一种基于水迷宫的动物学习记忆的个体化评价方法

摘要

本发明公开了一种基于水迷宫的动物学习记忆的个体化评价方法，以Morris水迷宫实验作为工具，以正常动物和认知异常动物作为对象，对多批大/小鼠从入水到登上平台的时间(潜伏期)数据进行分析，确定认知异常的动物个体化评价方法。与传统的强调样本量的组间比较的方法相比，本发明摒除了传统方法中单纯的“平均值±标准差”形式的以偏概全的做法，而是将模型动物按认知的差异性进行分开，逐一研究。这种方法可以更客观地反映出动物认知水平的差异性，更接近动物的真实状态。该方法操作简单、可行，多批动物重复试验和模型的验证实验也保证了方法的可靠性和科学性。

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于水迷宫的动物学习记忆的个体化评价方法

背景技术

Morris水迷宫为目前公认的评价大/小鼠学习记忆功能的检测设备，它以排除气味干扰、环境干扰、实验周期短、无需禁食等多种优势而被广泛应用。但它同时也存在着数据冗杂、处理繁琐等缺点。目前对Morris水迷宫的数据处理方法多采用传统的统计学方法，即在默认空白对照组0％发生认知损害的前提下，将模型组与对照组比较，比较两者的显著性差异。这种做法等于默认认知损害发病率为100％，虽然符合数理统计学规则，但却不符合实际情况。临床上如糖尿病引起的认知障碍的发病率通常为30％-50％，即使是空白对照组也可能存在10％以内的认知障碍。同时由于传统的评价方法默认动物认知障碍的发病率为100％，就使得如果使用药物介入治疗时缺乏针对性，在评价药效时也同样包括了一部分本身正常的动物。因此传统的数据分析方法就存在科学性不足以及无法对动物进行个体评价等缺点。针对以上问题，建立一个认知损害的评价标准，个体化分析认知损害的动物是十分必要。

发明内容

本发明旨在确定认知异常的动物个体化评价方法，该方法是一种基于水迷宫的动物学习记忆的个体化评价方法，该方法如下：

采用Morris水迷宫进行对动物的学习记忆实验，以动物从入水到登上平台的时间作为评价学习成绩的指标，即为潜伏期，对潜伏期进行数据处理，从训练第6次到第10次期间，若动物出现连续2次潜伏期大于等于90s，且没有出现连续2次潜伏期低于正常对照组第3次训练的平均潜伏期的情况，则认为动物出现认知异常；

其Morris水迷宫对动物的学习记忆检测步骤为：

第一步：在正式实验前一天，所有动物在不放平台及标记物的水迷宫中自由游泳2min，以适应水中环境，避免动物应激反应；

第二步：正式实验开始，首先进行训练期测试，训练期时，于实验前将动物放上平台站10s，帮助动物建立印象；

第三步：于不同象限将动物放入水中，动物游泳时间为120s，记录潜伏期，如果动物在120s内未找到平台，则潜伏期记为120s，然后将动物引导登上平台允许其在平台上停留10s，以减少动物紧张；

第四步：每只动物间隔1—4小时的时间重复上述实验过程，并保证每批动物间隔时间一致。

优选的，所述实验动物为健康成年Wistar大鼠或者ICR小鼠。

有益效果

本发明摒除了传统方法中单纯的“平均值±标准差”形式的以偏概全的做法，可在各组别动物中区分认知功能异常与正常的动物。本发明可以更客观地反映出动物认知水平的差异性，更接近动物的真实状态。该方法操作简单、可行，多批动物重复试验和分别采用东莨菪碱和双侧颈总动脉结扎建立痴呆及认知障碍模型的验证实验也保证了方法的可靠性和科学性。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进一步详细说明，但本发明不限于这些实施例。

实施例1

本实施的基于水迷宫的动物学习记忆的个体化评价方法为对正常ICR小鼠个体认知功能研究，研究过程如下：

选取20只体重20±2g，4-5周龄，雌雄各半，ICR小鼠进行Morris水迷宫实验研究。若采用传统统计方法，则此组为空白对照组，则此组出现认知障碍小鼠默认为0％。但是采用本评价方法研究发现，训练第3次为ICR小鼠潜伏期为94.8s，从训练第6次到第10次期间，认知功能异常小鼠为2只，认知功能发病率为10.0％(结果见表1)，与传统统计方法相比，这一数据更符合实际规律，可认为评价方法成功。

表1正常ICR小鼠每次训练潜伏期结果(s)

实施例2

本实施的基于水迷宫的动物学习记忆的个体化评价方法为正常Wistar大鼠的个体认知功能研究，研究过程如下：

选取20只体重200±20g，6-8周龄，雌雄各半，Wistar大鼠进行Morris水迷宫实验研究。若采用传统统计方法，此组为空白对照组，则此组出现认知障碍大鼠默认为0％。但是采用本评价方法研究发现，训练第3次为Wistar大鼠潜伏期为58.0s，从训练第6次到第10次期间，认知功能异常小鼠为1只，认知功能发病率为5.0％(结果见表2)，与传统统计方法相比，这一数据更符合实际规律，可认为评价方法成功。

表2正常Wistar大鼠每次训练潜伏期结果(s)

实施例3

本实施的基于水迷宫的动物学习记忆的个体化评价方法为注射东莨菪碱的小鼠个体认知功能研究，研究过程如下：

采用动物腹腔注射东莨菪碱建立认知障碍模型。选取20只体重20±2g，4-5周龄，雌雄各半，水迷宫实验前20min腹腔注射东莨菪碱溶液1mg/kg，建立小鼠痴呆模型。若采用传统统计方法，此组为模型对照组，则此组出现认知障碍小鼠默认为100％。但是采用本评价方法研究发现，从训练第6次到第10次期间，认知功能异常小鼠为16只，认知功能发病率为80.0％(结果见表3)，与传统统计方法相比，这一数据更符合实际规律，可认为评价方法成功。

表3东莨菪碱对ICR小鼠每次训练潜伏期的影响(s)

实施例4

本实施的基于水迷宫的动物学习记忆的个体化评价方法为双侧颈总动脉结扎的大鼠个体认知功能研究，研究过程如下：

选取20只体重200±20g，6-8周龄，雌雄各半Wistar大鼠，采用双侧颈总动脉结扎建立血管性认知障碍模型，模型建立7天后可以进行学习记忆的评价。本实施例选用模型建立后第42天的大鼠，训练第3次Wistar大鼠潜伏期为55.3s，若采用传统统计方法，此组为模型对照组，则此组出现认知障碍小鼠默认为100％。但是采用本评价方法研究发现，从训练第6次到第10次期间，认知功能异常小鼠为11只，认知功能发病率为55.0％(结果见表4)，与传统统计方法相比，这一数据更符合实际规律，可认为评价方法成功。

表4双侧颈总动脉结扎对Wistar大鼠每次训练潜伏期的影响(s)

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。