一种基于非天然氨基酸修饰酶的多点固定化方法

摘要

本发明涉及一种基于非天然氨基酸修饰酶的多点固定化方法，使用非天然氨基酸对叠氮基‑L‑苯丙氨酸对醛酮还原酶进行修饰，同时使用环辛炔改性的氨基活化环氧树脂聚合物对酶进行固定化，而且将其作为固体化载体实现与非天然氨基酸修饰的醛酮还原酶进行多点共价连接，通过炔烃‑叠氮化物环加成反应，完成了酶的一步纯化和固定化。通过本发明方法制得的非天然氨基酸修饰的固定化醛酮还原酶在酶活上比游离酶有了很大的提高，并通过无铜点击反应，使醛酮还原酶省去传统繁琐的纯化方法，其中五点固定化可以实现60％的纯化效率。该方法安全可靠且环境污染少，很大程度节约了纯化所耗的时间和成本，适合于工业化生产。