一种利用酶法拆分混旋硒－甲基硒代半胱氨酸制备光学纯硒－甲基硒代半胱氨酸的方法

摘要

本发明公开了一种利用酶法拆分混旋硒－甲基硒代半胱氨酸制备光学纯硒－甲基硒代半胱氨酸的方法，它是在氢氧化钠水溶液中，将混旋硒－甲基硒代半胱氨酸用乙酸酐乙酰化，盐酸等酸化得混旋N－乙酰－硒－甲基硒代半胱氨酸。然后在一定的pH值、反应温度、酶用量、底物和钴离子浓度条件下，将混旋N－乙酰－硒－甲基硒代半胱氨酸用猪肾酰化酶I拆分得光学纯L－硒－甲基硒代半胱氨酸和N－乙酰－D－硒－甲基硒代半胱氨酸，最后将N－乙酰－D－硒－甲基硒代半胱氨酸用盐酸加热水解，氨水等中和得光学纯D－硒－甲基硒代半胱氨酸。该法具有操作方便、成本较低等优点，是一种适合工业化生产光学纯硒－甲基硒代半胱氨酸的方法。

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用酶法拆分混旋硒-甲基硒代半胱氨酸制备光学纯硒-甲基硒代半胱氨酸的方法。

背景技术

L型硒-甲基硒代半胱氨酸是一种广泛存在于大蒜、洋葱和椰菜等植物以及富硒酵母中的天然含硒氨基酸，是第21种氨基酸-硒代半胱氨酸的衍生物。它具有抗癌、抗氧化、抗衰老，提高免疫力，治疗心脑血管疾病，解重金属毒，预防和治疗克山病、大骨节病等作用，可作为一种高效、安全的硒微量元素补充剂。D型硒-甲基硒代半胱氨酸是一种非天然氨基酸，是L型硒-甲基硒代半胱氨酸的光学异构体，两者的物理、化学性质在一般条件下几乎没有差异，因此对两者进行分离十分困难。

目前，关于混旋硒-甲基硒代半胱氨酸的拆分研究还没有报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种操作方便、成本较低、适合工业化生产的利用酶法拆分混旋硒-甲基硒代半胱氨酸制备光学纯硒-甲基硒代半胱氨酸的方法。

本发明通过以下步骤实现：

(1)N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的制备：在氢氧化钠水溶液中，将混旋硒-甲基硒代半胱氨酸用乙酸酐乙酰化，然后用盐酸或硫酸酸化得混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸；

(2)混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的拆分：采用猪肾酰化酶拆分，即：将混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于水，控制溶液的pH值、温度、酶用量、底物浓度和钴离子浓度等条件，酶解完毕后，将溶液用强酸性阳离子交换树脂分离，氨水洗脱得光学纯L-硒-甲基硒代半胱氨酸和N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸；

(3)N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸的水解：将N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于盐酸或硫酸中，加热水解完全，然后用氨水或氨气或三乙胺中和得光学纯D-硒-甲基硒代半胱氨酸。

其中，步骤(1)所述混旋硒-甲基硒代半胱氨酸的乙酰化反应是在氢氧化钠水溶液中，温度为0-60℃的条件下进行的，乙酰化试剂为乙酸酐，产物为N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸。

步骤(2)所述混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的拆分反应采用的酶是猪肾酰化酶I(EC Number：3.5.1.14，CAS Number：9012-37-7)，拆分反应是在pH4-10、温度为15-60℃、底物浓度为0.01-1mol/L、Co³⁺为0-0.01mol/L、底物与酶质量比为10-1000的条件下进行的，产物为光学纯L-硒-甲基硒代半胱氨酸和N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸。

步骤(3)所述N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸的水解反应是在(1+1)盐酸中、60-100℃加热的条件下进行的，产物为光学纯D-硒-甲基硒代半胱氨酸。

申请人在此之前申请的两个专利(申请号：200610124942.6，公开号：CN1948282A；申请号200710051362.3)中描述了硒-甲基硒代半胱氨酸的合成方法，得到了混旋硒-甲基硒代半胱氨酸和混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸。在此基础上，申请人又研制出一种以混旋硒-甲基硒代半胱氨酸或混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸为原料，利用酶法拆分制备光学纯L型和D型硒-甲基硒代半胱氨酸的方法。本发明具有操作方便、成本较低等优点，是一种适合工业化生产光学纯硒-甲基硒代半胱氨酸的方法。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细说明，但应理解本发明的范围非仅限于这些实施例的范围。

实施例1：

(1)N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的制备：

取18.2克混旋硒-甲基硒代半胱氨酸置于带有冷凝回流管、温度计和搅拌器的250毫升三口烧瓶中，将10克NaOH溶于100毫升水中，冷却后加到烧瓶中，搅拌使硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶解，再缓慢滴加乙酸酐14毫升，控制反应温度在0℃。加完后再搅拌约30小时，用茚三酮检测至无氨基酸反应。用盐酸调节pH至1-2，然后用乙酸乙酯萃取，将有机相合并后减压蒸干溶剂，得固体，用甲醇溶解，过滤除去不溶物，将甲醇溶液放置，析出白色固体，甲醇重结晶，得混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸20.44克，产率91.25％。

(2)混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的拆分：

将22.4克混旋N-乙酰-硒甲基硒代半胱氨酸溶于500毫升水中，用(1+1)氨水调pH至7，加入猪肾酰化酶I(Aminoacylase I from porcine kidney，ECNumber：3.5.1.14，CAS Number：9012-37-7)0.224克，控制温度37℃，反应每隔1小时取样用HPLC测定溶液中L-硒-甲基硒代半胱氨酸含量，监控酶解进度，反应约4小时后完成。然后将溶液于90℃加热使酶变性沉淀，抽滤，用732型阳离子交换树脂分离，用水和5％氨水洗脱。将水洗脱液减压蒸干后，用甲醇溶解，放置析出N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸12.82克。将5％氨水洗脱液减压蒸干后，用水-甲醇混合溶剂溶解，放置析出L-硒-甲基硒代半胱氨酸6.96克，光学纯度95.70％。

(3)N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸的水解：

将22.4克N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于200毫升(1+1)盐酸中，于95℃回流3小时至N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸水解完全(薄层色谱检测)。减压蒸干溶剂，除去未反应的盐酸，得固体，用甲醇溶解。在甲醇溶液中通氨气至pH约为10，再减压蒸干溶剂，除去剩余氨气，得固体，用甲醇溶解，将不溶物滤掉，滤液放置，析出白色固体，用水-甲醇重结晶，得D-硒-甲基硒代半胱氨酸15.00克，产率82.42％。

实施例2：

(1)N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的制备：

取18.2克混旋硒-甲基硒代半胱氨酸置于带有冷凝回流管、温度计和搅拌器的250毫升三口烧瓶中，将10克NaOH溶于100毫升水中，冷却后加到烧瓶中，搅拌使硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶解，再缓慢滴加乙酸酐14毫升，控制反应温度在30℃。加完后再搅拌约24小时，用茚三酮检测至无氨基酸反应。用盐酸调节pH至1-2，然后用乙酸乙酯萃取，将有机相合并后减压蒸干溶剂，得固体，用甲醇溶解，过滤除去不溶物，将甲醇溶液放置，析出白色固体，甲醇重结晶，得混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸体21.35克，产率95.31％。

(2)混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的拆分：

将22.4克混旋N-乙酰-硒甲基硒代半胱氨酸溶于0.001mol/L氯化钴水溶液100毫升中，用(1+1)氨水调pH至7，加入猪肾酰化酶I(Aminoacylase I fromporcine kidney.EC Number：3.5.1.14，CAS Number：9012-37-7)0.224克，控制温度37℃，反应每隔1小时取样用HPLC测定溶液中L-硒-甲基硒代半胱氨酸含量，监控酶解进度，反应约2小时后完成。然后将溶液于90℃加热使酶变性沉淀，抽滤，用732型阳离子交换树脂分离，用水和5％氨水洗脱。将水洗脱液减压蒸干，用甲醇溶解，放置析出N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸10.62克。将5％氨水洗脱液减压蒸干，用水-甲醇混合溶剂溶解，放置析出L-硒-甲基硒代半胱氨酸8.82克，光学纯度96.10％。

(3)N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸的水解：

将22.4克N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于200毫升(1+1)盐酸中，于60℃回流约6小时至N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸水解完全(薄层色谱检测)。减压蒸干溶剂，除去未反应的盐酸，得固体，用甲醇溶解。将甲醇溶液用氨水调pH约为10，再减压蒸干溶剂，得固体，用甲醇溶解，将不溶物滤掉，滤液放置，析出白色固体，用水-甲醇重结晶，得D-硒-甲基硒代半胱氨酸14.4克，产率79.12％。

实施例3：

(1)N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的制备：

取18.2克混旋硒-甲基硒代半胱氨酸置于带有冷凝回流管、温度计和搅拌器的250毫升三口烧瓶中，将10克NaOH溶于100毫升水中，冷却后加到烧瓶中，搅拌使硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶解，再缓慢滴加乙酸酐14毫升，控制反应温度在60℃。加完后再搅拌约20小时，用茚三酮检测至无氨基酸反应。用盐酸调节pH至1-2，然后用乙酸乙酯萃取，将有机相合并后减压蒸干溶剂，得固体，用甲醇溶解，过滤除去不溶物，将甲醇溶液放置，析出白色固体，甲醇重结晶，得混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸体21.20克，产率94.64％。

(2)混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的拆分：

将22.4克混旋N-乙酰-硒甲基硒代半胱氨酸溶于0.001mol/L氯化钴水溶液500毫升中，用(1+1)氨水调pH至7，加入猪肾酰化酶I(Aminoacylase I fromporcine kidney，EC Number：3.5.1.14，CAS Number：9012-37-7)0.224克，控制温度60℃，反应每隔1小时取样用HPLC测定溶液中L-硒-甲基硒代半胱氨酸含量，监控酶解进度，反应约1小时后完成。然后将溶液于90℃加热使酶变性沉淀，抽滤，用732型阳离子交换树脂分离，用水和5％氨水洗脱。将水洗脱液减压蒸干，用甲醇溶解，放置析出N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸16.94克。将5％氨水洗脱液减压蒸干，用水-甲醇混合溶剂溶解，放置析出L-硒-甲基硒代半胱氨酸3.62克，光学纯度96.72％。

(3)N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸的水解：

将22.4克N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于200毫升(1+1)盐酸中，于100℃回流约3小时至N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸水解完全(薄层色谱检测)。减压蒸干溶剂，除去未反应的盐酸，得固体，用甲醇溶解。将甲醇溶液用氨水调pH约为10，再减压蒸干溶剂，得固体，用甲醇溶解，将不溶物滤掉，滤液放置，析出白色固体，用水-甲醇重结晶，得D-硒-甲基硒代半胱氨酸14.09克，产率77.42％。

实施例4：

(1)N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的制备：

取18.2克混旋硒-甲基硒代半胱氨酸置于带有冷凝回流管、温度计和搅拌器的250毫升三口烧瓶中，将10克NaOH溶于100毫升水中，冷却后加到烧瓶中，搅拌使硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶解，再缓慢滴加乙酸酐14毫升，控制反应温度在30℃。加完后再搅拌约24小时，用茚三酮检测至无氨基酸反应。用硫酸调节pH至1-2，然后用乙酸乙酯萃取，将有机相合并后减压蒸干溶剂，得固体，用甲醇溶解，过滤除去不溶物，将甲醇溶液放置，析出白色固体，甲醇重结晶，得混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸体21.35克，产率95.31％。

(2)混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的拆分：

将2.24克混旋N-乙酰-硒甲基硒代半胱氨酸溶于0.001mol/L氯化钴水溶液1000毫升中，用(1+1)盐酸调pH至4，加入猪肾酰化酶I(Aminoacylase I fromporcine kidney，EC Number：3.5.1.14，CAS Number：9012-37-7)0.224克，控制温度为15℃，反应每隔1小时取样用HPLC测定溶液中L-硒-甲基硒代半胱氨酸含量，监控酶解进度，反应约40小时后完成。然后将溶液于90℃加热使酶变性沉淀，抽滤，用732型阳离子交换树脂分离，用水和5％氨水洗脱。将水洗脱液减压蒸干，用甲醇溶解，放置析出N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸1.68克。将5％氨水洗脱液减压蒸干，用水-甲醇混合溶剂溶解，放置析出L-硒-甲基硒代半胱氨酸0.35克，光学纯度95.88％。

(3)N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸的水解：

将22.4克N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于200毫升(1+1)盐酸中，于95℃回流3小时至N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸水解完全(薄层色谱检测)。减压蒸干溶剂，除去未反应的盐酸，得固体，用甲醇溶解。在甲醇溶液中通氨气至pH约为10，再减压蒸干溶剂，除去剩余氨气，得固体，用甲醇溶解，将不溶物滤掉，滤液放置，析出白色固体，用水-甲醇重结晶，得D-硒-甲基硒代半胱氨酸15.00克，产率82.42％。

实施例5：

(1)N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的制备：

取18.2克混旋硒-甲基硒代半胱氨酸置于带有冷凝回流管、温度计和搅拌器的250毫升三口烧瓶中，将10克NaOH溶于100毫升水中，冷却后加到烧瓶中，搅拌使硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶解，再缓慢滴加乙酸酐14毫升，控制反应温度在30℃。加完后再搅拌约24小时，用茚三酮检测至无氨基酸反应。用硫酸调节pH至1-2，然后用乙酸乙酯萃取，将有机相合并后减压蒸干溶剂，得固体，用甲醇溶解，过滤除去不溶物，将甲醇溶液放置，析出白色固体，甲醇重结晶，得混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸体21.35克，产率95.31％。

(2)混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的拆分：

将22.4克混旋N-乙酰-硒甲基硒代半胱氨酸溶于0.01mol/L氯化钴水溶液100毫升中，用(1+1)氨水调pH至10，加入猪肾酰化酶I(Aminoacylase I fromporcine kidney，EC Number：3.5.1.14，CAS Number：9012-37-7)0.0224克，控制温度为60℃，反应每隔1小时取样用HPLC测定溶液中L-硒-甲基硒代半胱氨酸含量，监控酶解进度，反应约1时后完成。然后将溶液于90℃加热使酶变性沉淀，抽滤，用732型阳离子交换树脂分离，用水和5％氨水洗脱。将水洗脱液减压蒸干，用甲醇溶解，放置析出N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸16.72克。将5％氨水洗脱液减压蒸干，用水-甲醇混合溶剂溶解，放置析出L-硒-甲基硒代半胱氨酸3.82克，光学纯度97.85％。

(3)N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸的水解：

将22.4克N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于200毫升(1+1)盐酸中，于95℃回流3小时至N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸水解完全(薄层色谱检测)。减压蒸干溶剂，除去未反应的盐酸，得固体，用甲醇溶解。在甲醇溶液中通氨气至pH约为10，再减压蒸干溶剂，除去剩余氨气，得固体，用甲醇溶解，将不溶物滤掉，滤液放置，析出白色固体，用水-甲醇重结晶，得D-硒-甲基硒代半胱氨酸15.00克，产率82.42％。

实施例6：

(1)N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的制备：

取18.2克混旋硒-甲基硒代半胱氨酸置于带有冷凝回流管、温度计和搅拌器的250毫升三口烧瓶中，将10克NaOH溶于100毫升水中，冷却后加到烧瓶中，搅拌使硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶解，再缓慢滴加乙酸酐14毫升，控制反应温度在30℃。加完后再搅拌约24小时，用茚三酮检测至无氨基酸反应。用盐酸调节pH至1-2，然后用乙酸乙酯萃取，将有机相合并后减压蒸干溶剂，得固体，用甲醇溶解，过滤除去不溶物，将甲醇溶液放置，析出白色固体，甲醇重结晶，得混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸体21.35克，产率95.31％。

(2)混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的拆分：

将2.24克混旋N-乙酰-硒甲基硒代半胱氨酸溶于0.01mol/L氯化钴水溶液1000毫升中，用(1+1)氨水调pH至7，加入猪肾酰化酶I(Aminoacylase I fromporcine kidney，EC Number：3.5.1.14，CAS Number：9012-37-7)0.0224克，控制温度为37℃，反应每隔1小时取样用HPLC测定溶液中L-硒-甲基硒代半胱氨酸含量，监控酶解进度，反应约1时后完成。然后将溶液于90℃加热使酶变性沉淀，抽滤，用732型阳离子交换树脂分离，用水和5％氨水洗脱。将水洗脱液减压蒸干，用甲醇溶解，放置析出N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸0.97克。将5％氨水洗脱液减压蒸干，用水-甲醇混合溶剂溶解，放置析出L-硒-甲基硒代半胱氨酸0.87克，光学纯度97.90％。

(3)N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸的水解：

将22.4克N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于200毫升(1+1)盐酸中，于95℃回流3小时至N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸水解完全(薄层色谱检测)。减压蒸干溶剂，除去未反应的盐酸，得固体，用甲醇溶解。在甲醇溶液中加入三乙胺至pH约为10，再减压蒸干溶剂，得固体，用甲醇溶解，将不溶物滤掉，滤液放置，析出白色固体，用水-甲醇重结晶，得D-硒-甲基硒代半胱氨酸15.00克，产率82.42％。

实施例7：

(1)N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的制备：

取18.2克混旋硒-甲基硒代半胱氨酸置于带有冷凝回流管、温度计和搅拌器的250毫升三口烧瓶中，将10克NaOH溶于100毫升水中，冷却后加到烧瓶中，搅拌使硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶解，再缓慢滴加乙酸酐14毫升，控制反应温度在30℃。加完后再搅拌约24小时，用茚三酮检测至无氨基酸反应。用盐酸调节pH至1-2，然后用乙酸乙酯萃取，将有机相合并后减压蒸干溶剂，得固体，用甲醇溶解，过滤除去不溶物，将甲醇溶液放置，析出白色固体，甲醇重结晶，得混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸体21.35克，产率95.31％。

(2)混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的拆分：

将22.4克混旋N-乙酰-硒甲基硒代半胱氨酸溶于0.001mol/L氯化钴水溶液500毫升中，用(1+1)氨水调pH至7，加入猪肾酰化酶I(Aminoacylase I fromporcine kidney，EC Number：3.5.1.14，CAS Number：9012-37-7)0.0224克，控制温度为37℃，反应每隔1小时取样用HPLC测定溶液中L-硒-甲基硒代半胱氨酸含量，监控酶解进度，反应约24小时后完成。然后将溶液于90℃加热使酶变性沉淀，抽滤，用732型阳离子交换树脂分离，用水和5％氨水洗脱。将水洗脱液减压蒸干，用甲醇溶解，放置析出N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸13.70克。将5％氨水洗脱液减压蒸干，用水-甲醇混合溶剂溶解，放置析出L-硒-甲基硒代半胱氨酸6.26克，光学纯度98.20％。

(3)N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸的水解：

将22.4克N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于200毫升(1+1)盐酸中，于95℃回流3小时至N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸水解完全(薄层色谱检测)。减压蒸干溶剂，除去未反应的盐酸，得固体，用甲醇溶解。在甲醇溶液中通氨气至pH约为10，再减压蒸干溶剂，除去剩余氨气，得固体，用甲醇溶解，将不溶物滤掉，滤液放置，析出白色固体，用水-甲醇重结晶，得D-硒-甲基硒代半胱氨酸15.00克，产率82.42％。

实施例8：

(1)N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的制备：

取18.2克混旋硒-甲基硒代半胱氨酸置于带有冷凝回流管、温度计和搅拌器的250毫升三口烧瓶中，将10克NaOH溶于100毫升水中，冷却后加到烧瓶中，搅拌使硒-甲基硒代半胱氨酸完全溶解，再缓慢滴加乙酸酐14毫升，控制反应温度在30℃。加完后再搅拌约24小时，用茚三酮检测至无氨基酸反应。用盐酸调节pH至1-2，然后用乙酸乙酯萃取，将有机相合并后减压蒸干溶剂，得固体，用甲醇溶解，过滤除去不溶物，将甲醇溶液放置，析出白色固体，甲醇重结晶，得混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸体21.35克，产率95.31％。

(2)混旋N-乙酰-硒-甲基硒代半胱氨酸的拆分：

将22.4克混旋N-乙酰-硒甲基硒代半胱氨酸溶于0.001mol/L氯化钴水溶液500毫升中，用(1+1)氨水调pH至7，加入猪肾酰化酶I(Aminoacylase I fromporcine kidney，EC Number：3.5.1.14，CAS Number：9012-37-7)2.24克，控制温度为15℃，反应每隔1小时取样用HPLC测定溶液中L-硒-甲基硒代半胱氨酸含量，监控酶解进度，反应约40小时后完成。然后将溶液于90℃加热使酶变性沉淀，抽滤，用732型阳离子交换树脂分离，用水和5％氨水洗脱。将水洗脱液减压蒸干，用甲醇溶解，放置析出N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸17.32克。将5％氨水洗脱液减压蒸干，用水-甲醇混合溶剂溶解，放置析出L-硒-甲基硒代半胱氨酸3.30克，光学纯度95.20％。

(3)N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸的水解：

将22.4克N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸溶于200毫升(1+1)盐酸中，于95℃回流3小时至N-乙酰-D-硒-甲基硒代半胱氨酸水解完全(薄层色谱检测)。减压蒸干溶剂，除去未反应的盐酸，得固体，用甲醇溶解。在甲醇溶液中通氨气至pH约为10，再减压蒸干溶剂，除去剩余氨气，得固体，用甲醇溶解，将不溶物滤掉，滤液放置，析出白色固体，用水-甲醇重结晶，得D-硒-甲基硒代半胱氨酸15.00克，产率82.42％。