一种从肝素钠副产物中提取舒洛地特原料药的方法

摘要

本发明公开了一种从肝素钠副产物中提取舒洛地特原料药的方法，其特征在于将肝素钠副产物溶解后沉淀，收集沉淀物后经氧化、沉淀、干燥制得，与现有技术比较，本发明提高了舒洛地特产品收率，比其它制备方法收率提高约10%，成本降低约20%。另外，本发明避免了使用班氏试剂引入铜离子污染的风险，减少了使用离心机产生的电力消耗。同时增加了过氧化氢氧化步骤，提升了产品质量，经检测，260nm和280nm吸光度远低于标准要求，可直接用于制备口服制剂和注射液，样品理化性质检测分析结果均符合企业内控质量标准，本发明适于规模化生产，使得肝素钠副产物得以充分利用，具有工艺简易、节能、环保、生产周期短等优势。

说明书

技术领域

本发明涉及舒洛地特原料药的制备方法，尤其涉及从肝素钠副产物分离提取舒洛地特原料药的方法，属于生物制药领域。

背景技术

舒洛地特商品名称为：伟素(VESSEL DUE F)，英文名称：Sulodexide，化学名称：葡糖醛酸基葡糖胺聚糖硫酸盐。舒洛地特制剂有胶囊和注射液两种剂型，舒洛地特对动脉和静脉都有较强的抗血栓作用，是目前唯一上市的可口服糖胺聚糖类抗凝血药，其原研企业为意大利阿尔法韦士曼制药公司。

舒洛地特来源于猪小肠粘膜，属于多组分药物，含有72~88%硫酸乙酰肝素(HS or FM-H)、12~28%硫酸皮肤素(DS)和不大于4%的慢移动肝素(SM-H)。HS在生物体内以蛋白聚糖的形式生物合成，HS的一级结构与肝素明显不同，HS中GlcA/ IdoA和GlcNAc/ GlcNS的比值较高，硫酸化程度相对较低。HS的结构域由重复的GlcA-(1→4)- GlcNAc二糖及高度硫酸化的肝素样IdoA(2S)-(1→4)- GlcNS(6S)二糖组成，能够亲和抗凝血酶Ⅲ。DS是一种以(1→3)-β-D-GalNAc(4S)- (1→4)-α-L-Ido 为特征性重复单位的多糖，能够亲和肝素辅因子Ⅱ。因此，舒洛地特具有抗血栓、抗凝、抗心血管疾病、降血脂等多种生物活性。

由粗品肝素经离子交换、分级沉淀生产精品肝素的过程中，产生大量含有硫酸皮肤素、硫酸软骨素、硫酸乙酰肝素、小分子肝素等组分的肝素副产物，目前从肝素钠副产物中分离提纯舒洛地特的方法主要有班氏试剂沉淀、乙醇分级沉淀、离心、树脂离子交换等相结合的方法。CN102603924A公开了一种经醋酸钾沉淀、班氏试剂碱性沉淀、乙醇沉淀、阴离子树脂柱纯化等步骤从肝素副产物提取舒洛地特的方法，该方法尽管具有制备的产品纯度较高的特点，但存在着收率较低、操作步骤繁琐、容易引入杂质等缺陷；CN104017102A公开了一种通过调节溶液高pH值、低pH值、中性pH值，以及结合离心、乙醇沉淀的方法从肝素副产物制备舒洛地特原料的方法，该方法尽管具有简单快速的特点，但存在着低pH值易于破坏糖链结构的风险。

发明内容

本发明旨在通过调整乙醇用量从肝素副产物中提取舒洛地特原料的方法，以克服现有技术存在的弊端。

这种从肝素钠副产物中提取舒洛地特原料药的方法，其特征在于它包括以下步骤：

a．原料溶解 将肝素钠副产物干燥品加水溶解后，加入1%~5%乙酸钠搅拌溶解，然后用醋酸调溶液pH值5.0~8.0，所述肝素钠副产物与水的质量比为1:6~1:20；

b．分级沉淀一 在上述所得溶液中加入溶液体积0.3~0.7倍量的95%的乙醇，搅拌10~30min后，在2~10℃下静置，静置12~36h后收集上清液；

c．分级沉淀二 在步骤b所得上清液中补加95%乙醇，当溶液中补加的乙醇体积为上清液体积的0.1~0.5倍时，搅拌10~30min，然后在2~10℃下静置，静置12~36h后沉淀物与上清液分层，收集沉淀物；

d．氧化 将上述所得沉淀物加水溶解后，用氢氧化钠溶液调节溶液pH值为10.0~11.0，然后升温到25~30℃时，加入1~3%过氧化氢搅拌反应，所述沉淀物与水的质量比为1:3~1:10；

e．分级沉淀三 上述氧化反应6~24h后，将溶液pH值调为6.0~7.0，然后将料液经微孔滤膜过滤后，在滤液中加入滤液体积1.5~2.5倍量的95%乙醇，搅拌10~30min后，在常温下静置8~16h；

f．干燥 将步骤e所得沉淀物脱水、粉碎后，在-1.0~ -0.8 bar、55~65℃下真空干燥12h后制得舒洛地特原料药。

本发明取得的技术进步：与现有技术比较，本发明提高了舒洛地特产品收率，比其它制备方法收率提高约10%，成本降低约20%。另外，本发明避免了使用班氏试剂引入铜离子污染的风险，减少了使用离心机产生的电力消耗。同时增加了过氧化氢氧化步骤，提升了产品质量，经检测，260nm和280nm吸光度远低于标准要求，可直接用于制备口服制剂和注射液。本发明适于规模化生产，使得肝素钠副产物得以充分利用，具有工艺简易、节能、环保、生产周期短等优势。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

实施例1：

a．原料溶解 称取肝素钠副产物干燥品1kg，缓慢加入15L纯化水搅拌溶解后，补加纯化水至溶液体积为20L，然后加入0.2kg乙酸钠搅拌溶解，用醋酸调溶液pH值5.0；

b．分级沉淀一 向步骤a所得溶液中加入体积浓度95%的乙醇6L，搅拌10min后，在2℃下静置，静置12h后沉淀物与上清液分层，收集上清液；

c．分级沉淀二 向步骤b所得的上清液中补加95%体积浓度的乙醇4L，搅拌10min后在2℃下静置，静置12h后沉淀物与上清液分层，收集沉淀物；

d．氧化 将步骤c所得沉淀物0.63kg加纯化水溶解后定容至6L，然后用氢氧化钠溶液调节pH值为10.0，调溶液温度至25℃后加入60ml质量浓度为30%的过氧化氢，搅拌反应；

e．分级沉淀三 上述氧化反应6h后，调整溶液pH值为6.0，再将溶液经0.2μm微孔滤膜过滤后，在滤液中加入9.1L的95%体积浓度的乙醇，搅拌10min后在常温下静置8h；

f．干燥 将步骤e所得沉淀物脱水、粉碎后，放置真空干燥箱中，在-1.0~ -0.8 bar、55~65℃下真空干燥12h，制得本发明舒洛地特原料药0.31kg。

实施例2：本实施例与实施例1不同之处是，

a．原料溶解 称取肝素钠副产物干燥品2kg，缓慢加入15L纯化水搅拌溶解后，补加纯化水至溶液体积为20L，然后加入0.6kg乙酸钠搅拌溶解，用醋酸调溶液pH值6.5；

b．分级沉淀一 向步骤a所得溶液中加入体积浓度为95%的乙醇10L，搅拌20min后在6℃环境下静置，静置24h后沉淀物与上清液分层，收集上清液；

c．分级沉淀二 向步骤b所得的上清液中补加95%体积浓度的乙醇10L，搅拌20min后在6℃环境下静置，静置24h后沉淀物与上清液分层，收集沉淀物；

d．氧化 将步骤c所得沉淀物1.29kg加纯化水溶解后定容至6L，然后用氢氧化钠溶液调节pH值为10.5，调溶液温度至27.5℃后加入120ml质量浓度为30%的过氧化氢，然后搅拌反应；

e．分级沉淀三 上述氧化反应12h后，调整溶液pH值为6.5，再将溶液经0.2μm微孔滤膜过滤后，在滤液中加入12L的95%体积浓度的乙醇，搅拌20min后在常温下静置12h；

f．干燥 步骤e所得沉淀物脱水、粉碎后，放置真空干燥箱中，在-1.0~ -0.8 bar、55~65℃下真空干燥12h，制得本发明舒洛地特原料药0.65kg。

实施例3：本实施例与实施例1不同之处是，

a．原料溶解 称取肝素钠副产物干燥品3kg，缓慢加入15L纯化水搅拌溶解后，补加纯化水至溶液体积为20L，然后加入1kg乙酸钠搅拌溶解，再用醋酸调溶液pH值8.0；

b．分级沉淀一 向步骤a所得溶液中加入14L体积浓度为95%的乙醇，搅拌30min后在10℃环境下静置，静置36h后沉淀物与上清液分层，收集上清液；

c．分级沉淀二 向步骤b所得的上清液中补加95%体积浓度的乙醇16L，搅拌30min后在10℃环境下静置，静置36h后沉淀物与上清液分层，收集沉淀物；

d．氧化 将步骤c所得沉淀物1.95kg用纯化水溶解后定容至6L，然后用氢氧化钠溶液调节pH值为11.0，调溶液温度至30℃后加入180ml质量浓度为30%的过氧化氢，然后搅拌反应；

e．分级沉淀三 上述反应24h后，调整溶液pH值为7.0，再将溶液经0.2μm微孔滤膜过滤后，在滤液中加入15L的95%体积浓度的乙醇，搅拌30min后在常温下静置16h；

f．干燥 步骤e所得沉淀物脱水、粉碎后，放置真空干燥箱中，在-1.0~ -0.8 bar、55~65℃下真空干燥12h，即得舒洛地特原料药0.97kg。

取上述实施例1、实施例2、实施例3制得的舒洛地特原料药样品分别进行理化性质检测及电泳分析，结果表明三个样品检测结果均符合企业内控质量标准，检测结果见下表1。

表1 舒洛地特检测结果