检测A型肉毒梭菌的实时荧光定量PCR核酸序列以及试剂盒

摘要

本发明提供一种检测A型肉毒梭菌的实时荧光定量PCR核酸序列以及试剂盒，核酸序列包括上游引物A‑F、下游引物A‑R和探针A‑P，以本发明提供的引物和探针对A型肉毒梭菌进行检测，准确率达到100%，对其它25种肠道致病菌及常见细菌DNA进行扩增时，均未见特异性扩增曲线出现，特异性良好。根据重组质粒标准品构建的荧光定量PCR标准曲线可确定其对A型肉毒梭菌检测灵敏度为5.04×102拷贝/µl。另在荧光定量PCR检测体系中，含A毒素基因的重组质粒浓度在102～109拷贝/µl范围内，扩增反应的Ct值与模版浓度之间存在良好的线性关系。本发明具有反应灵敏、特异性高、快速、便捷、高通量等特点，为A型肉毒梭菌筛检、大规模检疫以及流行病学调查提供了一种有效的检测手段。