一种利用提油后的油脂酵母菌体制备酵母多糖的方法

摘要

本发明公开了一种利用提油后的油脂酵母菌体制备酵母多糖的方法，该方法包括以下步骤：a、提油后的油脂酵母菌体用亲水性有机溶剂和疏水性有机溶剂分别洗涤；b、洗涤后的油脂酵母菌体在碱液或水中80-150℃处理后固液分离；c、往步骤b获得的液体中加入醇，固液分离，得到固体为水溶性或者碱溶性多糖产品；d、步骤b获得的固体，使用酸80-150℃处理0.5-3小时后固液分离，得到固体为酸不溶性多糖产品。本发明通过化学物理手段利用提油后的油脂酵母菌体制备高附加值的酵母多糖产品，最终实现“变废为宝”，实现经济效益和环境效益，还可以利用各类廉价原料，且免除了传统酿酒酵母多糖提取过程中涉及的工艺。

说明书

技术领域：

本发明涉及生物化工领域，具体涉及一种利用提油后的油脂酵母菌体制备酵母多糖的方 法。

背景技术：

油脂酵母是一种重要的工业微生物，其能合成满足工业、食品、医疗保健用的各类微生 物油脂。通常，油脂酵母提油后会留下大量非油脂类菌体。如果直接将这些非油脂类菌体丢 弃，会造成巨大的资源浪费，同时还会污染环境。

一般而言，酵母细胞壁占其细胞干重18-30％，而细胞壁中又有85％的组成为酵母多糖 物质(以葡聚糖与甘露聚糖为主)。油脂酵母发酵后能积累自身干重50％以上的微生物油脂， 而提油后剩下的菌体多为酵母细胞壁，因此富含酵母多糖。

通常而言，酵母多糖从酿酒酵母中提取得到(用啤酒废酵母制备酵母多糖、海藻糖及酵 母抽提物的方法，ZL 200910036820.5)。但工艺繁琐，涉及的工艺包括细胞破碎，质壁分离， 除蛋白，除脂等。

发明内容：

本发明的目的是提供一种利用提油后的油脂酵母菌体制备酵母多糖的方法。

本发明是通过以下技术方案予以实现的：

一种利用提油后的油脂酵母菌体制备酵母多糖的方法，该方法包括以下步骤：

a、洗涤去杂：提油后的油脂酵母菌体用亲水性有机溶剂和疏水性有机溶剂分别洗涤；

b、碱液或水处理：洗涤后的油脂酵母菌体在碱液或水中80-150℃处理0.5-3小时后固液 分离得到固体和液体；

c、醇析：往步骤b获得的液体中加入醇，静置，固液分离，得到固体为水溶性或者碱溶 性多糖产品；

d、酸处理：步骤b获得的固体，使用酸80-150℃处理0.5-3小时后固液分离，得到固体 为酸不溶性多糖产品。

所述的油脂酵母来源于工业中的斯达油脂酵母(Lipomyces starkeyi)、圆红冬孢酵母 (Rhodosporidium toruloides)、粘红酵母(Rhodotorula glutinis)、浅白隐球酵母(Cryptococcus  albidus)、皮状丝孢酵母(Trichosporon cutaneum)、解脂亚罗酵母(Yarrowia lipolytica)、 Trichosporon dermatis、Trichosporn coremiiforme中的任一种。

步骤a中所述亲水性有机溶剂优选为甲醇或乙醇，所述疏水性有机溶剂优选为石油醚或 正己烷，用亲水性有机溶剂和疏水性有机溶剂分别洗涤提油后的油脂酵母菌体用来去除细胞 外的亲水性与疏水性杂质。

步骤b中的所述的碱液选自氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液、氢氧化钙水溶液、氨水 水溶液中的任一种。

步骤c中醇优选为甲醇或乙醇，醇的用量为步骤b获得的液体体积的的2-8倍，静置时 间为3-8小时，固液分离方法优选为离心或者过滤。

步骤d中的酸优选为盐酸、硫酸、乙酸、甲酸中的任一种。

本发明的有益效果为：

与从酿酒酵母中提取酵母多糖的工艺相比，利用提油后的油脂酵母菌体制备酵母多糖有 以下优势：

1)油脂酵母可以利用大量不同种类的廉价原料特别是木质纤维素原料进行发酵，获得 更高的生物量用于多糖提取；

2)可免去酿酒酵母多糖提取过程中涉及的工艺包括细胞破碎，质壁分离，除蛋白，除 脂等。

总之，本发明通过化学物理手段利用提油后的油脂酵母菌体制备高附加值的酵母多糖产 品，不仅可实现“变废为宝”，实现经济效益和环境效益，还可以通过油脂发酵广泛利用各类 廉价原料特别是木质纤维素原料制备酵母多糖，且免除了传统酿酒酵母多糖提取过程中涉及 的工艺包括细胞破碎，质壁分离，除蛋白，除脂等，从而提供一条切实可行的酵母多糖制备 工艺。

具体实施方式：

以下是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

利用提油后的油脂酵母菌体制备酵母多糖的方法，该方法包括以下步骤：

a、以10g油脂提取后的皮状丝孢酵母(Trichosporon cutaneum)菌体为原料，用乙醇、 石油醚分别洗涤后固液分离；

b、步骤a得到的洗涤后的油脂酵母菌体在1M的氢氧化钠水溶液在105℃下处理1.5小 时，过滤得到固体和液体；

c、往步骤b获得的液体中加入其5倍体积的乙醇后静置8小时过滤，得到固体为2g碱 溶性多糖；

d、步骤b获得的固体，使用1M硫酸在105℃下处理1.5小时，过滤后，得到固体为3g 酸不溶性多糖产品。

实施例2：

利用提油后的油脂酵母菌体制备酵母多糖的方法，该方法包括以下步骤：

a、以10g油脂提取后的斯达油脂酵母(Lipomyces starkeyi)菌体为原料，用甲醇、正己 烷分别洗涤后固液分离；

b、步骤a得到的洗涤后的油脂酵母菌体在1M的氢氧化钾水溶液在80℃下处理3小时， 过滤得到固体和液体；

c、往步骤b获得的液体中加入其2倍体积的甲醇后静置5小时过滤，得到固体为0.4g 碱溶性多糖；

d、步骤b获得的固体，使用1M盐酸在80℃下处理3小时，过滤后，得到固体为3.0g 酸不溶性多糖。

实施例3：

利用提油后的油脂酵母菌体制备酵母多糖的方法，该方法包括以下步骤：

a、以10g油脂提取后的圆红冬孢酵母(Rhodosporidium toruloides)菌体为原料，用乙 醇、正己烷分别洗涤后固液分离；

b、步骤a得到的洗涤后的油脂酵母菌体在0.1M的氢氧化钙水溶液在150℃下处理0.5 小时，过滤得到固体和液体；

c、往步骤b获得的液体中加入其2倍体积的甲醇后静置5小时过滤，得到固体为0.7g 碱溶性多糖；

d、步骤b获得的固体，使用2M乙酸在95℃下处理1.5小时，过滤后，得到固体为2.5g 酸不溶性多糖。

实施例4：

利用提油后的油脂酵母菌体制备酵母多糖的方法，该方法包括以下步骤：

a、以10g油脂提取后的粘红酵母(Rhodotorula glutinis)菌体为原料，用乙醇、石油醚 分别洗涤后固液分离；

b、步骤a得到的洗涤后的油脂酵母菌体在0.1M的氢氧化钙水溶液在100℃下处理0.8 小时，过滤得到固体和液体；

c、往步骤b获得的液体中加入其8倍体积的甲醇后静置5小时过滤，得到固体为0.9g 碱溶性多糖；

d、步骤b获得的固体，使用2M甲酸在150℃下处理0.5小时，过滤后，得到固体为2.0g 酸不溶性多糖。

实施例5：

利用提油后的油脂酵母菌体制备酵母多糖的方法，该方法包括以下步骤：

a、以10g油脂提取后的浅白隐球酵母(Cryptococcus albidus)菌体为原料，用乙醇、石 油醚分别洗涤后固液分离；

b、步骤a得到的洗涤后的油脂酵母菌体在0.5M的氨水在110℃下处理1.0小时，过滤 得到固体和液体；

c、往步骤b获得的液体中加入其8倍体积的乙醇后静置8小时过滤，得到固体为1.0g 碱溶性多糖；

d、步骤b获得的固体，使用2M甲酸在150℃下处理0.5小时，离心去除上清液后，得 到固体为2.3g酸不溶性多糖。

实施例6：

利用提油后的油脂酵母菌体制备酵母多糖的方法，该方法包括以下步骤：

a、以10g油脂提取后的解脂亚罗酵母(Yarrowia lipolytica)菌体为原料，用乙醇、石油 醚分别洗涤后固液分离；

b、步骤a得到的洗涤后的油脂酵母菌体在蒸馏水中110℃下处理1.0小时，离心得到固 体和上清液；

c、往步骤b获得的上清液加入其5倍体积的甲醇后静置3小时过滤，得到固体为0.8g 碱溶性多糖；

d、步骤b获得的固体，使用2M甲酸在150℃下处理0.5小时，离心去除上清液后得到 得到固体为2.2g酸不溶性多糖。

实施例7：

利用提油后的油脂酵母菌体制备酵母多糖的方法，该方法包括以下步骤：

a、以10g油脂提取后的Trichosporon dermatis菌体为原料，用甲醇、正己烷分别洗涤后 固液分离；

b、步骤a得到的洗涤后的油脂酵母菌体在1M的氢氧化钠水溶液在110℃下处理1.0小 时，过滤得到固体和液体；

c、往步骤b获得的液体中加入其8倍体积的乙醇后静置8小时过滤，得到固体为1.0g碱 溶性多糖；

d、步骤b获得的固体，使用2M甲酸在150℃下处理0.5小时，离心去除上清液后得到 固体为2.5g酸不溶性多糖。

实施例8：

利用提油后的油脂酵母菌体制备酵母多糖的方法，该方法包括以下步骤：

a、以10g油脂提取后的Trichosporn coremiiforme菌体为原料，用甲醇、正己烷分别洗 涤后固液分离；

b、步骤a得到的洗涤后的油脂酵母菌体在自来水在110℃下处理2.0小时，过滤得到固 体和液体；

c、往步骤b获得的液体中加入其8倍体积的甲醇后静置5小时过滤，得到固体为1.5g 碱溶性多糖；

d、步骤b获得的固体，使用2M硫酸在120℃下处理1.5小时，离心去除上清液后得到 固体为2.8g酸不溶性多糖。