艾司奥美拉唑镁肠溶制剂在不同介质中溶出度的测定方法

摘要

本发明公开了一种艾司奥美拉唑镁肠溶制剂在不同介质中溶出度的测定方法，该方法增加了建立线性回归方程的步骤，即取艾司奥美拉唑镁肠溶片或肠溶胶囊的内容物加氢氧化钠溶液、乙醇超声溶解，过滤，取滤液用溶出介质定容后置于37℃±0.5℃水浴中，分别于各溶出时间点取样注入高效液相色谱仪，记录色谱图，并从主峰与相对保留时间2.7杂质峰的面积变化关系中，找出二者之间的线性关系，得出线性回归方程，将其运用于艾司奥美拉唑镁的溶出量的计算。该方法解决了现有技术不能准确测定艾司奥美拉唑镁肠溶制剂在酸性介质中溶出度的问题，本发明的方法具有方便、快捷、准确、重现性好，灵敏度高，在工作中实用性强等优点。

说明书

技术领域

本发明涉及药物制剂分析检测领域，特别是涉及一种艾司奥美拉唑镁肠溶制剂在不同介质中溶出度的测定方法。

背景技术

艾司奥美拉唑镁(Esomeprazole Magnesium，双-S-5-甲氧基-2-{[(4-甲氧基-3,5-二甲基-2-吡啶基)甲基]亚磺酰－1H－苯并咪唑镁三水合物)一种新的质子泵抑制剂，其分子式为C₃₄H₃₆MgN₆O₆S₂·3H₂O，分子量767.17，化学结构式如下：

艾司奥美拉唑镁，也称为埃索美拉唑镁，是奥美拉唑的S-构型旋光异构体，其呈弱碱性，在胃壁细胞泌酸微管的高酸环境中浓集并转化为活性物次磺酸酰胺，然后与胃壁细胞上的H⁺-K⁺-ATP酶亚单位半胱氨酸残基上的巯基通过二硫键结合，使酶被氧化失活，从而使胃壁细胞的H⁺不能转运到胃腔，进而发挥抑制胃酸分泌，进而发挥抑制胃酸的治疗作用。

艾司奥美拉唑镁结构中存在亚砜基，使其对酸性介质极其敏感，容易降解，这也导致其在pH6.0磷酸盐缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、水等介质中的溶出过程中发生降解，不利于溶出结果的准确计算。然而，检索关于艾司奥美拉唑镁制剂溶出度控制方法的文献资料及专利，并未发现有相关方面的研究报道。这也就难以准确的评价艾司奥美拉唑镁肠溶制剂的溶出过程。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种艾司奥美拉唑镁肠溶制剂溶出度的测定方法。

实现上述发明目的的具体技术方案如下：

一种艾司奥美拉唑镁肠溶制剂溶出度的测定方法，包括以下步骤：

(1)供试品溶液a的配制

取艾司奥美拉唑镁肠溶制剂加入溶出度仪的溶出介质中，搅拌转速为50rpm～100rpm，温度为37℃±0.5℃，在不同时间点取溶出液过滤，取滤液加入氢氧化钠溶液，所述氢氧化钠溶液的浓度为0.1mol/L～0.5mol/L，所取滤液与氢氧化钠溶液的体积比为1:0.1-0.14，摇匀，即为各时间点的供试品溶液a；

(2)艾司奥美拉唑镁溶液b的配制

取艾司奥美拉唑镁肠溶制剂，研细，称取研细的粉末加入氢氧化钠溶液，超声，加入乙醇，继续超声，用氢氧化钠溶液定量稀释，得溶液Ⅰ，过滤，得滤液Ⅰ，取滤液Ⅰ用所述酸性介质定量稀释，得溶液Ⅱ；将溶液Ⅱ置于37℃±0.5℃水浴中，分别于不同时间点取样过滤，得各时间点的滤液Ⅱ，取滤液Ⅱ加入氢氧化钠溶液，所取滤液Ⅱ与氢氧化钠溶液的体积比为1:0.1-0.14，摇匀，即为所述各时间点的艾司奥美拉唑镁溶液b；所述氢氧化钠溶液的浓度为0.01mol/L～1.0mol/L；

(3)对照品溶液的配制

取奥美拉唑对照品，用乙醇溶解，再用溶出介质定量稀释，移取稀释后的溶液，加入氢氧化钠溶液，摇匀，即为对照品溶液；所述氢氧化钠溶液的浓度为0.1mol/L～0.5mol/L，所述稀释后的溶液与氢氧化钠溶液的体积比为1:0.1-0.14；

(4)高效液相色谱法检测

步骤Ⅰ：用高效液相色谱法对供试品溶液a以及对照品溶液进行，记录供试品溶液a的主峰峰面积A_a主与相对保留时间为2.7的杂质峰的峰面积A_a杂；以及对照品溶液的峰面积；

步骤Ⅱ：用高效液相色谱法对各时间点的艾司奥美拉唑镁溶液b进行检测，记录各时间点主峰峰面积A_b主与相对保留时间为2.7的杂质峰的峰面积A_b杂；建立各时间点相对保留时间为2.7的杂质峰峰面积A_b杂的增加值与主峰峰面积A_b主的减少值之间的线性回归方程y＝kx+m以及其相关系数r，其中y为主峰峰面积的减少值，x为杂质峰峰面积的增加值；

根据步骤Ⅰ中记录的相对保留时间为2.7的杂质峰的峰面积A_a杂以及步骤Ⅱ的线性回归方程y＝kx+m，计算得到供试品溶液a的主峰峰面积的减少值，再加上步骤Ⅰ中记录的主峰峰面积A_a主，计算得到艾司奥美拉唑镁实际的溶出量，进而得到溶出度。

在其中一些实施例中，所述艾司奥美拉唑镁肠溶制剂为艾司奥美拉唑镁肠溶微丸胶囊或艾司奥美拉唑镁肠溶片剂。

在其中一些实施例中，所述溶出介质为pH5.5-7.0的磷酸盐缓冲溶液或水。

在其中一些实施例中，步骤(3)以及步骤(4.2)所述的高效液相色谱法检测的色谱条件为：

色谱柱：C18色谱柱，规格为5μm,4.6*150mm；流动相：乙腈-磷酸盐缓冲溶液-水，所述乙腈、磷酸盐缓冲溶液与水的体积比为33-37:48-52:13-17，所述磷酸盐缓冲溶液的pH为7.2-7.4；流速：0.7～0.9mL/min；进样量：20μL；柱温：25℃～35℃；检测波长：302nm。

在其中一些实施例中，所述乙腈、磷酸盐缓冲溶液与水的体积比为35:50:15，所述磷酸盐缓冲溶液的pH为7.3，其配制方法为取1mol/L磷酸二氢钠溶液10.5ml与0.5mol/L磷酸氢二钠溶液60ml,加水稀释至1000ml，摇匀即得；流速：0.8mL/min；柱温：30℃。

在其中一些实施例中，步骤(1)中艾司奥美拉唑镁肠溶制剂中的艾司奥美拉唑镁与溶出介质的配比为20mg：900-1000mL；所述氢氧化钠溶液的浓度为0.25mol/L～0.5mol/L，所取滤液与氢氧化钠溶液的体积比为1:0.12。

在其中一些实施例中，步骤(1)所述搅拌的转速为50rpm～75rpm。

在其中一些实施例中，步骤(2)中所述乙醇与艾司奥美拉唑镁肠溶制剂粉末的配比为7～8ml：100mg，所述溶液Ⅰ中含艾司奥美拉唑镁肠溶制剂粉末5mg/mL；所取滤液Ⅰ与所得溶液Ⅱ的体积比为1:50。

在其中一些实施例中，步骤(2)中所述氢氧化钠溶液的浓度为0.25mol/L～0.5mol/L，所取滤液Ⅱ与氢氧化钠溶液的体积比为1:0.12。

在其中一些实施例中，步骤(3)所述对照品溶液中奥美拉唑的含量为20μg/ml。

在其中一些实施例中，步骤(4)所述线性回归方程y＝kx+m中，1.0≤k≤5.0，20000≤m≤100000，相关系数r大于0.995。

本发明的艾司奥美拉唑镁肠溶制剂溶出度的测定方法具有以下优点和有益效果：

艾司奥美拉唑镁肠溶制剂在酸性介质中的溶出过程中易降解，用现有方法测定其在酸性介质中的溶出量时，主峰面积随时间推移而逐渐减小，并且各个时间点上色谱图所有峰的峰面积总和不一致，这造成无法精确计算艾司奥美拉唑镁的溶出量。本发明的发明人通过大量实验研究发现，将艾司奥美拉唑镁溶解于酸性介质中，随着放置时间的变化，主峰峰面积的减少与相对保留时间为2.7的杂质峰的峰面积的增加存在一定的线性关系，因此发明人创造性的在其溶出度的测试过程中增加了建立线性回归方程的步骤及其具体方法，即建立主峰峰面积的减少与相对保留时间为2.7的杂质峰的峰面积的增加之间的线性回归方程，利用该回归方程可以准确计算艾司奥美拉唑镁肠溶制剂在溶出过程中主峰面积随时间变化的减少，再根据实际测定的主峰面积可以准确计算得出艾司奥美拉唑镁肠溶制剂在酸性介质中不同时间点的溶出度，进而建立溶出曲线，该溶出曲线可以用来准确评价艾司奥美拉唑镁肠溶制剂的在不同介质中的溶出过程，尤其是在pH为6.0的磷酸盐缓冲溶液或水中的溶出过程。

因此，本发明的艾司奥美拉唑镁肠溶制剂溶出度的测定方法解决了现有技术不能准确测定艾司奥美拉唑镁肠溶制剂在酸性介质中溶出度的问题，本发明的方法具有方便、快捷、准确、重现性好，灵敏度高，在工作中实用性强等优点。

附图说明

图1为实施例1中艾司奥美拉唑镁肠溶片在pH6.0的磷酸盐缓冲液介质中降解的高效液相色谱图；

图2为实施例2中艾司奥美拉唑镁肠溶片水介质中降解的高效液相色谱图；

图3为实施例4中艾司奥美拉唑镁肠溶制剂在pH6.0的磷酸盐缓冲液介质中的溶出曲线图；

图4为实施例5中艾司奥美拉唑镁肠溶制剂在水介质中的溶出曲线图。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明的艾司奥美拉唑镁肠溶制剂溶出度的测定方法作进一步描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施列。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。

除特别说明外，以下实施例中所使用的原料或试剂均为市售。

以下实施例中高效液相色谱检测的色谱条件为：

色谱柱：C18柱，规格为5μm,4.6*150mm；流动相：乙腈-磷酸盐缓冲溶液-水，乙腈、磷酸盐缓冲溶液与水的体积比为35:50:15，磷酸盐缓冲溶液的pH为7.3(通过以下方法配制：取1mol/L磷酸二氢钠溶液10.5ml与0.5mol/L磷酸氢二钠溶液60ml,加水稀释至1000ml,摇匀)；流速：0.8ml/min；进样量：20μL；柱温：30℃；检测波长：302nm。

实施例1 艾司奥美拉唑镁肠溶片或肠溶微丸胶囊在pH6.0磷酸盐缓冲液中的降解规律

取规格20mg的艾司奥美拉唑镁肠溶片或肠溶微丸胶囊(除去胶囊壳，取内容物，下同)置研钵中，研细,称取100mg于20ml容量瓶中，加入0.0125mol/L氢氧化钠溶液12mL，超声5min，加7.5ml乙醇继续超声3min，用0.0125mol/L氢氧化钠溶液定容。过滤，取滤液2ml到100ml容量瓶中，用pH6.0磷酸盐缓冲液定容，置37℃±0.5℃水浴中，分别于0、15、30、45、60、90、120、180、240min取样，过滤。取续滤液5ml到西林瓶中，分别加入0.5mol/L氢氧化钠600μl，混匀，精密吸取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。由于样品在pH6.0磷酸盐缓冲液中降解，以主峰及其中一个相对保留时间2.7的降解杂质峰进行统计,结果见表1，表2；并分别以主峰峰面积A_主的减少值作为y值，相对保留时间2.7的杂质峰峰面积的增加值作为x值；A_主减少值计算方法为主峰0min时主峰峰面积A_主的分别减去个各时间点的该主峰峰面积，相应地，A_杂增加值计算方法为相对保留时间2.7的杂质峰在各时间点的峰面积(A_杂)的减去0min时的该杂质峰面积，进行回归方程计算，结果见表3及表4。

表1.艾司奥美拉唑镁肠溶片在pH6.0的磷酸盐缓冲液介质中的降解数据

表2.艾司奥美拉唑镁肠溶微丸胶囊在pH6.0的磷酸盐缓冲液中的降解数据

表3.艾司奥美拉唑镁肠溶片在pH6.0的磷酸盐缓冲液中的线性回归方程

片号回归方程相关系数r1y＝3.5587x+420430.99952y＝3.5285x+381240.99953y＝3.5688x+476020.9995平均y＝3.5527x+425340.9997

表4.艾司奥美拉唑镁肠溶微丸胶囊在pH6.0的磷酸盐缓冲液中的线性回归方程

胶囊号回归方程相关系数r1y＝3.9230x+480020.99652y＝3.4722x+575100.99503y＝3.5605x+593360.9952平均y＝3.6563x+544760.9970

实施例2.艾司奥美拉唑镁肠溶片或肠溶微丸胶囊在水中的降解规律

取规格20mg的艾司奥美拉唑镁肠溶片或肠溶微丸胶囊(除去胶囊壳，取内容物)置研钵中，研细,称取100mg于20ml容量瓶中，用0.0125mol/L氢氧化钠溶液12mL,超声5min,加7.5ml乙醇继续超声3min,0.0125mol/L氢氧化钠溶液定容，过滤，取续滤液2ml到100ml容量瓶中，用0.1mol/L的盐酸调pH至7.0±0.05，再用水定容，置于37℃±0.5℃水浴中，分别于0、30、60、90、120、180、240、300、360min取样过滤，取续滤液5ml，分别加0.25mol/L氢氧化钠600μl，混匀，精密吸取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。由于样品在水介质中降解，以主峰及一个相对保留时间2.7的降解杂质峰进行统计，结果见表5及表6；参照实施例1的数据处理方法分别以主峰峰面积的减少值作为y值，对应杂质峰峰面积的增加值作为x值，进行回归方程计算，结果见表7及表8。

表5.艾司奥美拉唑镁肠溶片在水介质中的降解数据

表6.艾司奥美拉唑镁肠溶微丸胶囊在水介质中的降解数据

表7.艾司奥美拉唑镁肠溶片在水介质中的线性回归方程

片号回归方程相关系数r1y＝4.2901x+662070.99922y＝4.3704x+653250.99823y＝4.848x+832480.9959平均y＝4.481x+709390.9984

表8.艾司奥美拉唑镁肠溶微丸胶囊在水介质中的线性回归方程

胶囊号回归方程相关系数r1y＝4.4894x+476700.99842y＝4.4383x+468220.99863y＝4.2855x+590800.9978平均y＝4.4111x+528180.9993

实施例3.艾司奥美拉唑镁肠溶片溶出量测定分析方法的准确性(加样回收率)验证

(1)pH6.0的磷酸盐缓冲液介质中加样回收率

对照品溶液制备：称取奥美拉唑约20mg，置100ml量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备：取规格20mg的艾司奥美拉唑镁肠溶片处方中的空白辅料，研细，称取100mg粉末于100ml容量瓶中，加入0.0125mol/L氢氧化钠溶液，超声5min，加入乙醇37.5ml，超声3min，用0.0125mol/L氢氧化钠溶液定容至刻度。过滤，取续滤液5ml置100ml容量瓶中，共取9份，分别加入对照品溶液1ml、3ml、5ml各三份至相应容量瓶中，分别用pH6.0的磷酸盐缓冲液稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液5ml，加入0.5mol/L氢氧化钠溶液600ul，作为供试品溶液。

精密吸取上述溶液各20ul注入液相色谱仪，记录色谱图。根据色谱图记录相对保留时间2.7杂质峰的峰面积。积分计算该杂质峰峰面积(峰面积初始值为0)，代入线性回归方程y＝3.5527x+42534中，计算主峰峰面积的减少值，并结合该色谱图记录的对应的主峰峰面积，得出实际的主峰峰面积，用外标一点法计算实际的艾司奥美拉唑镁的量，利用回收率(％)＝主药测得量/主药加入量乘以100％，计算回收率，结果见表9。

表9.艾司奥美拉唑镁肠溶片在pH6.0的磷酸盐缓冲液介质中的加样回收率

从表9得出：将相对保留时间2.7的杂质峰峰面积的增加值代入该线性回归y＝3.5527x+42534中求得主药降解的峰面积，进而得到总的主峰面积的方法，其回收率良好。说明该方法准确可靠。

(2)水介质中加样回收率

对照品溶液制备：称取奥美拉唑约20mg，置50ml量瓶中，用乙醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备：取规格20mg艾司奥美拉唑镁肠溶片处方中的空白辅料置于研钵中，研细，称取100mg粉末于100ml容量瓶中，加入0.0125mol/L氢氧化钠溶液，超声5min，加入乙醇37.5ml，超声3min，用0.0125mol/L氢氧化钠溶液定容至刻度。3500rpm离心20min，取上清液过滤，取续滤液1ml置100ml量瓶中，共取9份，分别加入对照品溶液1ml、3ml、5ml各三份置相应量瓶中，用水介质稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液5ml，加入0.25mol/L氢氧化钠溶液600ul，作为供试品溶液。

精密吸取上述溶液各20ul注入液相色谱仪，记录色谱图。根据色谱图记录相对保留时间2.7杂质峰的峰面积。计算该杂质峰峰面积的增加值，代入线性回归方程y＝4.481x+70939中，采用实施例3.(1)的数据处理方法，计算主峰峰面积的减少值，并加上该色谱图记录的对应的主峰峰面积，得出实际的主峰峰面积，从而计算实际的艾司奥美拉唑镁的量，计算回收率，结果见表10。

表10.艾司奥美拉唑镁肠溶片在水介质中的加样回收率

从表10得出，将相对保留时间2.7的杂质峰面积的增加值代入该线性回归y＝4.4111x+52818中求得到降解主药降解的峰面积，进而得到总的主峰面积的方法，其回收率良好。说明该方法准确可靠。

实施例4.艾司奥美拉唑镁肠溶片及微丸胶囊在pH6.0的磷酸盐缓冲液介质中溶出曲线的测定

(1)供试品溶液的配制

取规格20mg艾司奥美拉唑镁肠溶片6片或艾司奥美拉唑镁肠溶微丸肠溶胶囊6粒，采用桨法溶出度仪，参照中国药典2015年版溶出度与释放度测定法(通则0931第二法方法1)，每片或每粒以1000ml pH 6.0磷酸盐缓冲液为溶出介质，转速50rpm，分别于15、30、45、60、90、120、180min的时间取溶液，过滤，取续滤液5ml加入0.25mol/L氢氧化钠溶液600μl，摇匀，作为供试品溶液。

(2)对照品溶液的配制

取奥美拉唑对照品20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加乙醇10ml使溶解，用溶出介质稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，用该溶出介质定量稀释制成每1ml中约含0.02mg的溶液，再精密量取5ml,精密加0.25mol/L氢氧化钠溶液600μl，摇匀，作为对照品溶液。

(3)高效液相色谱法检测

用高效液相色谱法对各时间点的溶出的供试品溶液以及对照品溶液进行检测，得色谱图，记录主峰峰面积与相对保留时间为2.7的杂质峰的峰面积。

根据液相色谱图记录的各时间点相对保留时间2.7的杂质峰的峰面积，计算各时间点该杂质峰峰面积的增加值，将该增加值代入所得线性回归方程y＝3.5527x+42534(片)或者y＝3.6563x+54476(微丸胶囊)中，计算各时间点主峰峰面积的减少值，并加上该色谱图中对应的主峰峰面积，得出各时间点实际的主峰峰面积，用外标一点法计算各个溶出时间点实际的溶出量，计算溶出度(以平均值±SD表示)，并绘制溶出曲线，艾司奥美拉唑镁肠溶片及胶囊在pH6.0的磷酸盐缓冲液介质中的溶出曲线图见图3，溶出度结果见表11。溶出度计算公式如下。

溶出度计算公式：

注：A_供：供试品溶液中艾司奥美拉唑峰面积及其降解峰面积之和

A_对：对照品溶液中奥美拉唑峰面积

C_对：对照品溶液浓度(mg/ml)

P_供：供试品溶液稀释倍数

累积溶出度计算公式：

注：An：为各时间点测得溶出度

V₁：各时间点固定取样体积(10ml)

V₂：溶出介质体积，1000ml

表11.艾司奥美拉唑镁肠溶制剂在pH6.0磷酸盐缓冲液中溶出度(n＝6)

实施例5.艾司奥美拉唑镁肠溶片及微丸胶囊在水介质中溶出曲线的测定

(1)供试品溶液的配制

取规格20mg的艾司奥美拉唑镁肠溶片6片或艾司奥美拉唑镁肠溶微丸胶囊6粒，采用桨法溶出度仪，参照中国药典2015年版溶出度与释放度测定法(通则0931第二法方法1)，每片或每粒以1000ml水为溶出介质，转速为50rpm，分别于30、60、90、120、180、240、300、360min的溶出时间点取溶液，过滤，取续滤液5ml加入0.25mol/L氢氧化钠溶液600μl，摇匀，作为供试品溶液。

(2)对照品溶液的配制

取奥美拉唑对照品20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加乙醇10ml使溶解，用溶出介质稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，用该溶出介质定量稀释制成每1ml中约含0.02mg的溶液，再精密量取5ml,精密加0.25mol/L氢氧化钠溶液600μl，摇匀，作为对照品溶液。

(3)高效液相色谱法检测

用高效液相色谱法对各时间点的溶出的供试品溶液以及对照品溶液进行检测，得色谱图，记录主峰峰面积与相对保留时间为2.7的杂质峰的峰面积。

根据液相色谱图记录的各时间点相对保留时间2.7的杂质峰的峰面积，计算各时间点该杂质峰峰面积的增加值，将该增加值代入所得线性回归方程y＝4.481x+70939(片)或者y＝4.4111x+52818(微丸胶囊)中，计算各时间点主峰峰面积的减少值，并加上该色谱图中对应的主峰峰面积，得出各时间点总的主峰峰面积，用外标一点法计算各个溶出时间点实际的溶出量，计算溶出度(以平均值±SD表示)，并绘制溶出曲线(参照实施例4)。艾司奥美拉唑镁肠溶片及胶囊在水介质中的溶出曲线图见图4，溶出度结果见表12。

表12.艾司奥美拉唑镁肠溶制剂在水介质中溶出度(n＝6)

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。