一种利用美洲大蠊若虫期的蜕皮物质提取康复新原料药的方法

摘要

本发明属于康复新液制备技术领域，具体涉及一种利用美洲大蠊若虫期的蜕皮物质提取康复新原料药的方法。本发明包括如下步骤：（1）收集；(2)粉碎；(3)筛分；(4)浸泡；(5)提取；(6) 一级浓缩；(7)脱脂；(8)二级浓缩。本发明与现有技术相比具有明显的优点和有益效果。(1)采用本发明的方法，可以实现对美洲大蠊生长过程中废弃物利用，避免美洲大蠊原料药的浪费，提高了资源的利用率；(2)本发明所述的方法工艺简单，设备投入少，具有较高的经济效益和社会效益；(3)通过本发明，将本来被丢弃美洲大蠊废弃物用于生产康复新液，减少了美洲大蠊废弃物对环境的污染。

说明书

技术领域

本发明属于康复新液制备技术领域，具体涉及一种利用美洲大蠊若虫期的蜕皮物质提取康复新原料药的方法。

背景技术

蜚蠊的生长周期分成卵、若虫、成虫三个阶段，属不完全变态昆虫。大理学院何正春等报道蜚蠊主要化学成分主要有信息素、游离氨基酸和神经肽等，主要含有10多种氨基酸，其中7种人体必需氨基酸，2种人体半必需氨基酸。研究表明，美洲大蠊的乙醇提取物（康复新）中，含有多种氨基酸。混合氨基酸具有明显的抗炎作用，其中游离氨基酸为主要成分，占提取物的15%以上（以干燥品计）；还含有少量的多元醇类化合物，为促进肉芽增生的有效成分；以及粘糖氨酸（暂名），为调节机体免疫的物质，主要为一类分子量分布在300~1300Da的氨基酸和非氨基酸配基的结合物，其结合氨基酸约占康复新的10%（以干燥品计）。另外，还含有一定量的核苷嘧啶碱类，可以强心升压．改善微循环，兴奋呼吸，利尿，增加心、脑，肺，肾的血流量。

在一般情况下，雌雄蜚蠊成虫在羽化后一周左右性即成熟，可交配产卵，雄虫一生能交配数次，而雌虫一生只交配一次或二次，一次交配后可使它终身产出受精卵。一生可产卵鞘数不同，少至几个，多的达数十个，如美洲大蠊一生产卵鞘数约10-84个，卵在卵鞘中一般要经过一至二个月发育才能孵化出若虫。若虫经脱皮7-13次后羽化为成虫，若虫期的长短，雌雄不同也因种类而异，从30天到450天不等，如美洲大蠊若虫期约为一年，而德国小蠊为40-152天，大蠊一般要两年完成一个世代，而德国小蠊一年可繁殖4-5代。美洲大蠊若虫期的蜕皮折算成干虫1吨的量大约在300Kg，这些蜕皮大多数被丢弃，造成了资源的严重浪费。

发明内容

  本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种利用美洲大蠊若虫期的蜕皮物质提取康复新原料药的方法，本发明主要是通过如下技术方案来实现的：

一种利用美洲大蠊若虫期的蜕皮物质提取康复新原料药的方法，包括如下步骤：

(1)收集：将美洲大蠊若虫期的蜕皮物质及时收集并自然风干；

(2)粉碎：将上述风干蜕皮物质充分粉碎；

(3)筛分：将粉碎后的蜕皮物质通过24目筛网进行筛分，取筛下物制得美洲大蠊蜕皮物质粗粉；

(4)浸泡：将步骤(3)所得美洲大蠊蜕皮物质粗粉用浓度90%～95%的乙醇浸泡，使乙醇液面高出粗粉液面5～10cm密闭保存，制得粗粉混合液；

(5)提取：将步骤(4)所得粗粉混合液在75～80℃的温度下进行3次回流提取，对粗粉混合液进行第1次提取时，加粗粉5倍量浓度90%～95%的乙醇，提取时间为5小时；对粗粉混合液进行第2-3次提取时，每次提取加粗粉4倍量浓度90%～95%的乙醇，提取时间为4小时，合并四3次提取液，过滤取滤液即得乙醇提取液;

 (6) 一级浓缩：将步骤(5)所得乙醇提取液在真空度-0.05～-0.06MPa、温度50～60℃的条件下减压浓缩，至比重为1.05～1.15时，得乙醇浓缩液；

(7) 脱脂：将步骤(6)所得乙醇浓缩液加入乙醇浓缩液重量8倍量的纯化水，边搅拌边升温至85～95℃后，搅拌40分钟，搅拌速度为40转/分，然后保温静置4小时使油水分层;

(8) 二级浓缩：将步骤(7)所得下层水液放出，经滤纸过滤后，滤液在温度60～80℃、真空度-0.05～-0.06MPa条件下减压浓缩，浓缩至比重为1.25～1.35时，得美洲大蠊蜕皮物质的乙醇提取物。

步骤（4）中浸泡用的乙醇和步骤（5）中3次回流提取时所加入的乙醇均为浓度为92%的乙醇。

步骤（6）中所述的乙醇提取液在减压浓缩至比重为1.08时得乙醇浓缩液，步骤（8）中所述的滤液在减压浓缩至比重为1.28时得美洲大蠊蜕皮物质的乙醇提取物。

步骤（6）中所述的真空度为-0.055 MPa，温度为55℃；步骤（8）中所述的真空度为-0.055 MPa，温度为70℃。

本发明与现有技术相比具有明显的优点和有益效果。(1)采用本发明的方法，可以实现对美洲大蠊生长过程中废弃物利用，避免美洲大蠊原料药的浪费，提高了资源的利用率；(2)本发明所述的方法工艺简单，设备投入少，具有较高的经济效益和社会效益；(3)通过本发明，将本来被丢弃美洲大蠊废弃物用于生产康复新液，减少了美洲大蠊废弃物对环境的污染。

附图说明

图1为本发明的流程图；

图2为美洲大蠊干燥虫体乙醇提取物HPLC分析图；

图3为美洲大蠊若虫期的脱皮物质乙醇提取物HPLC分析图。

具体实施方式

下列实施例用于进一步说明本发明，但本发明的保护范围不受实施例所限制。

实施例1

一种利用美洲大蠊若虫期的蜕皮物质提取康复新原料药的方法，包括如下步骤：

(1)收集：将美洲大蠊若虫期的蜕皮物质及时收集并自然风干；

(2)粉碎：将上述风干蜕皮物质充分粉碎；

（3）筛分：将粉碎后的蜕皮物质通过24目筛网进行筛分，取筛下物制得美洲大蠊蜕皮物质粗粉；

(4)浸泡：将步骤(3)所得美洲大蠊蜕皮物质粗粉用浓度90%的乙醇浸泡，使乙醇液面高出粗粉液面5～10cm密闭保存，制得粗粉混合液；

(5)提取：将步骤(4)所得粗粉混合液在75～80℃的温度下进行3次回流提取，对粗粉混合液进行第1次提取时，加粗粉5倍量浓度90%的乙醇，提取时间为5小时；对粗粉混合液进行第2-3次提取时，每次提取加粗粉4倍量浓度90%的乙醇，提取时间为4小时，合并3次提取液，过滤取滤液即得乙醇提取液。

 (6) 一级浓缩：将步骤(5)所得乙醇提取液在真空度-0.05MPa、温度60℃的条件下减压浓缩，至比重为1.05时，得乙醇浓缩液；

(7) 脱脂：将步骤(6)所得乙醇浓缩液加入乙醇浓缩液重量8倍量的纯化水，边搅拌边升温至85～95℃后，搅拌40分钟，搅拌速度为40转/分，然后保温静置4小时使油水分层。

(8) 二级浓缩：将步骤(7)所得下层水液放出，经滤纸过滤后，滤液在温度60℃、真空度-0.06MPa条件下减压浓缩，浓缩至比重为1.25时，得美洲大蠊蜕皮物质的乙醇提取物。

对比实验：

采用HPLC(高效液相色谱法)进行分析测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1%三氟乙酸水溶液为流动相A；乙腈为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长分别采用了215 nm、254nm和280nm。柱温：30℃；流速：1.0ml/min。

对照品溶液的制备：取同一样品的美洲大蠊干燥虫体乙醇提取浸膏对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含提取物50mg对照溶液，滤过，取续滤液，即得。

供试品溶液的制备：取本实施例步骤（8）所得的美洲大蠊蜕皮物质的乙醇提取物，按对照品溶液的制备方法进行，滤过，取续滤液，即得。

测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3μl，注入液相色谱仪，测定，即得图2和图3。

对比图2和图3可知，采用同种提取方式对美洲大蠊若虫期的蜕皮物质和成虫干燥虫体进行充分提取后所得到的浸膏经HPLC分析得到主要成分几乎一致。由此可知，美洲大蠊若虫期的蜕皮物质的可以用于提取康复新液原料药。

  实施例2

一种利用美洲大蠊若虫期的蜕皮物质提取康复新原料药的方法，包括如下步骤：

(1)收集：将美洲大蠊若虫期的蜕皮物质及时收集并自然风干；

(2)粉碎：将上述风干蜕皮物质充分粉碎；

（3）筛分：将粉碎后的蜕皮物质通过24目筛网进行筛分，取筛下物制得美洲大蠊蜕皮物质粗粉；

(4)浸泡：将步骤(3)所得美洲大蠊蜕皮物质粗粉用浓度92%的乙醇浸泡，使乙醇液面高出粗粉液面5～10cm密闭保存，制得粗粉混合液；

(5)提取：将步骤(4)所得粗粉混合液在75～80℃的温度下进行3次回流提取，对粗粉混合液进行第1次提取时，加粗粉5倍量浓度 92%的乙醇，提取时间为5小时；对粗粉混合液进行第2-3次提取时，每次提取加粗粉4倍量浓度92%的乙醇，提取时间为4小时，合并3次提取液，过滤取滤液即得乙醇提取液。

 (6) 一级浓缩：将步骤(5)所得乙醇提取液在真空度-0.055MPa、温度55℃的条件下减压浓缩，至比重为1.08时，得乙醇浓缩液；

(7) 脱脂：将步骤(6)所得乙醇浓缩液加入乙醇浓缩液重量8倍量的纯化水，边搅拌边升温至85～95℃后，搅拌40分钟，搅拌速度为40转/分，然后保温静置4小时使油水分层。

(8) 二级浓缩：将步骤(7)所得下层水液放出，经滤纸过滤后，滤液在温度70℃、真空度-0.055MPa条件下减压浓缩，浓缩至比重为1.28时，得美洲大蠊蜕皮物质的乙醇提取物。

对比实验：

采用HPLC(高效液相色谱法)进行分析测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1%三氟乙酸水溶液为流动相A；乙腈为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长分别采用了215 nm、254nm和280nm。柱温：30℃；流速：1.0ml/min。

对照品溶液的制备：取同一样品的美洲大蠊干燥虫体乙醇提取浸膏对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含提取物50mg对照溶液，滤过，取续滤液，即得。

供试品溶液的制备：取本实施例步骤（8）所得的美洲大蠊蜕皮物质的乙醇提取物，按对照品溶液的制备方法进行，滤过，取续滤液，即得。

测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3μl，注入液相色谱仪，测定，即得图2和图3。

对比图2和图3可知，采用同种提取方式对美洲大蠊若虫期的蜕皮物质和成虫干燥虫体进行充分提取后所得到的浸膏经HPLC分析得到主要成分几乎一致。由此可知，美洲大蠊若虫期的蜕皮物质的可以用于提取康复新液原料药。

实施例3

一种利用美洲大蠊若虫期的蜕皮物质提取康复新原料药的方法，包括如下步骤：

(1)收集：将美洲大蠊若虫期的蜕皮物质及时收集并自然风干；

(2)粉碎：将上述风干蜕皮物质充分粉碎；

（3）筛分：将粉碎后的蜕皮物质通过24目筛网进行筛分，取筛下物制得美洲大蠊蜕皮物质粗粉；

(4)浸泡：将步骤(3)所得美洲大蠊蜕皮物质粗粉用浓度95%的乙醇浸泡，使乙醇液面高出粗粉液面5～10cm密闭保存，制得粗粉混合液；

(5)提取：将步骤(4)所得粗粉混合液在75～80℃的温度下进行3次回流提取，对粗粉混合液进行第1次提取时，加粗粉5倍量浓度 95%的乙醇，提取时间为5小时；对粗粉混合液进行第2-3次提取时，每次提取加粗粉4倍量浓度95%的乙醇，提取时间为4小时，合并3次提取液，过滤取滤液即得乙醇提取液。

 (6) 一级浓缩：将步骤(5)所得乙醇提取液在真空度-0.06MPa、温度50℃的条件下减压浓缩，至比重为1.15时，得乙醇浓缩液；

(7) 脱脂：将步骤(6)所得乙醇浓缩液加入乙醇浓缩液重量8倍量的纯化水，边搅拌边升温至85～95℃后，搅拌40分钟，搅拌速度为40转/分，然后保温静置4小时使油水分层。

(8) 二级浓缩：将步骤(7)所得下层水液放出，经滤纸过滤后，滤液在温度80℃、真空度-0.05MPa条件下减压浓缩，浓缩至比重为1.35时，得美洲大蠊蜕皮物质的乙醇提取物。

对比实验：

采用HPLC(高效液相色谱法)进行分析测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1%三氟乙酸水溶液为流动相A；乙腈为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长分别采用了215 nm、254nm和280nm。柱温：30℃；流速：1.0ml/min。

对照品溶液的制备：取同一样品的美洲大蠊干燥虫体乙醇提取浸膏对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含提取物50mg对照溶液，滤过，取续滤液，即得。

供试品溶液的制备：取本实施例步骤（8）所得的美洲大蠊蜕皮物质的乙醇提取物，按对照品溶液的制备方法进行，滤过，取续滤液，即得。

测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各3μl，注入液相色谱仪，测定，即得图2和图3。

对比图2和图3可知，采用同种提取方式对美洲大蠊若虫期的蜕皮物质和成虫干燥虫体进行充分提取后所得到的浸膏经HPLC分析得到主要成分几乎一致，由此可知，美洲大蠊若虫期的蜕皮物质的可以用于提取康复新液原料药。