一种改良的均相重组酶聚合酶核酸扩增检测方法及试剂盒

摘要

一种改良的均相重组酶聚合酶核酸扩增检测方法及试剂盒，采用重组酶、单链结合蛋白、链置换DNA聚合酶、RNase H及重组酶聚合酶反应系统所需的正向引物、反向引物、含有尿嘧啶核糖寡核苷酸的荧光探针、缓冲体系及底物如d NTPs、能量来源物如肌酸激酶‑磷酸肌酸‑ATP，及稳定剂或促进剂。该系统采用RNase H和RNA荧光探针作为特异性杂交报告系统，具有灵敏度高、兼容性好的特点，无需TwistAmp exo或nfo系统那样需要设计46‑52个碱基的探针而难于挑选保守区、易发生错配而漏检。本发明包括以下步骤：合成修饰引物及r U荧光探针，长度均为28‑36bp,系统中加有RNase H,与核酸模板在37‑40℃恒温反应5‑20分钟，多通道实时荧光采集，每10‑30秒读数一次，获得标本中的病毒核酸的定性或定量结果。