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一种慢病毒过表达载体介导的E6-AP促进结肠癌细胞生长和转移的实验方法

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本发明公开了一种慢病毒过表达载体介导的E6‑AP促进结肠癌细胞生长和转移的实验方法，检测E6‑AP在不同结肠癌细胞株中表达情况，确定HCT‑116和HCT‑8结肠癌细胞低表达E6‑AP；将含有过表达PCDH‑pCDNA3.0‑FLAG‑E6‑AP质粒与慢病毒包装辅助质粒共转染人胚肾293FT细胞，获得慢病毒介导的过表达E6‑AP的稳定表达细胞，用实时PCR和Western blot检测E6‑AP的过表达效果；并分别用CCK‑8、划痕愈合和TranswellTM实验检测过表达E6‑AP对结肠癌细胞生长、迁移和侵袭转移的影响。本发明为结肠癌靶向治疗提供一个新的靶标。

著录项

公开/公告号CN108570453A

专利类型发明专利
公开/公告日2018-09-25

原文格式PDF
申请/专利权人江西中医药大学第二附属医院;
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申请/专利号CN201810451808.X
发明设计人熊加秀;甘淳;左彬荣;张奇志;晁丹;
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申请日2018-05-12
分类号C12N5/10(20060101);C12N15/867(20060101);C12Q1/6851(20180101);C12Q1/06(20060101);
代理机构11385 北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司;
代理人董芙蓉
地址 330012 江西省南昌市青山湖区南钢大道511号
入库时间 2023-06-19 06:35:45

法律信息

法律状态公告日

法律状态信息

法律状态
2018-10-26

实质审查的生效 IPC(主分类):C12N5/10 申请日:20180512

实质审查的生效
2018-09-25

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1. 一种慢病毒过表达载体介导的E6-AP促进结肠癌细胞生长和转移的实验方法 [P] . 中国专利： CN108570453A . 2018-09-25
2. 使用含有病毒和细胞结合区域的分子增强病毒介导的DNA转移的方法 [P] . 中国专利： CN101070548A . 2007-11-14
3. METHOD FOR PRODUCING A BACULOVIRUS VECTOR CAPABLE OF PRODUCING A SELECTED NON-FUSED RECOMBINANT PROTEIN OR CAPABLE OF BEING UTILIZED AS A TRANSFER VECTOR;A RECOMBINANT BACULOVIRUS EXPRESSION VECTOR CAPABLE OF EXPRESSING UNDER THE CONTROL OF A BACULOVIRUS POLYHEDRIN PROMOTER A SELECTED NON-FUSED PROTEIN IN A HOST INSECT CELL;A RECOMBINANT TRANSFER VECTOR UTILIZING A BACULOVIRUS POLYHEDRIN PROMOTER AND FLANKING SEQUENCES FOR INTRODUCING A SELECTED GENE INTO A BACULOVIRUS GENOME,OR FOR INSERTION OF A SELECTED GENE FOR A GENETIC MANIPULATION OF A BACULOVIRUS;AND A METHOD FOR THE SYNTHESIS OF A SELECTED NON-FUSED PROTEIN IN A HOST INSECT CELL USING THE EXPRESSION VECTOR [P] . IL71906A . 1992-08-18

机译：产生杆状病毒载体的方法，该载体能产生选择的非融合重组蛋白或能被用作转移载体;一种重组杆状病毒表达载体，其在一个条件下可以在特定的程序控制下进行表达宿主细胞;利用杆状病毒多角体蛋白启动子的重组转移载体，并将选择的基因引入杆状病毒基因组的侧翼序列，或将选择的基因插入用于基因的遗传操纵基因的方法和方法使用表达载体的宿主昆虫细胞中的非融合蛋白
4. isolated polypeptide, fusion protein, nucleic acid sequence, expression vector or a virus, recombinant cell, method of producing a soluble ectodomain polypeptide or fusion protein or fragment thereof, pharmaceutical composition, use of a monoclonal antibody or polyclonal or antigen-binding fragment thereof, use of antibody or antigen-binding fragment, use of any of an isolated polypeptide, method of regulating cytokines, induction of t-cell expansion, promotion of cell immunity antigen specific t and promotion of cd4 + and / or cd8 + t cell activation in a subject, method for enhancing an immune response secondary to an antigen in a patient, method of using at least one of: an isolated polypeptide, method for treatment or prevention of an immune system related condition, method for treating or preventing an infectious disease a, method for diagnosing a disease in a subject, method of producing a soluble ectodomain polypeptide tmem25, vsig10, ly6g6f, or fusion protein or fragment thereo [P] . BR112013026199A2 . 2017-11-07

机译：分离的多肽，融合蛋白，核酸序列，表达载体或病毒，重组细胞，产生可溶性胞外域多肽或融合蛋白或其片段的方法，药物组合物，单克隆抗体或其多克隆或抗原结合片段的用途，使用抗体或抗原结合片段，使用任何分离的多肽，调节细胞因子的方法，诱导t细胞扩增，促进细胞免疫抗原特异性t并促进cd4 +和/或cd8 + t细胞活化受试者，在患者中增强继发于抗原的免疫应答的方法，使用以下至少一种的方法：分离的多肽，用于治疗或预防与免疫系统有关的病症的方法，用于治疗或预防传染病的方法，用于诊断受试者疾病的方法，产生可溶性胞外域多肽tmem25，vsig10，ly6g6f或其融合蛋白或片段的方法
5. ISOLATED PROTEIN AND POLYNUCLEOTIDE, AN EXPRESSION VECTOR CONTAINING THE POLYNUCLEOTIDE AND AN ASSAY FOR DETERMINING THE PRESENCE OF PROSTATE OR COLON CANCER BY CONTACTING SAID ISOLATED PROTEIN WITH A PROSTATE OR COLON TISSUE [P] . IL139988B . 2012-08-30

机译：分离的蛋白和多核苷酸，一种包含多核苷酸的表达载体，以及一种通过将分离的蛋白与前列腺或结肠组织接触来测定前列腺癌或结肠癌的存在的方法