一种基于睾丸内注射的基因定点编辑技术

摘要

本发明公开了一种简便高效的基因定点编辑方法，涉及到转基因动物的制备、基因功能研究及生物医学领域。睾丸注射法是利用精子具有主动结合、转运、整合外源DNA的能力而发展的一种精子介导基因转移方法。本发明方法是优化了动物睾丸注射法，将利用成簇规律间隔短回文重复序列系统（CRISPR/Cas9）构建的载体通过睾丸多点注射或曲细精管显微注射，使之与精子染色体进行整合，实现基因的删除、替换、插入等目的。然后通过自然交配、人工授精等多种途径获得转基因动物后代。该方法充分利用了CRISPR/Cas9基因编辑系统的优势，结合现有的转基因动物技术，在大幅度提高基因修饰动物的获得效率的同时，避开了体外细胞操作的繁琐和对昂贵精密仪器设备的要求。