用于治疗原发性癌症和癌症转移的小分子

摘要

一些实施方案涉及抑制癌细胞迁移和生长的不可水解的ATP类似物和腺苷受体拮抗剂。

说明书

本申请要求2015年1月17日提交的第62/104705号美国临时申请的优先权，其通过引用以其整体并入本文。

背景技术

在患有包括乳腺癌和前列腺癌的晚期癌症的患者中，骨是最常见的转移部位(Jin等人，(2011)Int.J.Cancer 128,2545-2561；Kohno,(2008)Int.J.Clin.Oncol.13,18-23)。在患有晚期癌症的患者中，骨转移是主要的潜在致命的并发症。由于剧烈疼痛、病理性骨折、脊髓压迫和代谢并发症，几乎所有骨转移的患者有明显降低的生活质量(Welch等人(2003)J.Musculoskelet.Neuronal Interact.3,30-38)。事实上，尸检研究已经表明超过70％的乳腺癌患者表现出骨转移，这些患者中只有20％在发现转移后5年仍然存活(Roodman(2004)N.Engl.J.Med.350,1655-1664；Welch等人(2003)J.Musculoskelet.Neuronal Interact.3,30-38)。癌症对骨的高亲和性由超过一个世纪以前提出的“种子与土壤假说”来解释(Paget(1889)Lancet 1,571-573)。它揭示了骨组织是癌症转移的优选部位，这是因为它们的微环境提供了肿瘤细胞可以在其中生长的肥沃环境。许多特征，例如增加的血液流动和骨基质中细胞的生长因子的释放导致了骨转移的频繁发生(van der Pluijm等人(2001)J.Bone Miner.Res.16,1077-1091)。迄今为止，导致骨转移的关键性因素和机理在很大程度上是未知的。

双膦酸盐药物用于治疗骨癌症转移，并导致降低的肿瘤生长、减少的骨损伤和减轻的疼痛(Brown和Guise(2007)Cur.Osteopor.Rep.5,120-127)。双膦酸盐疗法与不良副作用相关，不良副作用包括心房颤动、下颌的关节痛和骨坏死、以及眼科的、皮肤病学的和肾脏的并发症，以及药物诱发的骨折(Junquera等人，(2009)Am.J.Otolaryngol.30,390-395；Truong等人(2010)J.Am.Acad.Dermatol.62,672-676)。尽管在实体瘤骨转移的诊断和治疗上有进展，但是双膦酸盐治疗如何在分子水平上抑制骨转移的机理仍待确定。

之前的研究表明ATP通过其与P2嘌呤受体结合表现出抗癌作用的可能性(White和Burnstock(2006)Trends Pharmacol.Sci.27,211-217)。几项研究已经确定了ATP抑制几种细胞系生长的抗肿瘤活性，细胞系包括前列腺癌细胞、结肠腺癌细胞、黑素瘤细胞和膀胱癌细胞(Rapaport等人(1983)Cancer Res.43,4402-4406；Shabbir和Burnstock(2009)Int.J.Urol.16,143-150；White和Burnstock(2006)Trends Pharmacol.Sci.27,211-217)。还报道了嘌呤信号的激活抑制人急性髓性白血病细胞在免疫缺陷的小鼠中的增殖和迁移(Salvestrini等人，(2012)Blood 119,217-226)。另外，体内研究表明每日注射ATP在小鼠中显著抑制肿瘤生长，延长存活时间，并抑制体重减轻(Rapaport(1988)Eur.J.CancerClin.Oncol.24,1491-1497)。然而，几项研究还提出ATP的不良影响，包括增加的肿瘤生长和迁移。我们最近报道了ATP和ATP类似物例如ATPγS抑制乳腺癌细胞生长迁移和骨转移，而腺苷和腺苷受体的激活通过促进乳腺癌细胞的生长、迁移和骨转移而具有相反的作用(Zhou等人，(2014)Oncogene(Epub))。

不可水解的ATP类似物化合物和腺苷受体拮抗剂类似物化合物可以用于治疗癌症(WO2014074529)。然而，仍然存在对其他不可水解的ATP类似物化合物和腺苷受体拮抗剂的需求。

发明内容

一些实施方案针涉及抑制癌细胞迁移和生长的不可水解的ATP类似物。术语不可水解的ATP类似物指不被ATP酶有效水解的ATP类似物，即如果被水解的话，该类似物以小于ATP水解速率的5％、1％或0.1％的速率被ATP酶水解。一些实施方案涉及不可水解的ATP类似物5’-[γ-硫代]三磷酸腺苷(ATPγS)的多种化学类似物。这些化学物质抑制癌细胞的迁移和生长。一些实施方案涉及不可水解的ATP类似物5’-[γ-硫代]三磷酸腺苷(ATPγS)的化学类似物，其通式为式I，包括化合物P1至P6(表1)

其中R₁和R₂独立地选自氢(H)、氰基(CN)、C1至C3烷基、卤素(氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)、或碘(I))、或三氟甲基(CF₃)。在一些方面R1选自氢、氰基、C1至C3烷基、卤素(氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)、或碘(I))、或三氟甲基，R2是氢或氟。在另一方面，R1是氰基，R2是H；R1是H，R2是H；R1是三氟甲基，R2是H；R1是氟，R2是H；R1是甲基，R2是H；R1是氟，R2是氟。

一些实施方案涉及施用一种或更多种式I的化合物以治疗癌症。化合物可以单独施用或与其他抗癌疗法联合施用。

腺苷暴露可促进癌细胞生长和迁移，腺苷通过ATP代谢产生。一些实施方案涉及腺苷受体拮抗剂8-乙氧基-9-乙基-9H-嘌呤-6-胺(ANR94,A2A拮抗剂)的一些化学类似物。这些化合物是癌细胞迁移和生长的抑制剂。在一些实施方案方面，腺苷受体拮抗剂8-乙氧基-9-乙基-9H-嘌呤-6-胺的化学类似物具有式II的通式，其包括化合物P7至P10(表1)。

一些方面涉及式II化合物，其中R₃选自二卤代甲基、C3至C5环烷基、或四氢呋喃。在一些方面，R3是二氟甲基、环丙基、环丁基或β-四氢呋喃。

一些实施方案涉及施用一种或更多种式为式II的化合物以治疗癌症。化合物可以单独施用、或与式I化合物和/或其他抗癌疗法联合施用。

在一些方面，将式为式I和/或式II的一种或更多种化合物施用至需要抗癌治疗的对象。在一些方面，式I和/或式II的化合物在1分钟、5分钟、10分钟、20分钟、30分钟或60分钟之内施用。在另一方面，化合物同时施用。在另一方面，一种或更多种式I化合物在一种或更多种式II化合物的施用之前、期间或之后施用。

表1.代表性化合物的列表

在一些方面，对象或患者患有膀胱癌、血癌、骨癌、骨髓癌、脑癌、乳腺癌、结直肠癌、食道癌、胃肠癌、头癌、肾癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、颈癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、舌癌或子宫癌。在另一方面，癌症为肺癌、乳腺癌或前列腺癌。在具体的方面，癌症为转移癌，例如骨转移。在一些方面，癌症被鉴定为具有转移风险或具有转移倾向，或者没有癌症已经转移的指征。在一些方面，具有转移风险的癌症的鉴定是基于肿瘤活组织检查的评价。

在一些实施方案中，双膦酸盐药物由于其潜在的体内毒性，可以被明确地排除在所要求保护的发明之外。

如本文所使用的，“抑制剂”可以为能够降低蛋白质活性或功能的化合物。例如，抑制剂可以直接或间接抑制蛋白质活性。例如，直接抑制可以通过与蛋白质结合并由此阻止蛋白质活性来实现，或者通过竞争性地、非竞争性地或无竞争性地抑制蛋白质的酶活性或其他活性来实现。例如，间接抑制通过与蛋白质的预定靶标，例如受体或结合伴侣结合，由此阻断或降低蛋白质活性来实现。

术语“有效量”指在所需的剂量和时间段下，实现期望的治疗结果或预防结果的有效的量。关于降低癌细胞生长或迁移的抗癌试剂的“有效量”指能够在一定程度上减少一些癌细胞或肿瘤细胞生长的量，或者抑制癌细胞或肿瘤细胞迁移或侵入非肿瘤组织例如骨的能力的量。该术语包括能够引起生长抑制效应、细胞静止效应和/或细胞毒性效应、和/或引起癌细胞或肿瘤细胞凋亡的量。

关于治疗癌症的“治疗有效量”指能够产生一种或更多种以下效果的量：(1)在一定程度上抑制癌症或肿瘤生长，其包括减缓生长或使生长完全停滞；(2)减少癌细胞或肿瘤细胞的数量；(3)减小肿瘤大小；(4)抑制(即减少、减缓或完全停止)癌细胞或肿瘤细胞渗透进入外周器官；(5)抑制(即减少、减缓或完全停止)转移；(6)增强抗肿瘤免疫应答，其可以但不必须导致肿瘤的退化或排斥，或者(7)在一定程度上减轻与癌症或肿瘤相关的一种或更多种症状。治疗有效量可以根据例如以下因素而变化：个体的病情、年龄、性别和体重，以及一种或更多种抗癌剂以在个体中引起所期望的应答的能力。“治疗有效量”也是其中治疗有益作用超出任何毒性或有害作用的量。

短语“治疗癌症”和“癌症的治疗”指降低、减少或抑制癌细胞的复制；降低、减少或抑制癌症的扩散(转移的形成)；减小肿瘤大小；减少肿瘤的数量(即减少肿瘤负荷)；减少或降低体内癌细胞的数量；在手术切除或其他抗癌疗法后预防癌症复发；或改善或缓解由癌症引起的疾病的症状。

贯穿本申请讨论了本发明的其他实施方案。关于本发明一个方面所讨论的任何实施方案也可以应用于本发明的其他方面，反之亦然。本文所描述的每个实施方案应理解为可适用于本发明所有方面的本发明的实施方案。预期对于本发明的任何方法或组合物，可以实施本文所讨论的任何实施方案，反之亦然。此外，本发明的组合物和试剂盒可以用于实现本发明的方法。

当在权利要求和/或说明书中与术语“包含”一起使用时，要素前面不使用数量词可以表示“一个”，但是其也符合“一个或更多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的意思。

贯穿本申请，术语“约”用于表明数值包含用于确定数值的装置或方法的标准差。

在权利要求中术语“或”的使用用于表示“和/或”，除非明确地说明是仅指选择或者选择是相互排斥的，尽管本公开支持仅指选择和“和/或”的定义。

如本说明书和权利要求所使用的，词语“包含”、“具有”、“包括”或“含有”是包括性的或开放式的，并且不排除另外的、未列举的要素或方法步骤。

本发明的其他目的、特征和优点通过下面的详细描述会变得明显。然而，应该理解详细说明和具体实施例在表明本发明的具体实施方案时仅通过举例说明的方式给出，因为对本领域技术人员而言，在本发明的精神和范围内的各种变化和修改通过该详细说明会变得明显。

附图说明

以下附图形成本说明书的一部分，并被包含以进一步证明本发明的一些方面。通过参照一个或更多个这些附图结合本文所提供的具体实施方案的详细说明可以更好地理解本发明。

图1.使用MDA-MB-231人乳腺癌细胞的Transwell细胞迁移试验。

图2.MDA-MB-231细胞的软琼脂贴壁非依赖性生长(Soft-agar AnchorageIndependent Growth)试验。

图3.乳腺脂肪垫异种移植(Mammary Fat Pad Xenograft)试验。

具体实施方案

一些实施方案涉及化学式为式I的化合物，例如P1、P2、P3、P4、P4、P5或P6(表1)。这些化合物是不可水解的ATP类似物5’-[γ-硫代]三磷酸腺苷(ATPγS)的化学类似物。

其他实施方案涉及化学式为式II的化合物，例如P7、P8、P9或P10，其为腺苷受体拮抗剂8-乙氧基-9-乙基-9H-嘌呤-6-胺(ANR94,A2A拮抗剂)的化学类似物(表1)。研究已经表明全部10种化合物对细胞迁移具有抑制作用。在MDA-MB-231人乳腺癌细胞的Transwell细胞迁移试验中，全部10种化合物尤其是P2、P3、P4、P5和P9显示出对细胞迁移的抑制作用。在50μM下，没有化合物表现出对细胞的任何毒性。

已经进行了软琼脂试验以确定在使用化合物P1至P10的情况下MDA-MB-231细胞的贴壁非依赖性生长，发现P2和P3最有效。相比于对照组，P2和P3分别有30％和65％的细胞集落的减少(图2)。

另外，进行了MDA-MB-231细胞的乳腺脂肪垫异种移植分析。将MDA-MB-231细胞异种移植在缺陷型小鼠的乳腺脂肪垫中。肿瘤结节出现后，将测试化合物(例如P3)注入到这些小鼠中(500μl的400μM溶液)。接受测试化合物的小鼠的肿瘤大小与对照小鼠(即，施用不含测试化合物的赋形剂的小鼠)比较。15天之后，相比于没有接受P3的小鼠，接受P3的小鼠的肿瘤大小减小了超过50％(图3)。

在一些方面，具有式I和/或式II的化合物(例如化合物P1至P10)可以用于抑制癌细胞的增殖和/或迁移。在一些方面，癌症为膀胱癌、血癌、骨癌、骨髓癌、脑癌、乳腺癌、结直肠癌、食道癌、胃肠癌、头癌、肾癌、肝癌、肺癌、鼻咽癌、颈癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、皮肤癌、胃癌、睾丸癌、舌癌或子宫癌。在另一方面，癌症为乳腺癌。在又一方面，癌症为前列腺癌。在具体实施方案中，癌症为转移癌，例如具有转移或迁移至骨的风险或处于转移或迁移至骨的风险的癌症。

在一些实施方案中，本发明还提供组合物，其在药学上可接受的配方中包含一种或更多种化学式为式I和/或式II的化合物(例如P1至P2)。因此，还包括了本文描述的一种或更多种化合物在制备药物中的用途。这种组合物可以用于多种癌症的治疗。在一些实施方案中，治疗是用于转移癌，例如肺癌、乳腺癌或前列腺癌。

本文描述的化合物可以被配制成多种剂量形式的治疗组合物，例如但不限于液体溶液剂或混悬剂、片剂、丸剂、散剂、栓剂、聚合物微胶囊或微泡、脂质体、以及可注射的或可输注的溶液剂。优选的形式取决于施用方式和靶标的具体疾病。组合物还优选包含本领域熟知的药学上可接受的载剂、载体或佐剂。

用于药物制剂的可接受的配方成分在所采用的剂量和浓度下对接受者无毒。除了本文描述的化合物之外，组合物可以含有用于改变、维持或保留例如组合物的pH、摩尔渗透压浓度、黏度、澄清度、颜色、等渗性、气味、无菌性、稳定性、溶解或释放速率、吸收或渗透的成分。用于配制药物组合物的适当材料包括但不限于氨基酸(如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸)；抗菌剂；抗氧化剂(如抗坏血酸、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠)；缓冲液(如乙酸盐、硼酸盐、碳酸氢盐、Tris-HCl、柠檬酸盐、磷酸盐或其它有机酸)；疏松剂(如甘露醇或甘氨酸)；螯合剂(如乙二胺四乙酸(EDTA))；络合剂(如咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-环糊精或羟丙基-β-环糊精)；填充剂；单糖；双糖；和其他碳水化合物(如葡萄糖、甘露糖或糊精)；蛋白质(如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白)；着色剂、调味剂和稀释剂；乳化剂；亲水性聚合物(如聚乙烯吡咯烷酮)；低分子量多肽；成盐反荷离子(如钠)、防腐剂(如苯扎氯铵、苯甲酸、水杨酸、硫柳汞、苯乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯己定、山梨酸或过氧化氢)；溶剂(如甘油，丙二醇或聚乙二醇)；糖醇(如甘露醇或山梨糖醇)；悬浮剂；表面活性剂或润湿剂(例如普朗尼克(pluronics)、PEG、失水山梨糖醇酯、聚山梨糖醇酯如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、曲通(triton)、氨丁三醇、卵磷脂、胆固醇、泰洛沙泊(tyloxapal))、稳定性增强剂(如蔗糖或山梨糖醇)；张力增强剂(例如碱金属卤化物，优选氯化钠或氯化钾、甘露糖醇、山梨糖醇)；递送载剂、稀释剂、赋形剂和/或药物佐剂(参见Remington'sPharmaceutical Sciences，第18版，(A.R.Gennaro编)，1990，Mack Publishing Company)，其通过引用并入本文。

配方成分以施用部位可接受的浓度存在。有利地使用缓冲剂以使组合物维持在生理学pH或略微更低的pH，一般在约4.0至约8.5或者在约5.0至8.0的pH范围内。药物组合物可包含pH为约6.5至8.5的TRIS缓冲液，或pH为约4.0至5.5的醋酸盐缓冲液，其还可以包含山梨糖醇或其适当的替代物。

用于体内施用的药物组合物一般为无菌的。通过无菌滤膜过滤可以完成灭菌。如果组合物是冻干的，灭菌可在冻干和重构之前或之后进行。用于肠胃外施用的组合物可以以冻干形式或在溶液中储存。在一些实施方案中，将肠胃外组合物置于具有无菌进入孔的容器中，例如具有通过皮下注射针可刺穿的塞子静脉注射用溶液袋或小瓶，或者即可用于注射使用的无菌载药注射器。

以上组合物可以使用常规递送方式来施用，常规递送方式包括但不限于静脉内、腹膜内、口服、淋巴管内、皮下施用、动脉内、肌内、胸膜内、鞘内、和通过局部导管灌注。本发明还预期所讨论的向肿瘤或转移灶的局部施用。当通过注射施用组合物时，可以通过连续输注或通过单次或多次推注施用。对于肠胃外施用，试剂可以以无热原的、肠胃外可接受的在药学上可接受的载剂中包含所期望的化合物的水溶液施用。用于肠胃外注射的特别合适的载剂为无菌蒸馏水，其中一种或更多种抗癌剂被配制为适当保存的无菌等渗溶液。

本发明的药物组合物已经被配制后，其可以作为溶液、混悬液、凝胶剂、乳剂、固体或作为脱水或冻干的粉末储存在瓶中。这种制剂可以以即用形式储存或以在施用前重构的形式(例如冻干的)储存。

如果需要，可以使用在药物组合物中常规使用的稳定剂，例如蔗糖、海藻糖或甘氨酸。一般地，这种稳定剂以少量例如约0.1％至约0.5％(重量/体积)添加。表面活性剂稳定剂例如-20或-80(ICI Americas,Inc.,Bridgewater,N.J.,USA)也可以以常规的量添加。

用于配制药物组合物的成分优选具有高纯度并且基本上不含有潜在有害的污染物(例如至少国家食品(NF)等级的，一般至少为分析级，更通常为至少药用级别)。此外，用于体内使用的组合物一般为无菌的。就给定化合物必须在使用之前合成来说，获得的产物通常基本上不含任何潜在毒性试剂。用于肠胃外施用的组合物也是无菌的，基本上等渗的，并且是在GMP条件下制备的。

对于本文所述的化合物，单独或作为药物组合物的部分，该剂量为约0.001毫克/千克体重至1毫克/千克体重，优选约1微克/千克体重至100微克/千克体重，最优选1微克/千克体重至10微克/千克体重。在一些方面，本文描述的化合物可以在日剂量中以20、25、30、35、40微克/千克/分钟至30、35、40、45、50微克/千克/分钟(包括所有值和其间的范围)的速率向患者输注最多8小时，包括1、2、3、4、5、6、7或8小时。本文描述的化合物可以以每日约1、10、20、30、40、50、60微克/千克体重至50、60、70、80、90、100微克/千克体重、或者每日约1、10、20、30、40、50、60毫克/千克体重至50、60、70、80、90、100毫克/千克体重口服施用。在一些方面，本文描述的化合物可以以每日约0.01毫克/千克体重至10毫克/千克体重施用。

治疗有效剂量会容易地由本领域技术人员确定，并且会取决于疾病的病程和严重程度、患者的健康状况和对治疗的反应、患者的年龄、体重、身高、性别、之前的病史和治疗医生的判断。

在本发明的一些方法中，癌细胞是肿瘤细胞。癌细胞可在患者体内。患者可患有实体肿瘤。在这种情况下，实施方案还可以涉及对患者实施手术，例如通过切除肿瘤的全部或部分。可以在手术之前、之后或与手术同时施用组合物。在其他实施方案中，还可以对患者直接地、内窥镜视角下地、经气管内、经肿瘤内、经静脉内、病灶内地、经肌内、经腹膜内、区域地、经皮地、局部地、经动脉内地、膀胱内地或经皮下施用。治疗组合物可以被施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20次或更多次，它们可以每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24小时，或者每1、2、3、4、5、6、7天或者每1、2、3、4、5周，或者每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个月被施用。

治疗癌症的方法还可以包括向患者施用化疗或放疗，其可以施用超过1次。化疗包括但不限于顺铂(CDDP)、卡铂、甲苄肼、氮芥、环磷酰胺、喜树碱、异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安(bisulfan)、亚硝基脲、放线菌素D、柔红霉素、阿霉素、博来霉素、普卡霉素、丝裂霉素、依托泊苷(VP16)、他莫昔芬、泰索帝、紫杉醇、反式铂、5-氟尿嘧啶、长春新碱、长春花碱、甲氨蝶呤、吉西他滨、奥沙利铂、伊立替康、拓扑替康或其任何类似物或衍生变体。放疗包括但不限于X射线照射、UV照射、γ-照射、电子束辐射或微波。此外，作为本发明方法的一部分，可以对细胞或患者施用微管稳定剂，其包括但不限于紫杉烷。特别预期任意化合物或衍生物或类似物可以用于这些联合疗法。

以下提供关于这种化合物的各种化学定义。

如本文所使用的，术语“氟代基”指-F；术语“氰基”指-CN；术语“甲基”指-CH₃；术语“二氟甲基”指–CF₂H；术语“三氟甲基”指–CF₃；术语“环丙基”指三元饱和的环烷基环；术语“环丁基”指四元饱和的环烷基环；术语“β-四氢呋喃”指以O为杂原子的五元饱和杂环，并且在杂原子的β碳上被取代。

如本文所使用的，术语“卤素”指-F、-Cl、-Br或-I；术语“巯基”指-SH；术语“氰基”指-CN；术语“叠氮基”指–N₃；术语“羟基”指-OH。

除非另外指出，术语“烷基”本身或作为其他取代基的部分指线性(即非支化的)或支化的碳链，其可以是完全饱和的、单不饱和的或多不饱和的。不饱和烷基是具有一个或更多个双键或三键的烷基。饱和烷基包括具有一个或更多个碳-碳双键(烯基)的烷基，和具有一个或更多个碳-碳三键(炔基)的烷基。基团-CH₃(甲基)、-CH₂CH₃(乙基)、-CH₂CH₂CH₃(正丙基)、-CH(CH₃)₂(异丙基)、-CH₂CH₂CH₂CH₃(正丁基)、-CH(CH₃)CH₂CH₃(仲丁基)、-CH₂CH(CH₃)₂(异丁基)、-C(CH₃)₃(叔丁基)、-CH₂C(CH₃)₃(新戊基)均为烷基的非限制性实例。

除非另外指出，术语“杂烷基”本身或与其他术语组合指具有至少一个碳原子和选自O、N、S、P和Si的至少一个杂原子的线性链或支化链。在一些实施方案中，杂原子选自O和N。杂原子可以位于杂烷基的任意内部位置或者位于烷基与分子其余部分连接的位置。最多两个杂原子可以为连续的。以下基团为杂烷基的非限制性实例：三氟甲基、-CH₂F、-CH₂Cl、-CH₂Br、-CH₂OH、-CH₂OCH₃、-CH₂OCH₂CF₃、-CH₂OC(O)CH₃、-CH₂NH₂、-CH₂NHCH₃、-CH₂N(CH₃)₂、-CH₂CH₂Cl、-CH₂CH₂OH、CH₂CH₂OC(O)CH₃、-CH₂CH₂NHCO₂C(CH₃)₃和-CH₂Si(CH₃)₃。

术语“环烷基”和“杂环基”本身或与其他术语组合分别指环状的“烷基”和“杂烷基”。另外，对于杂环基，杂原子可以占据杂环与分子其余部分连接的位置。

术语“芳基”指多不饱和的、芳香族的烃取代基。芳基可以为单环或多环(例如，稠合在一起或共价连接的2个至3个环)。术语“杂芳基”指含有选自N、O和S的1个至4个杂原子的芳基。杂芳基可通过碳或杂原子连接至分子的其余部分。芳基和杂芳基的实例包括苯基，1-萘基，2-萘基，4-联苯基，1-吡咯基，2-吡咯基，3-吡咯基，3-吡唑基，2-咪唑基，4-咪唑基，吡嗪基，2-唑基，4-唑基，2-苯基-4-唑基，5-唑基，3-异唑基，4-异唑基，5-异唑基，2-噻唑基，4-噻唑基，5-噻唑基，2-呋喃基，3-呋喃基，2-噻吩基，3-噻吩基，2-吡啶基，3-吡啶基，4-吡啶基，2-嘧啶基，4-嘧啶基，5-苯并噻唑基，嘌呤基，2-苯并咪唑基，5-吲哚基，1-异喹啉基，5-异喹啉基，2-喹喔啉基，5-喹喔啉基，3-喹啉基和6-喹啉基。每个上述芳基和杂芳基环体系的取代基选自下述可接受的取代基。

各种基团在本文被描述成经取代的或未经取代的(即任选地经取代的)。任选地经取代的基团可以包括独立地选自以下的一种或更多种取代基：卤素，硝基，氰基，羟基，氨基，巯基，甲酰基，羧基，氧代基，氨基甲酰基，经取代或未经取代的烷基，经取代或未经取代的杂烷基，烷氧基，烷硫基，烷基氨基，(烷基)₂氨基，烷基亚磺酰基，烷基磺酰基，芳基磺酰基，经取代或未经取代的环烷基，经取代或未经取代的杂环基，经取代或未经取代的芳基和经取代或未经取代的杂芳基。在一些方面，任选的取代基被独立地选自以下的一种或更多种取代基进一步取代：卤素，硝基，氰基，羟基，氨基，巯基，甲酰基，羧基，氨基甲酰基，未经取代的烷基，未经取代的杂烷基，烷氧基，烷硫基，烷基氨基，(烷基)₂氨基，烷基亚磺酰基，烷基磺酰基，芳基磺酰基，未经取代的环烷基，未经取代的杂环基，未经取代的芳基，或未经取代的杂芳基。示例性任选的取代基包括但不限于：-OH、氧(＝O)、-Cl、-F、Br、C_1-4烷基、苯基、苄基、-NH₂、-NH(C_1-4烷基)、-N(C_1-4烷基)₂、-NO₂、-S(C_1-4烷基)、-SO₂(C_1-4烷基)、-CO₂(C_1-4烷基)和-O(C_1-4烷基)。

如本文所使用的，术语“药学上可接受的盐”指基本上对生物体无毒的本发明化合物的盐。典型的药学上可接受的盐包括通过本发明化合物根据存在于本发明化合物上的取代基与无机酸或有机酸或有机碱反应而制备的那些盐。

可以用于制备药学上可接受的盐的无机酸的非限制性实例包括：盐酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚磷酸等。可以用于制备药学上可接受的盐的有机酸的非限制性实例包括：脂肪族单羧酸和脂肪族二羧酸，如草酸、碳酸、柠檬酸、琥珀酸、苯基-杂原子取代的链烷酸、脂肪族和芳香族硫酸等。由无机酸或有机酸制备的药学上可接受的盐从而包括盐酸盐、氢溴酸盐、硝酸盐、硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氢碘化物、氢氟化物、乙酸盐、丙酸盐、甲酸盐、草酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、对甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、马来酸盐等。

合适的药学上可接受的盐还可以通过本发明试剂与有机碱例如甲胺、乙胺、乙醇胺、赖氨酸、鸟氨酸等反应来形成。药学上可接受的盐包括本发明一些化合物上存在的羧基或磺酸基和无机阳离子或有机阳离子之间形成的盐，无机阳离子例如钠、钾、铵或钙，有机阳离子例如异丙基铵、三甲基铵、四甲基铵和咪唑鎓。

应当认识到，形成本发明的任何盐的一部分的具体的阴离子或阳离子并非是关键的，只要所述盐作为一个整体是药学上可接受的。

药学上可接受的盐的其他实例和它们的制备方法和用途在Handbook ofPharmaceutical Salts：Properties,Selection and Use(2002)中提供，其通过引用并入本文。

预期对于本发明的任何方法或组合物，可以实施本说明书中所讨论的任何实施方案，反之亦然。此外，本发明的组合物可以用于实现本发明的方法。

I.实施例

并入以下实施例和附图以说明本发明的优选实施方案。本领域技术人员应理解，实施例或附图所公开的技术代表本发明人发现的在本发明的实践中发挥良好作用的技术，从而被认为构成其实践的优选实施方案。然而，根据本公开，本领域技术人员应理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，在所公开的具体实施方案中可以做许多改变，并仍获得相同或相似的结果。

A.材料和方法

细胞系和细胞培养物：使MDA-MB-231细胞在补充了10％FBS(Hyclone)的McCoy’s5A改良培养基(Gibco)中生长。使Py8119细胞在补充了5％Fetal Clone II(FisherScientific)的F12K营养培养基(Gibco)中生长。所有细胞系在37℃下在5％CO₂的孵育器中孵育。

细胞迁移试验：迁移试验在24孔组织培养板中的transwell膜过滤插入皿中进行(BD Biosciences San Jose,CA,USA)。Transwell膜过滤插入皿含有直径为6.5mm、孔径为8μm、厚为10nm的聚碳酸酯膜。将500微升乳腺癌细胞悬浮液以10×10⁴个细胞/插入皿的密度添加到插入皿上侧，含有或不含有其他化合物的750μl>

软琼脂集落形成试验：对于贴壁非依赖性细胞生长，将MDA-MB-231细胞平板接种在补充有50μM化合物(P1至P10)的含0.4％琼脂糖的完全培养基中，其位于补充有完全培养基的0.8％琼脂糖基础的上方。使细胞保持约2周，然后用对碘硝基四唑紫(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)染色。使用扫描仪捕获图像，对集落的数量进行计数。

动物：使用四周龄雌性无胸腺裸鼠(Harlan Sprague–Dawley,印第安纳波利斯,IN,USA)用于乳腺脂肪垫注射。四周龄至五周龄雌性C57bl/6小鼠用于胫骨内注射。动物保持在位于德克萨斯州圣安东尼奥的德克萨斯健康科学中心的实验动物研究机构的护理和监管下。动物方案是由Institutional Animal Care and Use Committee批准和监测的。

体内异种移植实验：将MDA-MB-231细胞经皮下注射到4周龄雌性nu/nu无胸腺裸鼠的乳腺脂肪垫中。每只小鼠在左右腹股沟乳腺脂肪垫区域接受双边皮下接种100μl在无血清培养基中含有约1×10⁷个细胞/毫升的细胞悬浮液。动物随机分为3个不同组，允许实体瘤形成达到约5mm³体积，然后开始治疗。每周腹腔内(IP)施用400μmol化合物P3/500μl生理盐水、或者作为对照的生理盐水3次，持续3周。每周两次监测异种移植瘤的生长，使用卡尺在两个维度上测量肿瘤大小。使用等式V＝(L×W²)×0.5(mm³)计算肿瘤体积，其中L是肿瘤长度，W是肿瘤宽度。

统计学分析：除非在图例中另外指明，数据以至少三次测量的平均值±S.E.M.提供。星号指示与对照组相比显著差异的程度(*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001)。使用单向方差分析(ANOVA)和学生纽曼-科伊尔斯检验来用GraphPad Prism 5.04软件(GraphPad)比较组。