一种采用ARMS技术结合荧光探针的方法检测PAH基因突变的试剂盒及其检测方法

摘要

本发明提出了一种采用ARMS技术结合荧光探针的方法检测PAH基因突变的试剂盒，采用ARMS结合荧光探针技术，选取苯丙酮尿症突变致病基因PAH各突变位点为靶区域，分别设计特异性ARMS引物及荧光探针，其中荧光探针5’端标记荧光发射基团FAM，VIC，CY‑2，CY‑3，3’端标记非荧光淬灭基团BHQ1，BHQ2，利用荧光PCR检测仪可在FAM，VIC，CY‑2，CY‑3通道检测荧光信号，由于内参基因ABL的表达相对恒定，在本试剂盒中可作为内参照对起始拷贝数进行校正，用于整个核酸提取和反应体系的质量控制。本发明还提出了上述检测苯丙酮尿症突变致病基因PAH中突变的试剂盒的检测方法。本发明具有很高的灵敏度和特异性，以有利于评价患儿及家属遗传关系及患病胎儿的诊断并为后续治疗方案选定提供依据。