一种提高中温ɑ-淀粉酶的酶活的方法

摘要

一种提高中温ɑ-淀粉酶的酶活的方法，它包括以下步骤：①将占发酵液总重量2%的枯草芽孢杆菌种子液接种到装有2.5L发酵液的发酵罐中；②再控制通气量，其通气量为：按照发酵液体积与空气体积的比例进行设置，在0～10h为1：0.4，在10-18h为1：0.8，在18h～发酵结束时为1：1.1；③在发酵过程中进行补料，补料培养基按照重量百分比为：麦芽糊精27.50%，豆饼粉8.75%，Na2HPO4·12H2O？1.25%，(NH4)2SO4？0.5%，(NH4)2Cl？0.19%，CaCl2？0.25%，其余为水，每次补料20mL，整个培养过程为51h-56h。本发明的方法制备工艺简单、方便易行，无需增加特殊设备，成本低。

说明书

技术领域：

本发明涉及ɑ-淀粉酶的生产方法，特别是一种提高中温ɑ-淀粉酶的酶活的方法。

背景技术：

中温α-淀粉酶是一种十分重要的酶制剂，大量应用于粮食加工、食品工业、酿造、发酵、纺织品工业和医药行业等，占整个酶制剂市场份额的25％左右；我国主要以枯草芽孢杆菌（Bacillus.Subtilis）发酵法生产中温α-淀粉酶，由于所产酶活不高，产量严重不足，每年需大量进口，造成数亿美元的外汇损失。因此亟需一种可以工业化应用的提高中温ɑ-淀粉酶的酶活的方法。

发明内容：

本发明的目的是设计一种工艺方法简单、并且生产效率较高的提高中温ɑ-淀粉酶的酶活的方法。

本发明的技术方案是，一种提高中温ɑ-淀粉酶的酶活的方法，其特征在于：它包括以下步骤：①将占发酵液总重量2%的枯草芽孢杆菌种子液接种到装有2.5L发酵液的发酵罐中；②再控制通气量，其通气量为：按照发酵液体积与空气体积的比例进行设置，在0～10h为1：0.4，在10-18h为1：0.8，在18h～发酵结束时为1：1.1；③在发酵过程中进行补料，补料培养基按照重量百分比为：麦芽糊精27.50%，豆饼粉8.75%，Na₂HPO₄·12H₂O1.25%，(NH₄)₂SO₄0.5%，(NH₄)₂Cl0.19%，CaCl₂0.25%，其余为水，每次补料20mL，整个培养过程为51h-56h。所述的发酵液的组成为：按照重量百分比为：糊精5%，豆饼粉7%，Na₂HPO₄·12H₂O1%，(NH₄)₂SO₄0.4%，(NH₄)₂Cl0.15%，CaCl₂0.2%，其余为水。在培养的第8-10h时向发酵罐中添加SNP，当罐内的SNP含量达到0.05-0.15mmol/L时停止加入。所述的枯草芽孢杆菌为产中温ɑ-淀粉酶的Bacillus.SubtilisBF7658。上文所述的SNP为亚硝基铁氰化钠。

本发明的方法制备工艺简单、方便易行，无需增加特殊设备，成本低，介导后枯草芽孢杆菌产α-淀粉酶效率显著增高，工业化生产效率高。

具体实施方式：

实施例1，

一种提高中温ɑ-淀粉酶的酶活的方法，它包括以下步骤：①将占发酵液总重量2%的枯草芽孢杆菌种子液接种到装有2.5L发酵液的发酵罐中；②再控制通气量，其通气量为：按照发酵液体积与空气体积的比例进行设置，在0～10h为1：0.4，在10-18h为1：0.8，在18h～培养结束时为1：1.1；③在发酵过程中进行补料，补料培养基按照重量百分比为：麦芽糊精27.50%，豆饼粉8.75%，Na₂HPO₄·12H₂O1.25%，(NH₄)₂SO₄0.5%，(NH₄)₂Cl0.19%，CaCl₂0.25%，其余为水，每次补料20mL，整个培养过程为51h。本实施例所述的发酵液的组成为：按照重量百分比为：糊精5%，豆饼粉7%，Na₂HPO₄·12H₂O1%，(NH₄)₂SO₄0.4%，(NH₄)₂Cl0.15%，CaCl₂0.2%，其余为水；本实施例在培养的第8h时向发酵罐中添加亚硝基铁氰化钠，当罐内的亚硝基铁氰化钠含量达到0.05mmol/L时停止加入；本实施例所述的枯草芽孢杆菌为产中温ɑ-淀粉酶的Bacillus.SubtilisBF7658。

实施例2，

一种提高中温ɑ-淀粉酶的酶活的方法，它包括以下步骤：①将占发酵液总重量2%的枯草芽孢杆菌种子液接种到装有2.5L发酵液的发酵罐中；②再控制通气量，其通气量为：按照发酵液体积与空气体积的比例进行设置，在0～10h为1：0.4，在10-18h为1：0.8，在18h～培养结束时为1：1.1；③在发酵过程中进行补料，补料培养基按照重量百分比为：麦芽糊精27.50%，豆饼粉8.75%，Na₂HPO₄·12H₂O1.25%，(NH₄)₂SO₄0.5%，(NH₄)₂Cl0.19%，CaCl₂0.25%，其余为水，每次补料20mL，整个培养过程为53h。本实施例所述的发酵液的组成为：按照重量百分比为：糊精5%，豆饼粉7%，Na₂HPO₄·12H₂O1%，(NH₄)₂SO₄0.4%，(NH₄)₂Cl0.15%，CaCl₂0.2%，其余为水；本实施例在培养的第9h时向发酵罐中添加亚硝基铁氰化钠，当罐内的亚硝基铁氰化钠含量达到0.10mmol/L时停止加入；本实施例所述的枯草芽孢杆菌为产中温ɑ-淀粉酶的Bacillus.SubtilisBF7658。

实施例3，

一种提高中温ɑ-淀粉酶的酶活的方法，它包括以下步骤：①将占发酵液总重量2%的枯草芽孢杆菌种子液接种到装有2.5L发酵液的发酵罐中；②再控制通气量，其通气量为：按照发酵液体积与空气体积的比例进行设置，在0～10h为1：0.4，在10-18h为1：0.8，在18h～培养结束时为1：1.1；③在发酵过程中进行补料，补料培养基按照重量百分比为：麦芽糊精27.50%，豆饼粉8.75%，Na₂HPO₄·12H₂O1.25%，(NH₄)₂SO₄0.5%，(NH₄)₂Cl0.19%，CaCl₂0.25%，其余为水，每次补料20mL，整个培养过程为56h。本实施例所述的发酵液的组成为：按照重量百分比为：糊精5%，豆饼粉7%，Na₂HPO₄·12H₂O1%，(NH₄)₂SO₄0.4%，(NH₄)₂Cl0.15%，CaCl₂0.2%，其余为水；本实施例在培养的第10h时向发酵罐中添加亚硝基铁氰化钠，当罐的内亚硝基铁氰化钠含量达到0.15mmol/L时停止加入；本实施例所述的枯草芽孢杆菌为产中温ɑ-淀粉酶的Bacillus.SubtilisBF7658。

对上述各实施例加工结束后的发酵液检测其中的α-淀粉酶酶活，发现酶活由421U/mL提高至685U/mL，测定方法为：参照中温α-淀粉酶活力测定QB-T1803-1993。

上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举，而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本实用新型创造的保护范围之内。