组(D3)的峰面积优选为200以上、更优选为300以上、更进一步优选为400以上。

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱利用自动积分法计算出的、第1肽片段的峰面积值越小越优选。第1肽片段的峰面积优选为3000以下、更优选为2500以下、更进一步优选为2000以下。第1肽片段的峰面积值的下限值为检出限值。但是，从获得与用于减小第1肽片段的峰面积值的劳动力(例如，利用纯化的第1肽片段的分离除去)相符合的效果的观点考虑，第1肽片段的峰面积优选为500以上、更优选为800以上、更进一步优选为1000以上。

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱利用自动积分法计算出的、第2肽片段的峰面积值越小越优选。第2肽片段的峰面积优选为2000以下、更优选为1800以下、更进一步优选为1500以下。第2肽片段的峰面积值的下限值为检出限值。但是，从获得与用于减小第2肽片段的峰面积值的劳动力(例如，利用纯化的第2肽片段的分离除去)相符合的效果的观点考虑，第2肽片段的峰面积优选为500以上、更优选为800以上、更进一步优选为1000以上。

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱利用自动积分法计算出的、第3肽片段的峰面积值越小越优选。第3肽片段的峰面积优选为6000以下、更优选为3000以下、更进一步优选为1000以下。第3肽片段的峰面积值的下限值为检出限值。但是，从获得与用于减小第3肽片段的峰面积值的劳动力(例如，利用纯化的第3肽片段的分离除去)相符合的效果的观点考虑，第3肽片段的峰面积优选为500以上、更优选为800以上、更进一步优选为1000以上。

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱利用自动积分法计算出的、第4肽片段的峰面积值越小越优选。第4肽片段的峰面积优选为1500以下、更优选为1200以下、更进一步优选为1000以下。第4肽片段的峰面积值的下限值为检出限值。但是，从获得与用于减小第4肽片段的峰面积值的劳动力(例如，利用纯化的第4肽片段的分离除去)相符合的效果的观点考虑，第4肽片段的峰面积优选为100以上、更优选为150以上、更进一步优选为200以上。

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱利用自动积分法计算出的、第5肽片段的峰面积值越小越优选。第5肽片段的峰面积优选为400以下、更优选为380以下、更进一步优选为350以下。第5肽片段的峰面积值的下限值为检出限值。但是，从获得与用于减小第5肽片段的峰面积值的劳动力(例如，利用纯化的第5肽片段的分离除去)相符合的效果的观点考虑，第5肽片段的峰面积优选为100以上、更优选为130以上、更进一步优选为150以上。

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱利用自动积分法计算出的、第6肽片段的峰面积值越小越优选。第6肽片段的峰面积优选为3000以下、更优选为2500以下、更进一步优选为2000以下。第6肽片段的峰面积值的下限值为检出限值。但是，从获得与用于减小第6肽片段的峰面积值的劳动力(例如，利用纯化的第6肽片段的分离除去)相符合的效果的观点考虑，第6肽片段的峰面积优选为100以上、更优选为150以上、更进一步优选为200以上。

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱利用自动积分法计算出的、第7肽片段的峰面积值越小越优选。第7肽片段的峰面积优选为4500以下、更优选为3000以下、更进一步优选为2500以下。第7肽片段的峰面积值的下限值为检出限值。但是，从获得与用于减小第7肽片段的峰面积值的劳动力(例如，利用纯化的第7肽片段的分离除去)相符合的效果的观点考虑，第7肽片段的峰面积优选为100以上、更优选为150以上、更进一步优选为200以上。

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱利用自动积分法计算出的、第8肽片段的峰面积值越小越优选。第8肽片段的峰面积优选为500以下、更优选为450以下、更进一步优选为400以下。第8肽片段的峰面积值的下限值为检出限值。但是，从获得与用于减小第8肽片段的峰面积值的劳动力(例如，利用纯化的第8肽片段的分离除去)相符合的效果的观点考虑，第8肽片段的峰面积优选为100以上、更优选为150以上、更进一步优选为200以上。

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱利用自动积分法计算出的、第9肽片段的峰面积值越小越优选。第9肽片段的峰面积优选为1000以下、更优选为900以下、更进一步优选为800以下。第9肽片段的峰面积值的下限值为检出限值。但是，从获得与用于减小第9肽片段的峰面积值的劳动力(例如，利用纯化的第9肽片段的分离除去)相符合的效果的观点考虑，第9肽片段的峰面积优选为100以上、更优选为150以上、更进一步优选为200以上。

由通过使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液的LC-UV分析而得的色谱利用自动积分法计算出的、碱性磷酸酶的峰面积优选为200000以上、更优选为220000以上、更进一步优选为240000以上。碱性磷酸酶的峰面积值的上限值不特别限定。碱性磷酸酶的峰面积优选为500000以下、更优选为400000以下、更进一步优选为350000以下。

《LC-MS/MS分析和LC-UV分析》

以下，对于LC-MS/MS分析和LC-UV分析进行说明。

LC-MS/MS分析和LC-UV分析使用所要求出的比率与去磷酸化试剂相同的样品实施。LC-MS/MS分析和LC-UV分析例如，可以使用由去磷酸化试剂制备的、碱性磷酸酶浓度为10重量％的水溶液来实施。

LC-MS/MS分析是联用法的一种。联用法是将气相色谱、液相色谱等色谱与质量分析装置接续而进行分析的手法。LC-MS/MS分析是将液相色谱(LC)与串联质量分析装置(MS/MS)接续而进行分析的手法。在LC-MS/MS分析中，被液相色谱分离出的分析对象成分被离子化，生成的离子被串联质量分析装置分离，特定的质量离子片段化而被检测出。

提取离子色谱是在联用法中，以一定的时间间隔测定质谱，使其存储在计算机中，然后读取特定的(不限于1种)m/z值中的相对强度，作为时间的函数而表示的色谱。

构成为了检测构成肽片段组(A1)的各肽片段的峰而使用的肽片段组(A1)的各肽片段的离子的m/z优选为50～2200、更优选为200～1500、更进一步优选为300～1200。构成肽片段组(A2)、肽片段组(A3)、肽片段组(B1)、肽片段组(B2)、肽片段组(C1)、肽片段组(C2)、肽片段组(D1)、肽片段组(D2)或肽片段组(D3)的各肽片段的离子的m/z值也同样。

第1肽片段的离子的m/z值为920.7682，第2肽片段的离子的m/z值为723.8572，第3肽片段的离子的m/z值为786.8757，第4肽片段的离子的m/z值为558.7676，第5肽片段的离子的m/z值为443.7533，第6肽片段的m/z值为814.4018，第7肽片段的m/z值为655.8148，第8肽片段的m/z值为652.6623，第9肽片段的m/z值为636.3282。

对于m/z值被特定了的肽片段的离子，可以基于m/z值而制成肽片段的离子的提取离子色谱。对于m/z值未被特定的肽片段，可以通过显示某峰的肽片段的氨基酸序列分析来确认该峰是否相当于规定的肽片段的峰，然后基于该峰的m/z值制成肽片段的提取离子色谱。

LC-UV分析是将液相色谱(LC)与紫外线检测器(UV检测器)接续而进行分析的手法。在LC-UV分析中，碱性磷酸酶作为在214nm具有吸收的成分被检测出。

《LC-MS/MS分析的具体条件》

LC-MS/MS分析的具体条件如下。

<装置构成>

质量分析计：maXis impact(Bruker Daltnics，InC.制)

<质量分析条件>

离子化方式：ESI

测定离子：正离子

毛细管电压：4500V

雾化器：2.0巴

干气：8.0L/分钟

检测器电压：1823V

测定范围(MS)：m/z 50～2200

测定范围(MS)：m/z 50～2200

碰撞气：氮气

《LC-UV分析的条件》

LC-UV分析的具体条件如下。

<装置构成>

波相色谱：LC-30A系统(岛津制作所制)

检测器：UV-Vis(190～900nm、岛津制作所制)

<液相色谱条件>

柱：Acquity BEH C18 1.7μm(Waters Corporation制)柱尺寸：2.1mm×100mm

柱温度：50℃

移动相流速：0.2mL/分钟

移动相A：水/甲酸混液(1000∶1)

移动相B：乙腈/水/甲酸混液(900∶100∶1)

注入量：20μL

梯度程序：

表1

《第1方案》

本发明作为第1方案，提供评价去磷酸化试剂的品质的方法。

第1方案所涉及的方法包括以下工序：

工序(1-1)，准备含有碱性磷酸酶、和该碱性磷酸酶来源的肽片段的去磷酸化试剂；和

工序(1-2)，在肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率为规定的基准值以下的情况下，评价为去磷酸化试剂的品质高。

工序(1-1)和工序(1-2)依次进行。

工序(1-1)是准备含有碱性磷酸酶、和该碱性磷酸酶来源的肽片段的去磷酸化试剂的工序。

在第1方案所涉及的方法中，为了品质评价而使用去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的1种以上的肽片段。肽片段是否是去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的，可以通过分析碱性磷酸酶和肽片段的氨基酸序列来判断。

在一个实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的1种肽片段为了品质评价而使用。在其他实施方式中，去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的2种以上的肽片段(肽片段组)为了品质评价而使用。

去磷酸化试剂除了为了品质评价而使用的1种以上的肽片段以外，可以包含不用于品质评价的1种以上的肽片段(该肽片段可以来源于去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶，也可以不来源来源于去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶)。去磷酸化试剂除了肽片段以外，可以含有1种以上的成分。作为其他成分，可列举例如，水等水性介质、镁盐、钠盐等金属盐、表面活性剂、有机酸、甘油等。

去磷酸化试剂具有优选为2000U/mg以上、更优选为2500U/mg以上、更进一步优选为3000U/mg以上的碱性磷酸酶比活性。去磷酸化试剂所具有的碱性磷酸酶比活性如下测定。通过测定通过在对硝基苯基磷酸酯水溶液中添加碱性磷酸酶而生成的对硝基苯酚来源的405nm的吸光度，可以计算出碱性磷酸酶的比活性。

在一个实施方式中，去磷酸化试剂含有肽片段组(A1)。去磷酸化试剂除了肽片段组(A1)以外，还可以含有去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的1种以上的肽片段。在优选的实施方式中，肽片段组(A1)包含选自第1～第3肽片段中的1种、2种或3种肽片段。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(A1)的实施方式中，去磷酸化试剂含有可以产生肽片段组(A1)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(A1)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，去磷酸化试剂含有肽片段组(A2)。去磷酸化试剂除了肽片段组(A2)以外，还可以含有去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的1种以上的肽片段。在优选的实施方式中，肽片段组(A2)包含选自第1和第2肽片段中的1种或2种肽片段。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(A2)的实施方式中，去磷酸化试剂含有可以产生肽片段组(A2)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(A2)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)的碱性磷酸酶。

在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，去磷酸化试剂含有肽片段组(A3)。去磷酸化试剂除了肽片段组(A3)以外，还可以含有去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的1种以上的肽片段。在优选的实施方式中，肽片段组(A3)包含选自第1和第3肽片段中的1种或2种肽片段。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(A3)的实施方式中，去磷酸化试剂含有可以产生肽片段组(A3)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(A3)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)的碱性磷酸酶。

在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，去磷酸化试剂含有第2肽片段。去磷酸化试剂除了第2肽片段以外，还可以含有去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的1种以上的肽片段。在优选的实施方式中，去磷酸化试剂进一步含有选自第1和第3肽片段中的1种或2种肽片段。

在去磷酸化试剂含有第2肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂含有可以产生第2肽片段的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生第2肽片段的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)的碱性磷酸酶。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b1)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，去磷酸化试剂含有肽片段组(B1)。去磷酸化试剂除了肽片段组(B1)以外，还可以含有去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的1种以上的肽片段。在优选的实施方式中，肽片段组(B1)包含第4肽片段。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(B1)的实施方式中，去磷酸化试剂含有可以产生肽片段组(B1)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(B1)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b2)的碱性磷酸酶。

在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b2)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，去磷酸化试剂含有肽片段组(B2)。去磷酸化试剂除了肽片段组(B2)以外，还可以含有去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的1种以上的肽片段。在优选的实施方式中，肽片段组(B2)包含第4肽片段。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(B2)的实施方式中，去磷酸化试剂含有可以产生肽片段组(B2)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(B2)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b2)的碱性磷酸酶。

在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b2)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，去磷酸化试剂含有第4肽片段。去磷酸化试剂除了第4肽片段以外，还可以含有去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的1种以上的肽片段。

在去磷酸化试剂含有第4肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂含有可以产生第4肽片段的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生第4肽片段的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b2)的碱性磷酸酶。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b2)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，去磷酸化试剂含有肽片段组(C1)。去磷酸化试剂除了肽片段组(C1)以外，还可以含有去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的1种以上的肽片段。在优选的实施方式中，肽片段组(C1)包含第5肽片段。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(C1)的实施方式中，去磷酸化试剂含有可以产生肽片段组(C1)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(C1)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b3)的碱性磷酸酶。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b3)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，去磷酸化试剂含有肽片段组(C2)。去磷酸化试剂除了肽片段组(C2)以外，还可以含有去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的1种以上的肽片段。在优选的实施方式中，肽片段组(C2)包含第5肽片段。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(C2)的实施方式中，去磷酸化试剂含有可以产生肽片段组(C2)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(C2)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b3)的碱性磷酸酶。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b3)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，去磷酸化试剂含有第5肽片段。去磷酸化试剂除了第5肽片段以外，还可以含有去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的1种以上的肽片段。

在去磷酸化试剂含有第5肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂含有可以产生第5肽片段的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生第5肽片段的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b3)的碱性磷酸酶。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b3)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，去磷酸化试剂含有肽片段组(D1)。去磷酸化试剂除了肽片段组(D1)以外，还可以含有去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的1种以上的肽片段。在优选的实施方式中，肽片段组(D1)包含选自第6～第9肽片段中的1种、2种、3种或4种肽片段。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(D1)的实施方式中，去磷酸化试剂含有可以产生肽片段组(D1)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(D1)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)的碱性磷酸酶。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，去磷酸化试剂含有肽片段组(D2)。去磷酸化试剂除了肽片段组(D2)以外，还可以含有去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的1种以上的肽片段。在优选的实施方式中，肽片段组(D2)包含选自第6和第7肽片段中的1种或2种肽片段。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(D2)的实施方式中，去磷酸化试剂含有可以产生肽片段组(D2)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(D2)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)的碱性磷酸酶。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，去磷酸化试剂含有肽片段组(D3)。去磷酸化试剂除了肽片段组(D3)以外，还可以含有去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的1种以上的肽片段。在优选的实施方式中，肽片段组(D3)包含选自第8和第9肽片段中的1种或2种肽片段。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(D3)的实施方式中，去磷酸化试剂含有可以产生肽片段组(D3)的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生肽片段组(D3)的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)的碱性磷酸酶。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，去磷酸化试剂含有第7肽片段。去磷酸化试剂除了第7肽片段以外，还可以含有去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的1种以上的肽片段。在优选的实施方式中，去磷酸化试剂进一步含有选自第6、第8和第9肽片段中的1种、2种或3种肽片段。

在去磷酸化试剂含有第7肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂含有可以产生第7肽片段的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生第7肽片段的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)的碱性磷酸酶。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，去磷酸化试剂含有第8肽片段。去磷酸化试剂除了第8肽片段以外，还可以含有去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的1种以上的肽片段。在优选的实施方式中，去磷酸化试剂进一步含有选自第6、第7和第9肽片段中的1种、2种或3种肽片段。

在去磷酸化试剂含有第8肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂含有可以产生第8肽片段的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生第8肽片段的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)的碱性磷酸酶。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，去磷酸化试剂含有第9肽片段。去磷酸化试剂除了第9肽片段以外，还可以含有去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的1种以上的肽片段。在优选的实施方式中，去磷酸化试剂进一步含有选自第6、第7和第8肽片段中的1种、2种或3种肽片段。

在去磷酸化试剂含有第9肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂含有可以产生第9肽片段的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生第9肽片段的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)的碱性磷酸酶。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b4)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。

在一个实施方式中，去磷酸化试剂含有第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段。去磷酸化试剂除了第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段以外，还可以含有去磷酸化试剂所含有的碱性磷酸酶来源的1种以上的肽片段。在优选的实施方式中，去磷酸化试剂进一步含有选自第1、第3和第6肽片段中的1种、2种或3种肽片段。

在去磷酸化试剂含有第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段的实施方式中，去磷酸化试剂含有可以产生第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，可以产生第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段的碱性磷酸酶选自上述碱性磷酸酶(a)和(b5)的碱性磷酸酶。在该实施方式中，去磷酸化试剂含有选自上述碱性磷酸酶(a)和(b5)中的1种或2种以上的碱性磷酸酶。在优选的实施方式中，上述碱性磷酸酶(b5)包含选自序列号10所记载的氨基酸序列的91～109位、93～105位和529～531位中的1种或2种以上。在上述碱性磷酸酶(b5)包含选自序列号10所记载的氨基酸序列的91～109位、93～105位和529～531位中的1种或2种以上的实施方式中，该碱性磷酸酶能够产生选自第1、第3和第6肽片段中的1种、2种或3种肽片段。在更优选的实施方式中，上述碱性磷酸酶(b5)包含选自序列号10所记载的氨基酸序列的91～109位和529～531位。上述碱性磷酸酶(b5)包含选自序列号10所记载的氨基酸序列的91～109位和529～531位的实施方式中，该碱性磷酸酶能够产生第1、第3和第6肽片段的3种肽片段。

工序(1-1)中准备的去磷酸化试剂可以是预先实施了降低以下的杂质的任意1种以上的含量的处理的去磷酸化试剂。

·肽片段组(A1)

·肽片段组(A2)

·肽片段组(A3)

·肽片段组(B1)

·肽片段组(B2)

·肽片段组(C1)

·肽片段组(C2)

·肽片段组(D1)

·肽片段组(D2)

·肽片段组(D3)

·第2肽片段(优选为第2肽片段、以及选自第1和第3肽片段中的1种或2种肽片段)

·第4肽片段

·第5肽片段

·第7肽片段(优选为第7肽片段、以及选自第6、第8和第9肽片段中的1种、2种或3种肽片段)

·第8肽片段(优选为第8肽片段、以及选自第6、第7和第9肽片段中的1种、2种或3种肽片段)

·第9肽片段(优选为第9肽片段、以及选自第6、第7和第8肽片段中的1种、2种或3种肽片段)

·第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段(优选为第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段、以及选自第1、第3和第6肽片段中的1种、2种或3种肽片段)

例如，可以通过从来自牛、虾等的脏器的碱性磷酸酶提取物、来自导入了编码碱性磷酸酶的基因的微生物的碱性磷酸酶提取物、导入了编码碱性磷酸酶的基因的微生物的菌体破碎物、市售的碱性磷酸酶制品等，分离上述杂质的任意1种以上，来降低上述杂质的任意1种以上的含量。作为分离方法，可列举例如，透析、盐析、凝胶过滤、超滤、膜分离、离子交换、柱色谱、电泳等。分离方法可以单独使用1种，也可以2种以上组合使用。例如，通过将市售的碱性磷酸酶制品用柱色谱等纯化，可以使上述杂质的任意1种以上的含量降低到所期望的范围。柱色谱例如为液相色谱。液相色谱中使用的柱和移动相只要能够分离上述杂质的任意1种以上就不特别限定，优选使用担持了C18的反相柱。

工序(1-2)是在肽片段组的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率为规定的基准值以下的情况下，评价为去磷酸化试剂的品质高的工序。

去磷酸化试剂中的碱性磷酸酶的含量可以通过公知的方法测定。去磷酸化试剂中的碱性磷酸酶的含量可以作为反映碱性磷酸酶的含量的量测定。作为反映碱性磷酸酶的含量的量，可列举例如，由LC-UV分析而得的色谱计算出的碱性磷酸酶的峰面积值。可以通过使用显示碱性磷酸酶的含量与碱性磷酸酶的峰面积的关系的标准曲线，由碱性磷酸酶的峰面积值求出去磷酸化试剂中的碱性磷酸酶的含量。

去磷酸化试剂中的肽片段的含量可以通过公知的方法测定。去磷酸化试剂中的肽片段的含量可以作为反映肽片段的含量的量测定。作为反映肽片段的含量的量，可列举例如，由LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱计算出的肽片段的峰面积值。可以通过使用显示肽片段的含量与肽片段的峰面积的关系的标准曲线，由肽片段的峰面积值求出去磷酸化试剂中的肽片段的含量。

规定的基准值可以根据肽片段的种类来适当确定。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(A1)的实施方式中，在肽片段组(A1)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(A1)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(A1)包含第1肽片段的实施方式中，在肽片段组(A1)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(A1)、并且第1肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(1)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(A1)包含第2肽片段的实施方式中，在肽片段组(A1)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(A1)、并且第2肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(2)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(A1)包含第3肽片段的实施方式中，在肽片段组(A1)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(A1)、并且第3肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(3)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(A1)包含选自第1、第2和第3肽片段中的2种以上的肽片段的实施方式中，在肽片段组(A1)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(A1)、并且所选择的2种以上的肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率分别满足上述规定的式的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(A2)的实施方式中，在肽片段组(A2)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(A2)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(A2)包含第1肽片段的实施方式中，在肽片段组(A2)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(A2)、并且第1肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(1)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(A2)包含第2肽片段的实施方式中，在肽片段组(A2)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(A2)、并且第2肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(2)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(A2)包含第1和第2肽片段的实施方式中，在肽片段组(A2)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(A2)、并且第1和第2肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率分别满足上述式(1)和(2)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(A3)的实施方式中，在肽片段组(A3)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(A3)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(A3)包含第1肽片段的实施方式中，在肽片段组(A3)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(A3)、并且第1肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(1)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(A3)包含第3肽片段的实施方式中，在肽片段组(A3)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(A3)、并且第3肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(3)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(A3)包含第1和第3肽片段的实施方式中，在肽片段组(A3)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(A3)、并且第1和第3肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率分别满足上述式(1)和(3)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第2肽片段的实施方式中，在第2肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(2)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第1和第2肽片段的实施方式中，在第2肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(2)、并且第1肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(1)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第2和第3肽片段的实施方式中，在第2肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(2)、并且第3肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(3)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第1、第2和第3肽片段的实施方式中，在第2肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(2)、并且第1和第3肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率分别满足上述式(1)和(3)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(B1)的实施方式中，在肽片段组(B1)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(B1)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(B1)包含第4肽片段的实施方式中，在肽片段组(B1)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(B1)、并且第4肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(4)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(B2)的实施方式中，在肽片段组(B2)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(B2)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(B2)包含第4肽片段的实施方式中，在肽片段组(B2)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(B2)、并且第4肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(4)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第4肽片段的实施方式中，在第4肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(4)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(C1)的实施方式中，在肽片段组(C1)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(C1)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(C1)包含第5肽片段的实施方式中，在肽片段组(C1)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(C1)、并且第5肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(5)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(C2)的实施方式中，在肽片段组(C2)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(C2)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(C2)包含第5肽片段的实施方式中，在肽片段组(C2)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(C2)、并且第5肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(5)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第5肽片段的实施方式中，在第5肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(5)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(D1)的实施方式中，在肽片段组(D1)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(D1)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(D1)包含第6肽片段的实施方式中，在肽片段组(D1)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(D1)、并且第6肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(6)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(D1)包含第7肽片段的实施方式中，在肽片段组(D1)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(D1)、并且第7肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(7)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(D1)包含第8肽片段的实施方式中，在肽片段组(D1)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(D1)、并且第8肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(8)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(D1)包含第9肽片段的实施方式中，在肽片段组(D1)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(D1)、并且第9肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(9)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(D1)包含选自第6、第7、第8和第9肽片段中的2种以上的肽片段的实施方式中，在肽片段组(D1)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(D1)、并且所选择的2种以上的肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率分别满足上述规定的式的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(D2)的实施方式中，在肽片段组(D2)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(D2)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(D2)包含第6肽片段的实施方式中，在肽片段组(D2)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(D2)、并且第6肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(6)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(D2)包含第7肽片段的实施方式中，在肽片段组(D2)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(D2)、并且第7肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(7)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(D2)包含第6和第7肽片段的实施方式中，在肽片段组(D2)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(D2)、并且第6和第7肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率分别满足上述式(6)和(7)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有肽片段组(D3)的实施方式中，在肽片段组(D3)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(D3)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(D3)包含第8肽片段的实施方式中，在肽片段组(D3)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(D3)、并且第8肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(8)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(D3)包含第9肽片段的实施方式中，在肽片段组(D3)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(D3)、并且第9肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(9)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在肽片段组(D3)包含第8和第9肽片段的实施方式中，在肽片段组(D3)的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(D3)、并且第8和第9肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率分别满足上述式(8)和(9)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第7肽片段的实施方式中，在第7肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(7)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第6和第7肽片段的实施方式中，在第7肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(7)、并且第6肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(6)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第7和第8肽片段的实施方式中，在第7肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(7)、并且第8肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(8)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第7和第9肽片段的实施方式中，在第7肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(7)、并且第9肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(9)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第7肽片段、和选自第6、第8和第9肽片段中的2种以上的肽片段的实施方式中，在第7肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(7)、并且所选择的2种以上的肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率分别满足上述规定的式的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第8肽片段的实施方式中，在第8肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(8)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第6和第8肽片段的实施方式中，在第8肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(8)、并且第6肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(6)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第7和第8肽片段的实施方式中，在第8肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(8)、并且第7肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(7)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第8和第9肽片段的实施方式中，在第8肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(8)、并且第9肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(9)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第8肽片段、和选自第6、第7和第9肽片段中的2种以上的肽片段的实施方式中，在第8肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(8)、并且所选择的2种以上的肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率分别满足上述规定的式的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第9肽片段的实施方式中，在第9肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(9)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第6和第9肽片段的实施方式中，在第9肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(9)、并且第6肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(6)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第7和第9肽片段的实施方式中，在第9肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(9)、并且第7肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(7)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第8和第9肽片段的实施方式中，在第9肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(9)、并且第8肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(8)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第9肽片段、和选自第6、第7和第8肽片段中的2种以上的肽片段的实施方式中，在第9肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(9)、并且所选择的2种以上的肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率分别满足上述规定的式的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段的实施方式中，在第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率分别满足上述式(2)、(4)、(5)、(7)、(8)和(9)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段、和第1肽片段的实施方式中，在第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率分别满足上述式(2)、(4)、(5)、(7)、(8)和(9)、并且第1肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(1)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段、和第3肽片段的实施方式中，在第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率分别满足上述式(2)、(4)、(5)、(7)、(8)和(9)、并且第3肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(3)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段、和第6肽片段的实施方式中，在第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率分别满足上述式(2)、(4)、(5)、(7)、(8)和(9)、并且第6肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述式(6)的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

在去磷酸化试剂含有第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段、和选自第1、第3和第6肽片段中的2种以上的肽片段的实施方式中，在第2、第4、第5、第7、第8和第9肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率分别满足上述式(2)、(4)、(5)、(7)、(8)和(9)、并且所选择的2种以上的肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率分别满足上述规定的式的情况下，可以评价为去磷酸化试剂的品质高。

对于在工序(1-2)中没有评价为品质高的去磷酸化试剂，也可以实施降低上述杂质的任意1种以上的含量的处理，以使其按照上述基准评价为品质高。由此，能够获得按照上述基准评价为品质高的去磷酸化试剂。

例如，可以通过由没有评价为品质高的去磷酸化试剂分离上述杂质的任意1种以上，来降低上述杂质的任意1种以上的含量。作为分离方法，可列举例如，透析、盐析、凝胶过滤、超滤、膜分离、离子交换、柱色谱、电泳等。分离方法可以单独使用1种，也可以2种以上组合使用。例如，通过将市售的碱性磷酸酶制品用柱色谱等纯化，可以使上述杂质的任意1种以上的含量降低到所期望的范围。柱色谱例如为液相色谱。液相色谱中使用的柱和移动相只要能够分离上述杂质的任意1种以上就不特别限定，优选使用担持了C18的反相柱。

《第2方案》

本发明的第2方案所涉及的方法，涉及检测目标核酸的方法。此外，因为如果实施目标核酸的定量，则必然也实施目标核酸的检测，所以本发明的第2方案所涉及的方法也包含伴随目标核酸的定量的目标核酸的检测。目标核酸的定量例如，可以基于所检测的目标核酸的强度(例如，所检测的标记物质的强度)来进行。

本发明的第2方案所涉及的方法包括以下工序：

工序(2-1)，准备包含目标核酸的样品；

工序(2-2)，准备含有碱性磷酸酶、和该碱性磷酸酶来源的肽片段的去磷酸化试剂；

工序(2-3)，将样品用去磷酸化试剂处理从而将目标核酸去磷酸化；

工序(2-4)，将去磷酸化后的目标核酸标记化；和

工序(2-5)，检测标记化后的目标核酸。

工序(2-1)和工序(2-2)的顺序不特别限定，工序(2-1)可以在工序(2-2)之前进行，也可以在工序(2-2)之后进行。工序(2-3)、工序(2-4)和工序(2-5)在进行了工序(2-1)和工序(2-2)之后依次行进行。

工序(2-1)是准备包含目标核酸的样品的工序。

目标核酸是要检测的核酸，根据检测目标核酸的目的等适当确定。作为检测目标核酸的目的，可列举例如，病毒的检测、细菌的检测、霉的检测、SNP(单碱基多态性)的检测、mRNA的检测、miRNA的检测、比较基因组杂交(CGH)、菌落数变动、基因组DNA序列的缺失·重复·融合的检测、转录产物的的缺失·重复·融合的检测等。

作为目标核酸，可列举例如，DNA、RNA、PNA(肽核酸)、LNA(锁核酸，Locked NucleicAcid)等核酸或核酸衍生物。作为核酸衍生物，可列举例如，包括修饰核苷酸(例如，包含卤素、甲基等烷基、甲氧基等烷氧基、硫代、羧甲基等基团的核苷酸、和受到碱基的再构成、双键的饱和、脱氨基化、氧分子向硫分子的置换等的核苷酸等)在内的核酸衍生物。核酸可以是单链，也可以是双链。作为DNA，可列举例如，染色体DNA，病毒的DNA、细菌、霉等的DNA、cDNA、它们的片段等。作为RNA，可列举例如，mRNA，rRNA，小RNA、它们的片段等。目标核酸也可以是化学合成的DNA、RNA等。作为目标核酸的具体例，可列举病原菌、病毒等的基因或其一部分、遗传病的致病基因或其一部分等。

包含目标核酸的样品可以通过例如，由生物体材料、病毒、细菌、霉、饮食物等利用常规方法提取核酸，从而制备。作为生物体材料，可列举例如，血液、血清、血浆、尿、粪便、脑脊液、唾液、拭子液、组织液等体液、细胞、组织等。生物体材料可以是动物来源的，也可以是植物来源的。

样品可以含有除了目标核酸以外的成分。样品可以含有除了目标核酸以外的核酸。在制备样品时，可以除去除了目标核酸以外的成分的至少一部分，也可以不除去。

样品中的目标核酸的含量只要能够检测目标核酸就不特别限定。例如，可以通过以目标核酸作为模板，实施PCR等核酸扩增法，从而扩增目标核酸。即，样品可以含有目标核酸的扩增产物。由此，可以提高目标核酸的检测灵敏度。

样品所含有的目标核酸的长度(碱基数)不特别限定。目标核酸的长度通常为10～300碱基、优选为10～100碱基、更优选为15～100碱基。目标核酸的长度可以通过片段化处理来适当调整。目标核酸的长度可以是例如，能够与探针杂交的长度。在目标核酸较长的情况(例如1500碱基以上、特别是4000碱基以上)下，优选将目标核酸进行片段化处理，将目标核酸的长度调整为适当的长度。在进行片段化处理时，不必从生成的核酸片段中选择特定的核酸片段，可以直接使用片段化处理物。

作为为了片段化而切断目标核酸的方法，可列举例如，照射超声波而切断的方法、用酶切断的方法、用限制性酶切断的方法、使用雾化器的方法、用酸或碱切断的方法等。在用超声波切断的方法的情况下，通过控制对核酸照射的超声波的输出强度和照射时间，能够将目标核酸切断成所期望的长度。

工序(2-2)是准备含有碱性磷酸酶、和该碱性磷酸酶来源的肽片段组的去磷酸化试剂的工序。

工序(2-2)中准备的去磷酸化试剂是通过本发明的第1方案所涉及的方法评价为品质高的去磷酸化试剂。

即使是通过本发明的第1方案所涉及的方法没有评价为品质高的去磷酸化试剂，也可以实施降低上述杂质的任意1种以上的含量的处理，以使其按照上述基准评价为品质高，然后作为在工序(2-2)中准备的去磷酸化试剂使用。

例如，可以通过由没有评价为品质高的去磷酸化试剂分离上述杂质的任意1种以上，来降低上述杂质的任意1种以上的含量。作为分离方法，可列举例如，透析、盐析、凝胶过滤、超滤、膜分离、离子交换、柱色谱、电泳等。分离方法可以单独使用1种，也可以2种以上组合使用。例如，通过将市售的碱性磷酸酶制品用柱色谱等纯化，可以使上述杂质的任意1种以上的含量降低到所期望的范围。柱色谱例如为液相色谱。液相色谱中使用的柱和移动相只要能够分离上述杂质的任意1种以上就不特别限定，优选使用担持了C18的反相柱。

工序(2-3)是将样品用去磷酸化试剂处理从而将目标核酸去磷酸化的工序。

通过将样品用去磷酸化试剂处理，从而目标核酸的5’末端和/或3’末端被去磷酸化。此外，在样品中包含除了目标核酸以外的核酸的情况下，除了目标核酸以外的核酸的5’末端和/或3’末端也被去磷酸化。

将目标核酸去磷酸化时的反应条件可以适当调节。反应时间通常为10～60分钟、优选为20～50分钟。反应温度通常为20～60℃、优选为25～45℃。反应通常在水等水性介质中进行。

混合存在于碱性磷酸酶中的上述杂质的任意1种以上可能在用碱性磷酸酶将核酸去磷酸化时带来坏影响。

这一点，在通过本发明的第1方案所涉及的方法评价为品质高的去磷酸化试剂中，上述杂质的任意1种以上的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述规定的式。即，在通过本发明的第1方案所涉及的方法评价为品质高的去磷酸化试剂中，上述杂质的任意1种以上的相对的含量降低了。因此，通过使用通过本发明的第1方案所涉及的方法评价为品质高的去磷酸化试剂，能够降低在用碱性磷酸酶将核酸去磷酸化时可以产生的上述杂质的任意1种以上的坏影响，能够提高核酸的去磷酸化效率。

工序(2-4)是将去磷酸化后的目标核酸标记化的工序。

去磷酸化后的目标核酸具有被碱性磷酸酶去磷酸化后的5’末端和/或3’末端，通过使标记物质与去磷酸化后的5’末端和/或3’末端结合，从而可以进行目标核酸的标记化。此外，在样品包含除了目标核酸以外的核酸的情况下，除了标记核酸以外的核酸也被标记化。

作为标记物质，可以使用例如，荧光色素、荧光蛋白、化学发光体、金属络合物、金属微粒、生物素、放射性同位素等。将目标核酸标记化时的反应条件可以根据标记物质的种类而适当调节。在标记物质是荧光色素的情况下，荧光色素的检测可以使用荧光显微镜、荧光扫描仪等来进行。

作为作为荧光色素，可列举例如，荧光素系色素、罗丹明系色素、Alexa Fluor(ィンビトロジェン社制)系色素、BODIPY(ィンビトロジェン社制)系色素、Cascade系色素、香豆素系色素、伊红系色素、NBD系色素、芘系色素、Texas Red系色素、酞菁系色素等有机荧光色素。

作为有机荧光色素的具体例，可列举5-羧基荧光素、6-羧基荧光素、5，6-二羧基荧光素、6-羧基-2’，4，4’，5’，7，7’-六氯荧光素、6-羧基-2’，4，7，7’-四氯荧光素、6-羧基-4’，5’-二氯-2’，7’-二甲氧基荧光素、萘并荧光素、5-羧基罗丹明、6-羧基罗丹明、5，6-二羧基罗丹明、罗丹明6G、四甲基罗丹明、X-罗丹明、Alexa Fluor 350、Alexa Fluor 405、AlexaFluor 430、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 500、Alexa Fluor 514、Alexa Fluor 532、Alexa Fluor 546、Alexa Fluor 555、Alexa Fluor 568、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor610、Alexa Fluor 633、Alexa Fluor 635、Alexa Fluor 647、Alexa Fluor 660、AlexaFluor 680、Alexa Fluor 700、Alexa Fluor 750、BODIPY FL、BODIPY TMR、BODIPY 493/503、BODIPY 530/550、BODIPY 558/568、BODIPY 564/570、BODIPY 576/589、BODIPY 581/591、BODIPY 630/650、BODIPY 650/665(以上インビト口ジ工ン社制)、甲氧基香豆素、伊红、NBD、芘、Cy5、Cy5.5、Cy7等。

混合存在于碱性磷酸酶中的上述杂质的任意1种以上可能在使标记物质与去磷酸化后的核酸结合时带来坏影响。

这一点，在通过本发明的第1方案所涉及的方法评价为品质高的去磷酸化试剂中，上述杂质的任意1种以上的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述规定的式。即，在通过本发明的第1方案所涉及的方法评价为品质高的去磷酸化试剂中，上述杂质的任意1种以上的相对含量降低了。因此，通过使用本发明的第1方案所涉及的方法评价为品质高的去磷酸化试剂，能够降低可以在使标记物质与去磷酸化后的核酸结合时产生的上述杂质的坏影响，能够提高去磷酸化后的核酸的标记化效率。特别是在标记物质使用

工序(2-5)是检测标记化后的目标核酸的工序。

目标核酸以与目标核酸结合的标记物质作为指标进行检测。即，目标核酸通过检测与目标核酸结合的标记物质而检测。标记物质的检测方法不特别限定，可以根据标记物质的种类而从公知的方法的中适当选择。基于检测到的信号(例如，检测到的标记物质的强度)，也可以进行目标核酸的定量。

目标核酸例如，可以使用杂交法进行检测。在杂交法中，可以使用能与目标核酸杂交的探针来检测目标核酸。在使用探针的核酸检测法的一个实施方式中，使标记化后的目标核酸、和能够与目标核酸杂交的探针接触，以与目标核酸结合的标记物质作为指标，检测与探针杂交了的目标核酸。在样品中包含除了目标核酸以外的核酸的情况下，优选使目标核酸与探针接触之后，通过洗涤等除去未与探针杂交的核酸。

使目标核酸与探针杂交时的反应条件可以根据目标核酸的链长、探针的链长等而适当调整。反应时间通常为30～1200分钟、优选为60～360分钟。反应温度通常为25～60℃、优选为30～40℃。反应通常在水等水性介质中进行。

目标核酸和探针的使用量只要能够进行目标核酸与探针的杂交、能够检测结合于目标核酸的标记物质，就不特别限定，可以根据目标核酸的链长、探针的链长、标记物质的种类等而适当调整。

作为探针，可以使用例如，DNA、RNA、PNA(肽核酸)、LNA(锁核酸，Locked NucleicAcid)等核酸或核酸衍生物。作为核酸衍生物，可列举例如，包括修饰核苷酸(例如，包含卤素、甲基等烷基、甲氧基等烷氧基、硫代、羧甲基等基团的核苷酸、和受到碱基的再构成、双键的饱和、脱氨基化、氧分子向硫分子的置换等的核苷酸等)在内的核酸衍生物。

探针具有与目标核酸的碱基序列的至少一部分互补的碱基序列，能够与目标核酸杂交。在目标核酸是双链的情况下，探针可以与正义链杂交，也可以与反义链杂交。探针的碱基序列可以与目标核酸的碱基序列中的任何部分互补，但优选与目标核酸的碱基序列中的特异性高的部分互补。即，探针的碱基序列优选与目标核酸的碱基序列中的、样品含有但其他核酸中不包含的碱基序列互补。

探针的碱基序列中的与目标核酸的碱基序列互补的部分的长度(碱基数)不特别限定，通常为10～150碱基、优选为20～100碱基、更优选为20～70碱基。探针可以由与目标核酸的碱基序列互补的碱基序列构成，也可以包含与目标核酸的碱基序列不互补的碱基序列。探针的全长(总碱基数)通常为10～300碱基、优选为20～200碱基、更优选为15～100碱基。

探针可以是市售品、合成品、来自生物体的制备物等的任一者。被称为寡核酸的长度为200碱基以内的核酸可以用合成仪容易地人工合成。

探针优选固定化于支撑体。即，在优选的实施方式中，核酸检测法是使用核酸微阵列的核酸检测法。核酸微阵列具有支撑体、和固定于支撑体的表面的多个探针。在使用核酸微阵列的核酸检测法中，可以使被标记化的目标核酸、和具备能与目标核酸杂交的探针的核酸微阵列接触，以结合于目标核酸的标记物质作为指标，检测与探针杂交的目标核酸。在样品包含除了目标核酸以外的核酸的情况下，优选使目标核酸与核酸微阵列接触，然后通过洗涤等除去核酸微阵列上的不与探针杂交的核酸。通过使用具备多个探针的核酸微阵列，能够同时检测2种以上的目标核酸。

支撑体只要能够固定化探针就不特别限定。作为支撑体，可列举例如，载玻片、膜、珠等。作为支撑体的材质，可列举例如，玻璃、陶瓷、硅等无机材料、聚对苯二甲酸乙二酯、醋酸纤维素、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、硅橡胶等聚合物等。

探针向支撑体的固定化可以按照常规方法进行。作为在支撑体上固定化探针的方法，在支撑体上面部合成寡核酸的方法、将预先合成好的寡核酸向支撑体上面部滴加并固定的方法等是公知的。作为前者的方法，可列举例如，Ronald等的方法(美国专利第5705610号说明书)、Michel等的方法(美国专利第6142266号说明书)、Francesco等的方法(美国专利第7037659号说明书)等。这些方法中在DNA合成反应时使用有机溶剂，因而支撑体期望是对有机溶剂具有耐性的材质。例如，可以使用利用日本特表平10-503841号公报所述的方法制作的具有凹凸结构的玻璃制支撑体。特别是在Francesco等的方法中，由于从支撑体的背面照射光，控制DNA合成，因此支撑体优选是具有透光性的材质。作为后者的方法，可列举例如，广田等的方法(日本特许第3922454号)、使用玻璃毛细管的方法等。作为玻璃毛细管的一例，可以使用自制的玻璃毛细管、マィクロピペツト((株)マィクロサポ一ト社制；MP-005)等市售制品。

作为目标核酸的检测方法，可以使用夹心杂交法。在夹心杂交法中，使用固定于支撑体的第1探针(捕捉探针)、和未固定于支撑体的第2探针(检测探针)。捕捉探针和检测探针分别具有与目标核酸的不同部分互补的碱基序列，能够与目标核酸的不同部分杂交。通过检测探针和捕捉探针与目标核酸杂交而形成复合物。通过检测该复合物所包含的标记物质，能够检测目标核酸。

检测探针的碱基序列与捕捉探针的碱基序列的序列同一性优选较低。序列同一性优选为20％以下，更优选为10％以下。这里，2条碱基序列的同一性是以碱基尽可能多地一致的方式将2条序列排列(根据需要加入间隙)，将一致的碱基教除以总碱基数(在2条碱基序列的碱基数不同的情况下为较大一方的碱基数)而得的数值，通过FASTA、BLAST等市售的软件(在互联网上也提供)能够容易地计算出。

将目标核酸的检测方法中检测到的信号(例如，检测到的标记物质的强度)与周围噪声进行比较。具体地，将由固定有探针的支撑体上的位置得到的信号值、与由未固定探针的支撑体上的位置得到的信号值(噪声值)进行比较，将前者的数值与噪声值的比作为S/N比。检测准确度可以通过S/N比表示。即，S/N比越大，则检测准确度越高，S/N比越小，则检测准确度越低。

混合存在于碱性磷酸酶中的上述杂质的任意1种以上可能给目标核酸的检测灵敏度带来坏影响。这一点，在通过本发明的第1方案所涉及的方法评价为品质高的去磷酸化试剂中，上述杂质的任意1种以上的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率满足上述规定的式。即，在通过本发明的第1方案所涉及的方法评价为品质高的去磷酸化试剂中，上述杂质的任意1种以上的相对的含量降低了。因此，通过使用通过本发明的第1方案所涉及的方法评价为品质高的去磷酸化试剂，能够降低上述杂质的任意1种以上对目标核酸的检测灵敏度的坏影响，能够提高目标核酸的检测灵敏度。该效果在使用微量(优选为5～1000μL、更优选为5～500μL)的样品的核酸检测法、例如使用核酸微阵列的核酸检测法中显著。

实施例

以下，通过实施例详细地说明本发明，但本发明不限于以下实施例。

《LC-MS/MS分析的条件》

实施例和比较例中使用的LC-MS/MS分析的条件如下。

<装置构成>

质量分析计：maXis impact(Bruker Daltnics，InC.制)

<质量分析条件>

离子化方式：ESI

测定离子：正离子

毛细管电压：4500V

雾化器：2.0巴

干气：8.0L/分钟

检测器电压：1823V

测定范围(MS)：m/z 50～2200

测定范围(MS)：m/z 50～2200

碰撞气：氮气

《LC-UV分析的条件》

实施例和比较例中使用的LC-UV分析的条件如下。

<装置构成>

液相色谱：LC-30A系统(岛津制作所制)

检测器：UV-Vis(190～900nm，岛津制作所制)

<液相色谱条件>

柱：Acquity BEH C18 1.7μm(Waters Corporation制)柱尺寸：2.1mm×100mm

柱温度：50℃

移动相流速：0.2mL/分钟

移动相A：水/甲酸混液(1000∶1)

移动相B：乙腈/水/甲酸混液(900∶100∶1)

注入量：20μL

梯度程序：

表2

《核酸检测法》

实施例和比较例中使用的核酸检测法如下。

核酸的检测使用DNA芯片(DNA微阵列)进行。具体地，使用東レ株式会社制的“3D-Gene”human miRNA oligo Chip(对应于miRBAse release 21)来进行。

[比较例1～8]

使用从5个公司购买的8种碱性磷酸酶制品(以下称为“组合物C1”～“组合物C8”)作为比较例1～8的碱性磷酸酶组合物。组合物C1～C8各自所包含的碱性磷酸酶是牛的肠道来源的碱性磷酸酶。测定组合物C1～C8各自的碱性磷酸酶比活性，结果组合物C1为2238U/mg、组合物C2为2492U/mg、组合物C3为2431U/mg、组合物C4为2519U/mg、组合物C5为2411U/mg、组合物C6为2552U/mg、组合物C7为2448U/mg、组合物C8为2490U/mg。此外，碱性磷酸酶比活性通过使用对硝基苯基磷酸酯的方法测定。具体如下。

准备下述溶液A和B。

溶液A：1M二乙醇胺缓冲液(pH9.8)

溶液B：0.67M对硝基苯酚磷酸水溶液

在Cubette(光路长＝1Cm)中调制溶液A 2.9mL和溶液B 0.1mL，在37℃加温5分钟。接着，添加碱性磷酸酶水溶液0.1mL，用分光光度计测定405nm(37℃)的吸光度变化3～5分钟，求出每单位时间的吸光度变化(ΔOD)。作为对照用添加了水的样品代替碱性磷酸酶水溶液求出吸光度变化(ΔOD空白)。通过下述式计算出碱性磷酸酶活性(U/mL)。

碱性磷酸酶活性(U/mL)＝(ΔOD-ΔOD空白)×3.1/(18.2×0.1×1.0)

碱性磷酸酶水溶液中的碱性磷酸酶的浓度通过测定214nm的吸光度而计算出。将碱性磷酸酶水溶液用蒸馏水稀释使得214nm的吸光度为0.1～1.0，以1ABs＝1mg/mL近似而将乘以稀释倍率而得的值作为碱性磷酸酶的浓度。本发明中的比活性是指每1mg碱性磷酸酶的活性(U/mg)，通过上述测定法计算出。

由组合物C1～C8分别制备10重量％碱性磷酸酶水溶液，使用该水溶液进行LC-UV分析和LC-MS/MS分析。基于通过LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱，通过自动积分法计算出由序列号1所记载的氨基酸序列(EAEAEFLIPAEEENPAFWNRQAAQ)组成的第1肽片段、由序列号2所记载的氨基酸序列(EGVSLEKREAEAE)组成的第2肽片段、和由序列号3所记载的氨基酸序列(IPAEEENPAFWNR)组成的第3肽片段、由序列号4所记载的氨基酸序列(DRQVPDSAGTA)组成的第4肽片段、由序列号5所记载的氨基酸序列(APGKALDSK)组成的第5肽片段、由序列号6所记载的氨基酸序列(V PLASETHGGEDVAVF)组成的第6肽片段、由序列号7所记载的氨基酸序列(VPLASETHGGEDV)组成的第7肽片段、由序列号8所记载的氨基酸序列(GPQAHLVHGVQEETFVAH)组成的第8肽片段、和由序列号9所记载的氨基酸序列(GPQAHLVHGVQE)组成的第9肽片段的各自的峰面积值。另外，基于通过LC-UV分析而得的色谱，通过自动积分法计算出碱性磷酸酶的峰面积值。在LC-UV分析中，碱性磷酸酶作为在214nm具有吸收的成分而检测到。

图1显示比较例2中通过组合物C2的LC-MS/MS分析而得的、关于第1肽片段的提取离子色谱。

图2显示比较例2中通过组合物C2的LC-MS/MS分析而得的、关于第2肽片段的提取离子色谱。

图3显示比较例2中通过组合物C2的LC-MS/MS分析而得的、关于第3肽片段的提取离子色谱。

图4显示比较例2中通过组合物C2的LC-MS/MS分析而得的、关于第4肽片段的提取离子色谱。

图5显示比较例2中通过组合物C2的LC-MS/MS分析而得的、关于第5肽片段的提取离子色谱。

图6显示比较例2中通过组合物C2的LC-MS/MS分析而得的、关于第6肽片段的提取离子色谱。

图7显示比较例2中通过组合物C2的LC-MS/MS分析而得的、关于第7肽片段的提取离子色谱。

图8显示比较例2中通过组合物C2的LC-MS/MS分析而得的、关于第8肽片段的提取离子色谱。

图9显示比较例2中通过组合物C2的LC-MS/MS分析而得的、关于第9肽片段的提取离子色谱。

使用比较例1～8的碱性磷酸酶组合物将核酸去磷酸化，将所得的去磷酸化核酸用酞菁系有机荧光色素标记化。具体地，如下进行去磷酸化反应和标记化反应。

将由健常人采血的全血进行离心分离而获得血清1mL。从血清中使用“3D-Gene”RNA extraction reagent from liquid sample kit(東レ(株)制)提取微RNA。以所得的提取微RNA作为母液，使用“3D-Gene”miRNA labeling kit(東レ(株)制)进行标记。将所得的提取微RNA 5μL添加到上述试剂盒的AP Buffer 0.4μL和Spike Control 1.0μL的混合液中，进一步添加组合物C1 0.4μL，从而制备溶液。接着，在37℃孵育40分钟，然后在冰上静置2分钟。接着，添加LE Buffer 1.2μL、3D-Gene Fluorescent Label 3.0μL、Nuclease freewater 2.5μL、Labeling enzyme 1.0μL，在16℃孵育1小时，然后在65℃孵育15分钟，获得标记化核酸。使用了组合物C2～C8的去磷酸化反应和标记化反应也使用同一提取微RNA母液，通过与上述同样的方法进行。

使用所得的标记化核酸进行核酸的检测。对于标记了的样本RNA，使用DNA芯片(“3D-Gene”miRNA Chip，東レ(株)制)，按照其标准方案进行杂交。杂交后的DNA芯片供于微阵列扫描仪(東レ(株)制)测定荧光强度。扫描仪的设定为激光输出100％、光电倍增管的电压设定为AUTO设定。核酸的检测如上所述使用DNA芯片(DNA微阵列)进行。求出DNA芯片中的有效斑点数，计算出检出率(％)。以DNA芯片上的全部2588个斑点中检测信号值减去噪声(无斑点的位置的信号值)而得的值为100以上的作为有效斑点，将有效斑点数除以总斑点数并乘以100而得的值作为检出率。结果示于表4-2和表5-2。

[实施例1～4]

将比较例2～4和8的碱性磷酸酶组合物(组合物C2～C4和C8)通过以下方法纯化，得到实施例1～4的碱性磷酸酶组合物(以下称为“组合物E1”～“组合物E4”)。纯化方法如下。

(透析工序)

将组合物C2(30μL)使用透析杯(截留分子量3.5K)，用透析缓冲液(1mL，50mMTris-HCl，2mM MgCl

(凝胶过滤工序)

将透析处理后的浓缩液使用凝胶过滤柱，用缓冲液(2.5mL，10mM Tris-HCl，1mMMgCl

(疏水柱工序)

由凝胶过滤后的回收液使用疏水柱，在下述条件下回收碱性磷酸酶级分。

移动相流速：1.0mL/分钟

移动相A：20mM磷酸氢二钠、3M硫酸铵(50/50)

移动相B：20mM磷酸氢二钠

检测器：UV214nm

梯度程序：

表3

(透析工序)

将回收的碱性磷酸酶级分在与上述透析相同的条件下进行3次透析处理，回收浓缩液。

(超滤工序)

将回收的浓缩液使用超滤柱(截留分子量10K)，用缓冲液(2.5mL，10mM Tris-HCl，1mM MgCl

组合物E2、组合物E3和组合物E4也使用与上述同样的方法，分别由组合物C3、组合物C4和组合物C8得到。

测定实施例1～4的碱性磷酸酶组合物的碱性磷酸酶比活性，结果组合物E1为2490U/mg、组合物E2为2420U/mg、组合物E3为2522U/mg、组合物E4为2470U/mg。此外，碱性磷酸酶比活性与上述同样地测定。

由组合物E1～E4分别制备10重量％碱性磷酸酶水溶液，使用该水溶液进行LC-UV分析和LC-MS/MS分析。基于通过LC-MS/MS分析而得的提取离子色谱，通过自动积分法计算出由序列号1所记载的氨基酸序列(EAEAEFLIPAEEENPAFWNRQAAQ)组成的第1肽片段、由序列号2所记载的氨基酸序列(EGVSLEKREAEAE)组成的第2肽片段、和由序列号3所记载的氨基酸序列(IPAEEENPAFWNR)组成的第3肽片段、由序列号4所记载的氨基酸序列(DRQVPDSAGTA)组成的第4肽片段、由序列号5所记载的氨基酸序列(APGKALDSK)组成的第5肽片段、由序列号6所记载的氨基酸序列(VPLASETHGGEDVAVF)组成的第6肽片段、由序列号7所记载的氨基酸序列(VPLASETHGGEDV)组成的第7肽片段、由序列号8所记载的氨基酸序列(GPQAHLVHGVQEETFVAH)组成的第8肽片段、和由序列号9所记载的氨基酸序列(GPQAHLVHGVQE)组成的第9肽片段的各自的峰面积值。另外，基于通过LC-UV分析而得的色谱，通过自动积分法计算出碱性磷酸酶的峰面积值。在LC-UV分析，碱性磷酸酶作为在214nm具有吸收的成分检测出。

图10显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-MS/MS分析而得的、关于第1肽片段的提取离子色谱。

图11显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-MS/MS分析而得的、关于第2肽片段的提取离子色谱。

图12显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-MS/MS分析而得的、关于第3肽片段的提取离子色谱。

图13显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-MS/MS分析而得的、关于第4肽片段的提取离子色谱。

图14显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-MS/MS分析而得的、关于第5肽片段的提取离子色谱。

图15显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-MS/MS分析而得的、关于第6肽片段的提取离子色谱。

图16显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-MS/MS分析而得的、关于第7肽片段的提取离子色谱。

图17显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-MS/MS分析而得的、关于第8肽片段的提取离子色谱。

图18显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-MS/MS分析而得的、关于第9肽片段的提取离子色谱。

图19显示实施例1中通过组合物E1(组合物C2的纯化品)的LC-UV分析而得的、关于碱性磷酸酶的色谱。此外，实施例2～4和比较例1～8中通过各组合物的LC-UV分析而得的、关于碱性磷酸酶的色谱与图19是同样的。

使用实施例1～4的碱性磷酸酶组合物将核酸去磷酸化，将所得的去磷酸化核酸用酞菁系有机荧光色素标记化。去磷酸化反应和标记化反应与上述同样地进行。

使用所得的标记化核酸进行核酸的检测。核酸的检测如上所述使用DNA芯片(DNA微阵列)进行。求出DNA芯片中的有效斑点数，计算出检出率(％)。结果示于表4-1和表5-1。

如表4-1、表4-2、表5-1和表5-2所示，将使用比较例1～8的碱性磷酸酶组合物制备的核酸样品在核酸检测法中使用的情况下，有效斑点数小于1500；与此相对，将使用实施例1～4的碱性磷酸酶组合物制备的核酸样品在核酸检测法中使用的情况下，有效斑点数为1500以上。另外，比较例1～8中，尽管碱性磷酸酶组合物所具有的碱性磷酸酶比活性几乎相同，但检出率产生差异；与此相对，实施例1～4中的检出率几乎相同，并且高于比较例1～8的检出率。

如表4-1、表4-2、表5-1和表5-2所示，作为第1～第3肽片段的合计含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率的指标的((X

如表4-1、表4-2、表5-1和表5-2所示，作为第1和第2肽片段的合计含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率的指标的((X

如表4-1、表4-2、表5-1和表5-2所示，作为第1和第3肽片段的合计含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率的指标的((X

如表4-1、表4-2、表5-1和表5-2所示，作为第1肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率的指标的(X

如表4-1、表4-2、表5-1和表5-2所示，作为第2肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率的指标的(X

如表4-1、表4-2、表5-1和表5-2所示，作为第3肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率的指标的(X

如表4-1、表4-2、表5-1和表5-2所示，作为第4肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率的指标的(X

如表4-1、表4-2、表5-1和表5-2所示，作为第5肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率的指标的(X

如表4-1、表4-2、表5-1和表5-2所示，作为第6～第9肽片段的合计含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率的指标的((X

如表4-1、表4-2、表5-1和表5-2所示，作为第6和第7肽片段的合计含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率的指标的((X

如表4-1、表4-2、表5-1和表5-2所示，作为第8和第9肽片段的合计含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率的指标的((X

如表4-1、表4-2、表5-1和表5-2所示，作为第6肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率的指标的(X

如表4-1、表4-2、表5-1和表5-2所示，作为第7肽片段的含量相对于碱性磷酸酶的含量的比率的指标的(X

如表4-1、表4-2、表5-1和表5-2所示，作为第8肽片段的含量的比率的指标的(X

如表4-1、表4-2、表5-1和表5-2所示，作为第9肽片段的含量的比率的指标的(X