一种抗心磷脂抗体lgA/G/M检测试剂盒的使用方法

摘要

本发明公开了一种抗心磷脂抗体lgA/G/M检测试剂盒的使用方法，属于抗体检测技术领域。本发明解决现有抗心磷脂抗体lgA/G/M检测试剂盒的校准品及样本检测结果准确度低的问题。本发明通过改变了酶结合物的稀释方法与现有稀释方法相比较，标准品较靶值偏倚大幅缩小，更接近要求数值，提高了检测结果的准确度，使患者样本结果更符合临床。

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗心磷脂抗体lgA/G/M检测试剂盒的使用方法，属于抗体检测技术领域。

背景技术

抗心磷脂抗体(ACL)属于以血小板和内皮细胞膜上带负电荷的心磷脂作为靶抗原的自身抗体。常见于系统性红斑狼疮(SLE)及其他自身免疫性疾病。该抗体与血栓形成。血小板、自然流产或宫内死胎关系密切。

现有检测抗心磷脂抗体的方法有金标和化学发光检测抗体，只能作简单的定性，而化学发光法需用专门的专用仪器，而对于血清中游离抗体的检测现大多用酶联免疫吸附法(ELISA)，这种方法特异性和敏感性均较高且无须特殊仪器，即可定性又可定量，可检测抗体类及亚类，易于标准化，具有操作简单、结果正确、省时等优点。但是现有心磷脂抗体ELISA检测试剂盒定量检测ACA结果的校准品及样本结果偏低，弱阳性校准品阴性，患者出现假阴性结果，与临床不符，因此提高抗心磷脂抗体lgA/G/M检测试结果的准确度及稳定性是十分必要的。

发明内容

本发明为了解决现有抗心磷脂抗体lgA/G/M检测试剂盒的校准品及样本检测结果准确度低的问题，提供一种抗心磷脂抗体lgA/G/M检测试剂盒的使用方法。

一种抗心磷脂抗体lgA/G/M检测试剂盒的使用方法，该方法包括以下步骤：

步骤一、将样本、校准品、阳性对照、阴性对照、酶结合物、样本缓冲液、清洗缓冲液、色原/底物液和终止液由2～8℃平衡到室温；

步骤二、稀释样本：使用样本缓冲液稀释样本；

步骤三、样本温育：按加样方案向相应微孔分别加100μL校准品、阳性对照、阴性对照或稀释后的样本，在室温下温育30min；

步骤四、清洗：然后采用洗板机使用清洗缓冲液清洗3次，每次浸泡40s，清洗完毕后在吸水纸上拍打除去残存洗液；

步骤五、酶结合物温育：然后每个微孔先加入100μL样本缓冲液，再加入10μL酶结合物，使用旋涡混合器混匀，在室温下温育30min；

步骤六、清洗：具体操作与步骤四相同；

步骤七、色原/底物液温育：清洗完成后每个微孔滴加100μL色原/底物液，室温避光温育15min；

步骤八、终止反应：色原/底物液温育结束后，每个微孔加入100μL终止液，混匀后，酶标仪比色，计算结果。

进一步地，室温为18～25℃。

进一步地，抗心磷脂抗体lgA/G/M检测试剂盒由欧蒙医学诊断(中国)有限公司生产。

进一步地，步骤二中血浆和血清样本与样本缓冲液的比例为1：201。

进一步地，加样方案如下表所示：

其中S：校准品P：样本NC：阴性对照PC：阳性对照。

本发明具有以下有益效果：本发明改变了酶结合物的稀释方法与现有稀释方法相比较，标准品较靶值偏倚大幅缩小，更接近要求数值，提高了检测结果的准确度。

附图说明

图1为抗心磷脂抗体lgA/G/M检测试剂盒的靶值参照表；

图2为对比例1方法检测的标准品靶值；

图3为实施例1方法检测的标准品靶值。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明均为常规方法。所用材料、试剂、方法和仪器，未经特殊说明，均为本领域常规材料、试剂、方法和仪器，本领域技术人员均可通过商业渠道获得。

实施例1：取35个样本，其中5个强阳性，24个弱阳性，6个阴性。

(1)所有试剂平衡到室温(18-25℃)：将校准品、阳性对照、阴性对照、酶结合物、样本缓冲液、清洗缓冲液、色原/底物液和终止液由2～8℃平衡到室温。

(2)样本稀释：试管内加入1.0ml样本缓冲液，5μl待测样本，用旋涡混匀器混匀。

(3)加样方案：

如下表所示：

S:校准品P：样本NC:阴性对照PC：阳性对照

(4)加样：按加样方案分别加入100μl校准品，稀释后样本，阴阳对照，室温(18-25℃)温育30min。

(5)清洗：洗板机清洗3次，每次浸泡40秒，在吸水纸上拍打除去残存洗液。

(6)每孔先加入100μl样本缓冲液，再加10μl酶结合物，用旋涡混匀器混匀，室温(18-25℃)温育30min。

(7)清洗：具体操作与(5)相同。

(8)每孔加入100μl底物液，室温避光15min。

(9)每孔加入100μl终止液，混匀后，酶标仪比色，计算结果如图3所示。

对比例1：样本与实施例1相同(35个样本，其中5个强阳性，24个弱阳性，6个阴性)

(1)所有试剂平衡到室温(18-25℃)：将校准品、阳性对照、阴性对照、酶结合物、样本缓冲液、清洗缓冲液、色原/底物液和终止液由2～8℃平衡到室温。

(2)样本稀释：试管内加入1.0ml样本缓冲液，5μl待测样本，用旋涡混匀器混匀。

(3)加样方案：

如下表所示：

S:校准品P：样本NC:阴性对照PC：阳性对照

(4)加样：按加样方案分别加入100μl校准品，稀释后样本，阴阳对照，室温(18～25℃)温育30min。

(5)清洗：洗板机清洗3次，每次浸泡40秒，在吸水纸上拍打除去残存洗液。

(6)滴加100μl稀释后的酶结合物至每一微孔，室温(18～25℃)温育30min。

酶结合物与样本缓冲液1：10稀释。

(7)清洗：具体操作与(5)相同。

(8)每孔加入100μl底物液，室温避光15min。

(9)每孔加入100μl终止液，混匀后，酶标仪比色，计算结果如图2所示。

对比实施例1与对比例1的检测结果可知：

1、强阳性样本及阴性样本定性前后无变化；

2、弱阳性样本阳性率由37.5％升高到91.66％，效果明显；

3、强阳性样本定量变化：

由此可知，强阳性样本定量结果均有不同程度提高。

4、标准品变化：

由此可知，标准品较靶值偏倚大幅缩小，更接近要求数值。

综上可知，本发明提供的检测方法，校准品结果均在靶值附近，患者样本结果更符合临床。