面粉及面粉改良剂中次磷酸盐的检测方法

摘要

本发明公开了一种面粉及面粉改良剂中次磷酸盐的检测方法，采用超高效液相色谱串联质谱测定，包括如下步骤：(1)次磷酸盐标准溶液的配制；(2)供试品溶液的制备；(3)测定，精密吸取标准品溶液注入超高效液相色谱串联质谱仪进行测定，根据测试结果绘制标准曲线；精密吸取供试品溶液注入超高效液相色谱串联质谱仪进行测定，即得。本发明采用超高效液相色谱串联质谱分析仪检测面粉及面粉改良剂中的无机盐(次磷酸盐)，该检测方法前处理简单，准确度高，非常适合面粉及面粉改良剂中次磷酸盐的批量检测。

说明书

技术领域

本发明涉及分析检测技术领域，特别是涉及一种面粉及面粉改良剂中次磷酸盐的检测方法。 

背景技术

我国是世界上最大的小麦生产国,由小麦加工而成的面粉是人类最主要的食物之一,面粉是面制品加工的最重要原料,其品质的好坏直接影响到面制品的质量。随着我国食品工业的迅速发展和人民生活水平的提高,烘烤业等对其基础原料面粉提出了更高的要求,通用面粉已不能满足人们的生活需要,专用粉在市场上的占有率正在大幅度上升。在面粉中添加适当的改良剂在现代专用面粉配制以及面制品的生产过程中起着极其重要的作用。面粉改良剂是一些化学合成或天然食品添加剂。面粉改良剂可以改善面团的烘焙性能,使面团的流变学特性和酶活性平衡适中。面粉改良剂的现状目前,我国已经开始应用许多品种的面粉改良剂,其中包括面粉强筋剂、增白剂、增稠剂、弱筋剂以及发酵促进剂等。 

我国关于食品添加剂的安全卫生标准有GB2760-2011《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》。该标准提出了可用于食品生产的添加剂，并规定其限量值。次磷酸钠等次磷酸盐并未列入该标准中，次磷酸钠是无色单斜晶系结晶或白色结晶粉末，易溶于水和乙醇。市场上销售的次磷酸盐以次磷酸钠及次磷酸钙为主。我国关于次磷酸钠的标准有HG/T3253-2009《工业次磷酸钠》，标准提供了次磷酸钠的理化测定方法。我国目前还没有食品中次磷酸盐的测定方法，为了督促面粉生产和加工企业依法生产，确保人民群众健康安全，急需开发出面粉及面粉改良剂中次磷酸盐的含量的测定方法。 

发明内容

基于此，本发明的目的是提供一种面粉及面粉改良剂中次磷酸盐的检测方法。 

具体的技术方案如下： 

一种面粉及面粉改良剂中次磷酸盐的检测方法，采用超高效液相色谱串联质谱测定，包括如下步骤： 

(1)次磷酸盐标准溶液的配制 

精密称取次磷酸盐标准品，配制成一定浓度梯度的标准溶液； 

(2)供试品溶液的制备 

取面粉或面粉改良剂样品加入体积浓度为70-80％的乙醇水溶液，超声萃取，离心后取上清液，用微孔滤膜过滤后得供试品溶液； 

(3)测定 

精密吸取标准品溶液注入超高效液相色谱串联质谱仪进行测定，根据测试结果绘制标准曲线； 

精密吸取供试品溶液注入超高效液相色谱串联质谱仪进行测定，即得； 

其中色谱条件为：色谱柱为SynergiMAX-RP；柱温为室温；流动相为体积比14-16:84-86的乙腈：10mmol/L乙酸铵溶液，流速为0.5-1ml/min，进行等度洗脱； 

质谱条件为：离子源为电喷雾离子源；扫描方式为负离子扫描；毛细管电压为0.4-0.5KV；锥孔电压为28-32v；离子源温度为148-152℃；去溶剂温度为495-505℃；去溶剂气为流速790-810L/h的氮气；锥孔气为流速48-52L/h的氮气；碰撞气为流速0.18-0.22ml/min的氩气；检测模式为多反应检测模式；监测离子为m/z64.8/62.8。 

在其中一个实施例中，所述流动相为体积比15:85的乙腈：10mmol/L乙酸铵溶液，流速为0.5ml/min，进行等度洗脱。 

在其中一个实施例中，所述质谱条件为：离子源为电喷雾离子源；扫描方式为负离子扫描；毛细管电压为0.5KV；锥孔电压为30v；离子源温度为150℃；去溶剂温度为500℃；去溶剂气为流速800L/h的氮气；锥孔气为流速50L/h的 氮气；碰撞气为流速0.2ml/min的氩气；检测模式为多反应检测模式；监测离子为m/z64.8/62.8。 

在其中一个实施例中，所述面粉改良剂为复配小麦粉面粉处理剂、复配酶制剂或面包改良剂。 

在其中一个实施例中，步骤(2)中超声萃取的时间为20-30min，离心的转速为800-1200r/min，微孔滤膜的滤芯尺寸为0.22μm。 

本发明的优点如下： 

本发明采用超高效液相色谱串联质谱分析仪检测面粉及面粉改良剂中的无机盐(次磷酸盐)，该检测方法前处理简单，准确度高，非常适合面粉及面粉改良剂中次磷酸盐的批量检测。本发明的检测方法对次磷酸盐的检测限(S/N＝3)为10mg/kg。针对不同面粉及面粉改良剂不同添加浓度进行6次平行实验，平均回收率在82％～114％之间，相对标准偏差在3.7％～10.3％之间。 

本发明的检测方法填补了目前在面粉及面粉改良剂中次磷酸盐含量检测方法的空白。为食品质量控制，食品安全监测提供重要技术支持。具有良好的经济与社会效益。 

附图说明

图1为次磷酸盐浓度为0.5mg/L的标准溶液的超高效液相色谱串联质谱图； 

图2为次磷酸盐浓度－峰面积标准曲线图； 

图3为阴性小麦粉样品的超高效液相色谱串联质谱图； 

图4为添加次磷酸盐浓度10mg/kg的阴性小麦粉样品的超高效液相色谱串联质谱图； 

图5为阴性高筋面粉样品超高效液相色谱串联质谱图； 

图6为添加次磷酸盐浓度10mg/kg的阴性高筋面粉样品超高效液相色谱串联质谱图； 

图7为阴性面包粉样品超高效液相色谱串联质谱图； 

图8为添加次磷酸盐浓度10mg/kg的阴性面包粉样品超高效液相色谱串联质谱图； 

图9为阴性复配小麦粉面粉处理剂样品超高效液相色谱串联质谱图； 

图10为添加次磷酸盐浓度10mg/kg的复配小麦粉面粉处理剂样品超高效液相色谱串联质谱图； 

图11为复配酶制剂样品超高效液相色谱串联质谱图； 

图12为添加次磷酸盐浓度10mg/kg的复配酶制剂样品超高效液相色谱串联质谱图； 

图13为面包改良剂样品超高效液相色谱串联质谱图； 

图14为添加次磷酸盐浓度10mg/kg的面包改良剂样品超高效液相色谱串联质谱图。 

具体实施方式

以下结合附图及具体实施例对本发明的检测方法作进一步详细的说明。 

本发明一种面粉及面粉改良剂中次磷酸盐的检测方法，采用超高效液相色谱串联质谱测定，包括如下步骤： 

(1)次磷酸盐标准溶液的配制 

精密称取次磷酸盐标准品，配制成一定浓度梯度的标准溶液； 

(2)供试品溶液的制备 

取面粉或面粉改良剂样品加入体积浓度为70-80％(优选为75％)的乙醇水溶液，超声萃取(常温下萃取20-30min)，离心(800-1200r/min离心3-5min)后取上清液，用微孔滤膜(滤芯尺寸为0.22μm)过滤后得供试品溶液； 

(3)测定 

精密吸取标准品溶液注入超高效液相色谱串联质谱仪进行测定，根据测试结果绘制标准曲线； 

精密吸取供试品溶液注入超高效液相色谱串联质谱仪进行测定，即得； 

其中色谱条件为：色谱柱为SynergiMAX-RP；柱温为室温；流动相为体积 比14-16:84-86(优选为15:85)的乙腈：10mmol/L乙酸铵溶液，流速为0.5-1ml/min，进行等度洗脱； 

质谱条件为：离子源为电喷雾离子源；扫描方式为负离子扫描；毛细管电压为0.4-0.5(优选0.5)KV；锥孔电压为28-32(优选为30)v；离子源温度为148-152(优选为150)℃；去溶剂温度为495-505(优选为500)℃；去溶剂气为流速790-810(优选为800)L/h的氮气；锥孔气为流速48-52(优选为50)L/h的氮气；碰撞气为流速0.18-0.22(优选为0.2)ml/min的氩气；检测模式为多反应检测模式；监测离子为m/z64.8/62.8。 

本发明的检测方法的检出限为10mg/kg，平均回收率为82-114％，相对标准偏差为3.7-10.3％。 

所述面粉改良剂选自但不限于复配小麦粉面粉处理剂、复配酶制剂或面包改良剂。 

以下为具体实施例部分： 

实施例1 次磷酸根标准品的测定 

一、次磷酸盐标准溶液的配制：精密称取次磷酸钠标准品100mg于10mL容量瓶中，用水定容到刻度，摇匀，配制成浓度为10.0mg/mL次磷酸盐标准品溶液，4℃避光保存。 

二、色谱质谱条件 

1)色谱条件 

色谱柱：SynergiMAX-RP4u250×4.6mm，或相当者； 

柱温：室温； 

流动相：乙腈：10mmoL/L乙酸铵溶液＝15：85(V/V)； 

流速：0.5mL/min，进行等度洗脱； 

2)质谱条件 

离子源：电喷雾离子源(ESI)； 

扫描方式：负离子扫描； 

毛细管电压：0.5kV； 

锥孔电压：30V； 

离子源温度：150℃； 

去溶剂温度：500℃； 

去溶剂气：氮气，800L/h； 

锥孔气：氮气，50L/h； 

碰撞气：氩气，0.2mL/min； 

检测模式：采用多反应监测(MRM)模式；监测离子为m/z64.8/62.8。 

三、次磷酸盐标准品色谱图的建立 

精密吸取次磷酸盐标准品溶液10μL注入液相色谱仪，按照超高效液相色谱串联质谱法测定，得到超高效液相色谱串联质谱图，如附图1所示。 

四、绘制标准曲线 

取次磷酸盐标准品溶液配制浓度分别为0mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、2.0mg/mL的溶液，浓度由低到高依次进行超高效液相色谱串联质谱检测，以次磷酸盐超高效液相色谱串联质谱峰面积为横坐标，以次磷酸盐浓度为纵坐标，绘制标准曲线，如附图2所示。 

使用Excel软件绘制标准曲线，获得R²值。次磷酸盐浓度在0～2.0mg/mL范围内，浓度与其对应的峰面积值呈良好线性关系，相关系数R²＝0.9997。所得的线性方程为y＝12830x-74.565。 

实施例2 阴性小麦粉中次磷酸盐含量的测定 

一.供试品溶液的制备 

取小麦粉样品1g，加入20mL75％(V/V)乙醇水溶液(乙醇：水＝3:1)，20℃下超声萃取20min，在1000r/min转速下离心3min，取1mL上清液用微孔滤膜过滤，滤液供超高效液相色谱串联质谱仪测试。 

二.色谱条件 

同实施例1。 

三.绘制标准曲线 

采用实施例1的标准曲线。 

四.测定 

精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按照超高效液相色谱串联质谱法测定，得到超高效液相色谱串联质谱图，如附图3所示。因为色谱峰的信号/噪音比小于3，该小麦粉中未检测到次磷酸盐。 

实施例3 添加次磷酸盐浓度10mg/kg的阴性小麦粉含量的测定 

一.供试品溶液的制备 

取实施例2的阴性小麦粉样品1.0g，加入浓度为100mg/L的次磷酸钠标准溶液100μL，再加入20mL75％(V/V)乙醇水溶液(乙醇：水＝3:1)，涡旋混匀。20℃下超声萃取20min，在1000r/min转速下离心3min，取1mL上清液用微孔滤膜过滤，滤液供超高效液相色谱串联质谱仪测试。 

二.色谱条件、标准曲线 

同实施例1。 

三.测定 

精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按照超高效液相色谱串联质谱法测定，得到次磷酸盐色谱图如附图4所示。次磷酸盐的色谱峰面积为6250.625毫伏×秒，从标准曲线查得供试样品溶液液中次磷酸盐的含量为0.493mg/kg。因为1mL供试溶液相当于0.050g样品，所以该样品中次磷酸盐的含量为9.86mg/kg。 

实施例4 阴性高筋面粉样品中次磷酸盐含量的测定 

一.供试品溶液的制备 

同实施例2。 

二.色谱条件、标准曲线 

同实施例1。 

三.测定 

精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按照超高效液相色谱串联质谱法测定，得到超高效液相色谱串联质谱图，如附图5所示。因为色谱峰的信号/噪音比小于3，该小麦粉中未检测到次磷酸盐。 

实施例5 添加次磷酸盐浓度10mg/kg的高筋面粉样品中次磷酸盐含量的测定 

一.供试品溶液的制备 

取实施例4的阴性高筋面粉样品1.0g，加入浓度为100mg/L的次磷酸钠标准溶液100μL，再加入20mL75％(V/V)乙醇水溶液(乙醇：水＝3:1)，涡旋混匀。20℃下超声萃取20min，在1000r/min转速下离心3min，取1mL上清液用微孔滤膜过滤，滤液供超高效液相色谱串联质谱仪测试。 

二.色谱条件、标准曲线 

同实施例1。 

三.测定 

精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按照超高效液相色谱串联质谱法测定，得到次磷酸盐色谱图如附图6所示。次磷酸盐的色谱峰面积为5557.805毫伏×秒，从标准曲线查得供试样品溶液液中次磷酸盐的含量为0.439mg/kg。因为1mL供试溶液相当于0.050g样品，所以该样品中次磷酸盐的含量为8.77mg/kg。 

实施例6 阴性面包粉样品次磷酸盐含量的测定 

一.供试品溶液的制备 

取面包粉样品1g，加入20mL75％(V/V)乙醇水溶液(乙醇：水＝3:1)，20℃下超声萃取20min，在1000r/min转速下离心3min，取1mL上清液用微孔滤膜过滤，滤液供超高效液相色谱串联质谱串联质谱仪测试。 

二.色谱条件、标准曲线 

同实施例1。 

三.测定 

精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按照超高效液相色谱串联质谱法测定，得到超高效液相色谱串联质谱图，如附图7所示。因为未检测到次磷酸盐的色谱峰的信号，该小麦粉中未检测到次磷酸盐。 

实施例7 添加次磷酸盐浓度10mg/kg的阴性面包粉样品次磷酸盐含量的测定 

一.供试品溶液的制备 

取实施例6的阴性高筋面粉样品1.0g，加入浓度为100mg/L的次磷酸钠标准溶液100μL，再加入20mL75％(V/V)乙醇水溶液(乙醇：水＝3:1)，涡旋混匀。20℃下超声萃取20min，在1000r/min转速下离心3min，取1mL上清液用微孔滤膜过滤，滤液供超高效液相色谱串联质谱仪测试。 

二.色谱条件、标准曲线 

同实施例1。 

三.测定 

精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按照超高效液相色谱串联质谱法测定，得到次磷酸盐色谱图如附图8所示。次磷酸盐的色谱峰面积为6122.325毫伏×秒，从标准曲线查得供试样品溶液液中次磷酸盐的含量为0.483mg/kg。因为1mL供试溶液相当于0.050g样品，所以该样品中次磷酸盐的含量为9.66mg/kg。 

实施例8 阴性复配小麦粉面粉处理剂中次磷酸盐含量的测定 

一.供试品溶液的制备 

称取复配小麦粉面粉处理剂样品1g，加入20mL75％(V/V)乙醇水溶液(乙醇：水＝3:1)，20℃下超声萃取20min，在1000r/min转速下离心3min，取1mL上清液用微孔滤膜过滤，滤液供超高效液相色谱串联质谱仪测试。 

二.色谱条件、标准曲线 

同实施例1。 

三.测定 

精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按照超高效液相色谱串联质谱法测定，得到超高效液相色谱串联质谱图，如附图9所示。因为未检测到次磷酸根的信号，所以该复配小麦粉面粉处理剂中未检测到次磷酸盐。 

实施例9 添加次磷酸盐浓度10mg/kg的阴性复配小麦粉面粉处理剂中次磷酸盐含量的测定 

一.供试品溶液的制备 

称取实施例8的阴性复配小麦粉面粉处理剂样品1.0g，加入浓度为100mg/L的次磷酸钠标准溶液100μL，再加入20mL75％(V/V)乙醇水溶液(乙醇：水＝3:1)，涡旋混匀。20℃下超声萃取20min，在1000r/min转速下离心3min，取1mL上清液用微孔滤膜过滤，滤液供超高效液相色谱串联质谱仪测试。 

二.色谱条件、标准曲线 

同实施例1。 

三.测定 

精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按照超高效液相色谱串联质谱法测定，得到次磷酸盐色谱图如附图10所示。次磷酸盐的色谱峰面积为5365.355毫伏×秒，从标准曲线查得供试样品溶液液中次磷酸盐的含量为0.424mg/kg。因为1mL供试溶液相当于0.050g样品，所以该样品中次磷酸盐的含量为8.47mg/kg。 

实施例10 阴性复配酶制剂样品中次磷酸盐含量的测定 

一.供试品溶液的制备 

称取复配复配酶制剂样品1g，加入20mL75％(V/V)乙醇水溶液(乙醇：水＝3:1)，20℃下超声萃取20min，在1000r/min转速下离心3min，取1mL上清液用微孔滤膜过滤，滤液供超高效液相色谱串联质谱仪测试。 

二.色谱条件、标准曲线 

同实施例1。 

三.测定 

精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按照超高效液相色谱串联质谱法测定，得到超高效液相色谱串联质谱图，如附图11所示。因为未检测到次磷酸根的信号，所以该小麦粉中未检测到次磷酸盐。 

实施例11 添加次磷酸盐浓度10mg/kg的复配酶制剂样品中次磷酸盐含量的测定 

一.供试品溶液的制备 

称取实施例10的阴性复配酶制剂样品1.0g，加入浓度为100mg/L的次磷酸钠标准溶液100μL，再加入20mL75％(V/V)乙醇水溶液(乙醇：水＝3:1)，涡旋混匀。20℃下超声萃取20min，在1000r/min转速下离心3min，取1mL上清液用微孔滤膜过滤，滤液供超高效液相色谱串联质谱仪测试。 

二.色谱条件、标准曲线 

同实施例1。 

三.测定 

精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按照超高效液相色谱串联质谱法测定，得到次磷酸盐色谱图如附图12所示。次磷酸盐的色谱峰面积为6545.715毫伏×秒，从标准曲线查得供试样品溶液液中次磷酸盐的含量为0.516mg/kg。因为1mL供试溶液相当于0.050g样品，所以该样品中次磷酸盐的含量为10.32mg/kg。 

实施例12 阴性面包改良剂样品中次磷酸盐含量的测定 

一.供试品溶液的制备 

称取面包改良剂样品1g，加入20mL75％(V/V)乙醇水溶液(乙醇：水＝3:1)，20℃下超声萃取20min，在1000r/min转速下离心3min，取1mL上清液用微孔滤膜过滤，滤液供超高效液相色谱串联质谱仪测试。 

二.色谱条件、标准曲线 

同实施例1。 

三.测定 

精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按照超高效液相色谱串联质谱法测定，得到超高效液相色谱串联质谱图，如附图13所示。因为未检测到次磷酸根的信号，所以该面包改良剂中未检测到次磷酸盐。 

实施例13 添加次磷酸盐浓度10mg/kg的面包改良剂样品次磷酸盐含量的测定 

一.供试品溶液的制备 

称取实施例12的阴性面包改良剂样品1.0g，加入浓度为100mg/L的次磷酸钠标准溶液100μL，再加入20mL75％(V/V)乙醇水溶液(乙醇：水＝3:1)，涡旋混匀。20℃下超声萃取20min，在1000r/min转速下离心3min，取1mL上清液用微孔滤膜过滤，滤液供超高效液相色谱串联质谱仪测试。 

二.色谱条件、标准曲线 

同实施例1。 

三.测定 

精密吸取供试品溶液10μL注入液相色谱仪，按照超高效液相色谱串联质谱法测定，得到次磷酸盐色谱图如附图14所示。次磷酸盐的色谱峰面积为7238.575毫伏×秒，从标准曲线查得供试样品溶液液中次磷酸盐的含量为0.570mg/kg。因为1mL供试溶液相当于0.050g样品，所以该样品中次磷酸盐的含量为11.4mg/kg。 

实施例14 回收率和精密度试验 

根据本发明方法的检测限，对实施例2小麦粉、实施例4高筋面粉、实施例6面包粉、实施例8小麦粉面粉处理剂和实施例10复配酶制剂和实施例12面包改良剂，每个添加浓度为10mg/kg的次磷酸盐标准品进行4次实验。结果平均回收率和精密度结果见于表1。 

表1次磷酸盐在五种食品中的平均添加回收率和相对标准偏差 

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。