睾丸内注射和体内电穿孔联合法建立转基因小鼠的实验研究

摘要

目的：为了探讨将外源基因注射到在体睾丸生精小管内并进行体内电穿孔以建立转基因动物的可行性.方法：对真核表达质粒pCE-29DNA进行了2种不同的处理:(1)DNA+invivojetPEITM转染试剂+台盼蓝;(2)DNA+台盼蓝.然后将这两种不同处理的目的DNA分别注射到四组SPF级雄性KM小鼠睾丸生精小管内,其中注射有DNA+转染试剂+台盼蓝的2组动物中一组进行体内电穿孔,另一组则不进行体内电穿孔;注射有DNA+台盼蓝的2组动物也进行同样的处理.处理2周后的各组SPF级雄性KM小鼠分别与超排处理的SPF级雌性KM小鼠合笼交配,直至妊娠产仔.从各组中随机取20只新生仔鼠并提取其尾部基因组DNA进行PCR-Southern检测,以确定四种不同的处理后外源基因的整合和表达的效率.结论：将与高效转染试剂孵育的外源基因注射到睾丸生精小管内,并结合体内电穿孔技术可以显著地提高外源基因在精原干细胞或其它生精细胞的转染效率.