一氧化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精或其衍生物包合物及其制备方法和用途

摘要

本发明提供一种一氧化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精或其衍生物包合物及其制备方法。所述一氧化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精或其衍生物包合物含有一氧化氮供体型非甾体抗炎药和β-环糊精或β-环糊精衍生物，一氧化氮供体型非甾体抗炎药与β-环糊精或β-环糊精衍生物的摩尔比为1：1～1:25。所述包合物的生物利用度高，稳定性好。本发明提供的包合物的制备方法实现了包合物与未包合原料药的完全分离，未包合原料药可实现完全回收，降低了成本。优选的制备方法包合率可达70%以上。

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种一氧化氮供体型非甾体抗炎 药β-环糊精或其衍生物包合物及其制备方法和用途。

背景技术

自从1903年S.Dentin首次从发酵液中成功得到β-环糊精（β-CD）以 来，研究人员在环糊精的制备、性质和应用等方面取得了巨大进展，特别 是近二、三十年，环糊精及其衍生物在制药工业中的应用备受瞩目。药物 环糊精包合物在提高药物溶解性、溶出速度、生物利用度等方面日益显示 出独特的性质和应用价值。近年来，环糊精包合技术已成为制药工业中增 强药物生物利用度的有效手段，国外已有众多药物环糊精包合物制剂成功 上市。

β-环糊精（β-CD）是最早被多个国家收入药典的口服药用辅料，其药 物包合物制剂如：前列腺素β-CD包合物，吡罗昔康β-CD包合物等已在日 本和欧洲成功上市。通过结构优化的β-CD衍生物，在增强药物水溶性、缓 控释、靶向、透皮和粘膜给药系统中也得到了广泛的应用，并已成为药物 辅料研究的新热点。其中磺丁基醚-β-环糊精（SBE-β-CD）和羟丙基-β-环糊 精（HP-β-CD）是较为重要的β-CD衍生物，二者均具有水溶性大 (>50g/100ml)、肾毒性低、溶血作用小、安全性高等特点，被认为是理想的 注射用辅料。

一氧化氮供体型非甾体抗炎药是非甾体抗炎药发展的新方向，这类药 物具有经典非甾体抗炎药与NO供体结构。这类药物通过对环氧酶（COX） 具有抑制作用而起效，同时在胃部粘膜释放低浓度的NO，低浓度的NO起 到保护消化道黏膜，增加消化道黏膜毛细血管血流量，促进粘膜受损部位 损伤修复的作用，从而降低传统非甾体抗炎药抑制对环氧酶（COX）对消 化道产生的损伤。

目前，处于临床前和临床研究阶段的一氧化氮供体型非甾体抗炎药较 多，这些药物分子中多包括了NO供体结构（硝酸酯结构和呋咱氮氧化物 结构等）见图1和图2。由于这些极性较小的NO供体结构的存在，此类药 物分子的水溶性差，生物利用度低，部分药物原料成油状，较难实现稳定 的制剂生产，如已完成三期临床研究的萘普西诺（Naproxcinod）。

萘普西诺（Naproxcinod），化学名称为：(S)-2-(6-甲氧基-2-萘基)丙酸-4- 硝基氧丁基酯，系法国NicOx公司开发的新型非甾体抗炎药，为第一种环 氧合酶抑制性一氧化氮供体(CINODs)的新型的骨关节炎缓解药物。萘普西 诺的化学结构包括丁基硝酸酯结构，与传统药物比较，其作用机制独特， 通过对环氧酶（COX）具有抑制作用而起效，同时在胃部粘膜释放低浓度 的NO，起到保护胃肠粘膜的作用。萘普西诺无胃肠道不良反应和心血管方 面的副作用，因此，该药被预测为重磅弹级药物，市场期待极高。萘普西 诺在血液和肠道中可被水解为萘普生、硝酸盐和其他代谢产物，由于硝酸 酯结构的存在，萘普西诺药物分子脂溶性强，水溶性差，原料药呈油状， 存在生物利用率低，稳定性差，制剂困难等诸多问题。国外文献报道，萘 普西诺口服制剂采用一种或多种辅料与油状原料药通过长时间搅拌，形成 物理混合物的方法制得。此方法虽成功将萘普西诺原料药固体粉末化，但 生产过程很难保证产品质量均一化，也无法从根本上改善该药的生物利用 度。

目前，现有技术中环糊精包合物的制备方法一般为饱和水溶液法和研 磨法。利用上述两种方法，虽然能够对一氧化氮供体型非甾体抗炎药物进 行环糊精包合，但是存在一些技术难题。首先，一氧化氮供体型非甾体抗 炎药物为难溶于水的固体或油状液体，上述两种方法，在分离前，制备的 包合物以固体形式与未包合的一氧化氮供体型非甾体抗炎药共同存在于包 合体系中，油状或固体的未包合药物与包合物固体极易发生沾粘，分离困 难，更谈不上回收再利用，因此无法实现规模化生产。第二，未包合的药 物与包合物沾粘，不易彻底分离，造成包合物均匀度下降，进而影响制剂 时的投料准确性，导致成药性差、制剂稳定性差、固体制剂溶出度差等问 题。第三，使用上述两种现有技术，包封率低；为提高一氧化氮供体型非 甾体抗炎药包封率，需要大幅增加环糊精使用量。但这样做会降低包合物 载药量。初步的实验结果表明：利用上述现有方法对一氧化氮供体型非甾 体抗炎药进行包合，包合率＜20%，载药量＜1.0%。过低的载药量不适于 制剂生产。因为：载药量过低导致制剂中包合物的用量增加，增高了成本； 过低的载药量也使单位制剂的质量或体积过大，造成使用不便，降低了患 者的顺应性。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明提供一氧化氮供体型非甾体抗炎药 β-环糊精或其衍生物包合物及其制备方法和用途。采用β-环糊精或其衍生 物对一氧化氮供体型非甾体抗炎药进行包合，增加此类药物生物利用度， 特别能够使油状一氧化氮供体型非甾体抗炎药原料药固体化。与原料药与 制剂辅料形成的物理混合物比较，本发明所述包合物稳定性更好，水溶性 强，生物利用度高，更适合于药物制剂使用。

本发明的上述目的是采用以下技术方案来实现的。

一方面，本发明提供一种一氧化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精或其 衍生物包合物，其含有一氧化氮供体型非甾体抗炎药和β-环糊精或β-环糊 精衍生物，其中一氧化氮供体型非甾体抗炎药与β-环糊精或β-环糊精衍生 物的摩尔比为1：1～1：25。

优选地，一氧化氮供体型非甾体抗炎药与β-环糊精或β-环糊精衍生物 的摩尔比为1:1～1:10。

优选地，所述一氧化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精或其衍生物包合 物主客体分子比为1：2或1：1。

在前述一氧化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精或其衍生物包合物中， 所述一氧化氮供体型非甾体抗炎药选自具有如下结构通式的化合物中的一 种：

其中，X为-(CH₂)_n1-Z-(CH₂)_n2，其中n₁、n₂各自独立地选自0，1，2， 4或5；

Z=O，N，S，C，或其中，A=O，N，S，C；Y=

该抗炎药具有经典非甾体抗炎药基本结构与NO供体结构，其中，经 典非甾体抗炎药基本结构选自水杨酸结构、芳基烷胺结构、邻氨基苯甲酸 结构、芳基丙酸结构、吲哚乙酸结构、2H-1,2-苯并噻嗪-3-甲酰胺-1、1-二 氧化物结构，但不限于此；NO供体结构选自硝酸酯结构和呋咱氮氧化物结 构，但不限于此。

优选地，所述一氧化氮供体型非甾体抗炎药选自萘普西诺 (Naproxcinod)、2-(乙酰氧基)苯甲酸-3-(硝基氧甲基)苯酯(NCX-4016)、 2-(乙酰氧基)苯甲酸-4-(硝基氧甲基)苯酯(NCX-4040)、2-(乙酰氧基)苯甲 酸-2-(硝基氧甲基)苯酯(NCX-4060)或2-(乙酰氧基)苯甲酸-2-（2-硝基氧 基乙氧基）乙酯(NCX-4018)；更优选为萘普西诺。上述化合物的结构式如 下：

优选地，所述β-环糊精衍生物选自羟丙基-β-环糊精、磺丁基醚-β-环糊 精、羟乙基-β-环糊精、二羟基丙基-β-环糊精、甲基-β-环糊精、羧甲基-β- 环糊精；更优选作为药用辅料使用的羟丙基-β-环糊精或磺丁基醚-β-环糊 精。此外，在形成包合物时，包合材料β-环糊精也是优选的。

本发明的一氧化氮供体型非甾体抗炎药-β-环糊精或其衍生物包合物 在水溶性方面，由于形成包合物增大了一氧化氮供体型非甾体抗炎药在水 中的溶解度；在稳定性方面，在长期稳定性试验和加速试验条件下，一氧 化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精包合物或其衍生物与包合前原料药相 比，其水溶性和稳定性均优于包合前原料药。

另一方面，本发明还提供了一种制备前述的一氧化氮供体型非甾体抗 炎药β-环糊精或其衍生物包合物的方法，包括：

I.油状或固体的所述一氧化氮供体型非甾体抗炎药先溶解于有机溶剂 中，加入包合助剂，剧烈搅拌、超声或研磨下，与β-环糊精或β-环糊精衍 生物水溶液进行包合；或

II.油状的所述一氧化氮供体型非甾体抗炎药，加入包合助剂，剧烈搅 拌、超声或研磨下，与β-环糊精或β-环糊精衍生物水溶液进行包合；

其中，所述包合助剂选自季胺类包合助剂、冠醚类包合助剂或聚乙二 醇类包合助剂中的一种或几种；

所述有机溶剂选自与水不相混溶的有机溶剂或与水相混溶的有机溶 剂。

优选地，所述季胺类包合助剂选自四丁基溴化铵、十六烷基三甲基溴 化铵、苄基三乙基氯化铵或苄基三丁基氯化铵中的一种或几种；更优选为 四丁基溴化铵或苄基三乙基氯化铵；

所述冠醚类包合助剂选自通式为(-C₂H₄O-)_n的化合物，其中，n为1-6 的自然数；更优选为15-冠醚-5、18-冠醚-6、12-冠醚-4、二环己基18-冠醚 -6或二苯并18-冠醚-6中的一种或几种；

所述聚乙二醇类包合助剂选自PEG-400、PEG-600、PEG-1000、 PEG-1500、PEG-4000或PEG-6000中的一种或几种；更优选为PEG-400和 PEG-6000。

优选地，所述包合助剂使用量为所述一氧化氮供体型非甾体抗炎药质 量的0.1%-10%，更优选为0.1-5%。

优选地，所述与水不相混溶的有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙 酸异丙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、甲苯、苯、石油醚、正己 烷；更优选为乙酸乙酯或二氯甲烷；

质量比：所述一氧化氮供体型非甾体抗炎药：所述与水不相混溶的有 机溶剂=1:1～1:65。

优选地，所述与水相混溶的有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、 丙二醇、乙二醇和丙三醇；更优选为乙醇、异丙醇和丙三醇；

质量比：所述一氧化氮供体型非甾体抗炎药：所述与水相混溶的有机 溶剂=1:2～1:10。

作为上述制备方法的优选实施方式，本发明提供一种制备前述的一氧 化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精或其衍生物包合物的方法，具体包括如 下步骤：

（1）取油状或固体的所述一氧化氮供体型非甾体抗炎药，加入1～65 倍质量的与水不相混溶的有机溶剂使其溶解；

（2）按照摩尔比取β-环糊精或β-环糊精衍生物，加入10～350倍摩尔 量蒸馏水，加热搅拌至完全溶解；

（3）将上述步骤1和2得到的两种溶液混合后加入所述一氧化氮供体 型非甾体抗炎药质量0.1%-10%，优选为0.1-5%的所述包合助剂，剧烈搅拌、 超声或研磨10-60min；

（4）将步骤3得到的溶液静置，分液，有机相减压浓缩至干，得到未 被包合的一氧化氮供体型非甾体抗炎药；

（5）将步骤4分离得到的水溶液用所述与水不相混溶的有机溶剂洗涤 后冷冻干燥或喷雾干燥，即得一氧化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精或其 衍生物包合物。

作为上述制备方法的另一种优选实施方式，本发明提供一种制备前述 的一氧化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精或其衍生物包合物的方法，具体 包括如下步骤：

（1）取油状或固体的所述一氧化氮供体型非甾体抗炎药，加入2～10 倍质量的所述与水相混溶的有机溶剂，超声10～20min；

（2）按照摩尔比取β-环糊精或β-环糊精衍生物，加入20～100倍摩尔 量的蒸馏水，使包合材料β-环糊精或β-环糊精衍生物完全溶解；

（3）将步骤1和步骤2得到两种溶液混合，加入所述一氧化氮供体型 非甾体抗炎药质量0.1%-10%，优选为0.1-5%的包合助剂，剧烈搅拌、超声 或研磨30min-2h，减压下蒸出所述与水相混溶的有机溶剂；

（4）对油状的一氧化氮供体型非甾体抗炎药，将步骤3剩余的溶液静 置20～40min，直接分离并回收下层油状的未被包合的一氧化氮供体型非甾 体抗炎药；对固体的一氧化氮供体型非甾体抗炎药，将步骤3剩余物的过 滤，回收滤渣，即得固体的未被包合的一氧化氮供体型非甾体抗炎药；

（5）将步骤4分离得到的水溶液冷冻干燥或喷雾干燥处理，即得一氧 化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精或其衍生物包合物。

作为上述制备方法的另一种优选实施方式，本发明还提供一种制备前 述的一氧化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精或其衍生物包合物的方法，具 体包括如下步骤：

（1）取油状的所述一氧化氮供体型非甾体抗炎药，加入1～25倍质量 的蒸馏水和1～25倍摩尔量的β-环糊精或β-环糊精衍生物，再加入所述一氧 化氮供体型非甾体抗炎药质量0.1%-10%，优选为0.1-5%的包合助剂，剧烈 搅拌、超声或研磨20min-2h；

（2）加入所述一氧化氮供体型非甾体抗炎药10～350倍摩尔量的蒸馏 水，搅拌10～30min，静置20～40min，分液，直接分离并回收下层未被包合 的一氧化氮供体型非甾体抗炎药；或者，

加入10～150倍质量的与水不相混溶的有机溶剂，搅拌10～30min，静 置20～40min，分离有机相，有机相减压浓缩至干，得到未被包合的一氧化 氮供体型非甾体抗炎药；

（3）将步骤2分离得到的水溶液冷冻干燥或喷雾干燥处理，即得一氧 化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精或其衍生物包合物。

本发明还提供一种制备前述的一氧化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精 或其衍生物包合物的方法，具体包括如下步骤：

（1）取油状或固体的所述一氧化氮供体型非甾体抗炎药，加入1～65 倍质量的与水不相混溶的有机溶剂，使其溶解；

（2）按照摩尔比取β-环糊精或β-环糊精衍生物，加入10～350倍摩尔 量蒸馏水，加热搅拌至完全溶解；

（3）将上述步骤1和2得到的两种溶液混合，剧烈搅拌、超声或研磨 10-60min；

（4）将步骤3得到的溶液静置，分液，有机相减压浓缩至干，得到未 被包合的一氧化氮供体型非甾体抗炎药；

（5）将步骤4分离得到的水溶液用所述与水不相混溶的有机溶剂洗涤 后，冷冻干燥或喷雾干燥，即得一氧化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精或 其衍生物包合物；

其中，所述与水不相混溶的有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸 异丙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、甲苯、苯、石油醚、正己烷； 优选为乙酸乙酯或二氯甲烷。

另外，本发明提供一种制备前述的一氧化氮供体型非甾体抗炎药β-环 糊精或其衍生物包合物的方法，具体包括如下步骤：

（1）取油状或固体的所述一氧化氮供体型非甾体抗炎药，加入2～10 倍质量的与水相混溶的有机溶剂，超声10～20min；

（2）按照摩尔比取β-环糊精或β-环糊精衍生物，加入20～100倍摩尔 量的蒸馏水，使包合材料β-环糊精或β-环糊精衍生物完全溶解；

（3）将步骤1和步骤2得到的两种溶液混合，剧烈搅拌、超声或研磨 30min-2h，减压下蒸出所述与水相混溶的有机溶剂；

（4）对油状的一氧化氮供体型非甾体抗炎药，将步骤3剩余的溶液静 置20～40min，直接分离并回收下层油状的未被包合的一氧化氮供体型非甾 体抗炎药；对固体的一氧化氮供体型非甾体抗炎药，将步骤3剩余的过滤， 回收滤渣，即得固体的未被包合的一氧化氮供体型非甾体抗炎药；

（5）将步骤4分离得到的水溶液冷冻干燥或喷雾干燥处理，即得一氧 化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精或其衍生物包合物；

其中，所述与水混溶的有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮、丙 二醇、乙二醇和丙三醇；优选为乙醇、异丙醇和丙三醇。

本发明还提供一种制备前述的一氧化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精 或其衍生物包合物的方法，具体包括如下步骤：

（1）取油状的所述一氧化氮供体型非甾体抗炎药，加入1～25倍质量 的蒸馏水和1～25倍摩尔量的β-环糊精或β-环糊精衍生物，剧烈搅拌、超声 或研磨10～60min；

（2）加入10～350倍摩尔量蒸馏水，搅拌30～60min，加入10～150倍 的与水不相混溶的有机溶剂，搅拌20min；

（3）将步骤2所得溶液置入分液漏斗静置20～40min，分液，回收有 机层萃取液，有机层萃取液减压浓缩至干，回收一氧化氮供体型非甾体抗 炎药；

（4）将步骤3得到的水相冷冻干燥或喷雾干燥处理，即得一氧化氮供 体型非甾体抗炎药β-环糊精或其衍生物包合物；

其中，所述与水不相混溶的有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸 异丙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、甲苯、苯、石油醚、正己烷； 优选为乙酸乙酯或二氯甲烷。

本发明还提供一种制备前述的一氧化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精 或其衍生物包合物的方法，具体包括如下步骤：

（1）取油状的所述一氧化氮供体型非甾体抗炎药，加入1～25倍质量 的蒸馏水和1～25倍摩尔量的β-环糊精或β-环糊精衍生物，剧烈搅拌、超声 或研磨10～60min；

（2）加入10～350倍摩尔量蒸馏水，搅拌10～30min；

（3）将步骤2所得溶液静置20～40min，分液，分离并回收未被包合 的一氧化氮供体型非甾体抗炎药；

（4）将步骤3分离得到的水溶液冷冻干燥或喷雾干燥处理，即得一氧 化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精或其衍生物包合物。

本发明提供另一种制备前述的一氧化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精 或其衍生物包合物的方法，具体包括如下步骤：

（1）取固体的所述一氧化氮供体型非甾体抗炎药，加入1～25倍摩尔 量的β-环糊精或β-环糊精衍生物，加入10～350倍摩尔量蒸馏水，加热至 60-80℃剧烈搅拌、超声或研磨10～60min；

（2）趁热过滤，回收滤饼，即得未被包合的一氧化氮供体型非甾体抗 炎药；

（3）滤液冷冻干燥或喷雾干燥处理，即得一氧化氮供体型非甾体抗炎 药β-环糊精或其衍生物包合物。

又一方面，本发明还提供了一种药物组合物，该药物组合物包含前述 的一氧化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精或其衍生物包合物及药学辅料。

优选地，所述药物组合物为注射剂或口服制剂；更优选地，所述注射 剂为输液、水针或粉针制剂，例如为氯化钠输液或葡萄糖输液；所述口服 制剂为口服液、糖浆、片剂、胶囊剂或颗粒剂；所述药学辅料选自可压性 淀粉、硬脂酸镁、乳糖、蔗糖、葡萄糖、氯化钠和山梨醇中的一种或多种。

再一方面，本发明还提供了前述的一氧化氮供体型非甾体抗炎药β-环 糊精或其衍生物包合物以及其药物组合物在制备治疗炎症性疾病，例如风 湿性关节炎、类风湿性关节炎和骨关节炎中的用途。

与现有技术相比，本发明至少具有以下有益的技术效果：

1.本发明的一氧化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精或其衍生物包合 物分散于溶液中，与未包合药物分离完全：一方面未包合药物实现回收套 用，降低成本；另一方面包合物均匀度好，稳定性高。故本发明所述一氧 化氮供体型非甾体抗炎药β-环糊精或其衍生物包合物的制备方法，适合工 业化生产。

2.本发明的包合物不仅保持了一氧化氮供体型非甾体抗炎药的药效， 而且与未包合原料相比，生物利用度、水溶性、稳定性显著提高。在动物 实验中口服生物利用度明显高于其未包合原料药。20℃时，本发明所述包 合物水中溶解度在10g/100ml以上。因此，本发明所述包合物更适合制剂， 可用于风湿性关节炎、类风湿性关节炎和骨关节炎的治疗及传统非甾类抗 炎药的替代。

3.本发明用β-CD和HP-β-CD、SBE-β-CD等β-环糊精衍生物对新 型一氧化氮（NO）供体型非甾体抗炎药进行包合，能使油状一氧化氮（NO） 供体型非甾体抗炎药固体化，所得的药物环糊精包合物可直接应用于固体 和液体药物制剂的开发，解决了油状一氧化氮（NO）供体型非甾体抗炎药 制剂剂型限于软胶囊，制剂种类单一，生产成本高的问题。

4.本发明公开了一种使用β-CD或β-CD衍生物将生物利用度较低的一 氧化氮供体型非甾体抗炎药物包合，提高此类药物制剂的生物利用度，增 强药物稳定性，提高药物水溶性的方法。此方法特别适合脂溶性强，原料 药成油状的一氧化氮供体型非甾体抗炎药β-CD或β-CD衍生物包合物的制 备。此方法效率极高，可实现快速，稳定，大量地制备一氧化氮供体型非 甾体抗炎药β-CD或β-CD衍生物包合物，未包合药物可实现完全回收，不 经处理直接继续使用。从而解决目前限制此类药物进一步开发的生物利用 性低，稳定性差，不易在水中溶解、无法开发液体制剂的困难。

5.本发明用β-CD和HP-β-CD、SBE-β-CD等β-环糊精衍生物对新 型一氧化氮（NO）供体型非甾体抗炎药进行包合，增强了药物稳定性，包 合物稳定性明显高于原料药和物理混合物，有利于药物的长期储存。

本发明提供的优选的制备一氧化氮供体型非甾体抗炎药物环糊精包合 物的方法，以机械力和包合助剂催化共同作用促进主客体分子发生包合， 提高了包合率，包合率可达70%以上；饱和水溶液法包合一氧化氮供体型 非甾体抗炎药物包合效果差，包合率低于20%。另外，本发明以两相分离 操作：1）包合物水溶液为水相，油状一氧化氮供体型非甾体抗炎药原料直 接为有机相、或溶解一氧化氮供体型非甾体抗炎药原料的与水不相混溶的 有机溶剂为有机相；2）包合物水溶液为水相，固体一氧化氮供体型非甾体 抗炎药原料为固相。实现了包合物与未包合原料药的完全分离，未包合原 料药可实现完全回收，降低了成本。以冻干或喷雾干燥法对水相（包合物 水溶液）进行固化处理得到质量均一的产品。

本发明提供的制备方法，尤其适合对油状一氧化氮供体型非甾体抗炎 药物进行环糊精包合。其技术优势包括：①一氧化氮供体型非甾体抗炎药 物包合效果好。②β-环糊精（β-CD）或β-环糊精衍生物使用量少，一氧化 氮供体型非甾体抗炎药与β-环糊精（β-CD）或β-环糊精衍生物的摩尔比为 1：1～1：25，载药量高，载药量＞3.0%（对比数据见表2），可实现一氧化 氮供体型非甾体抗炎药的固体制剂及液体制剂制备。③本发明的包合物生 物利用度明显高于原料药和辅料的简单物理混合物，解决了一氧化氮供体 型非甾体抗炎药水溶性差，因原料药呈油状导致生物利用率低、稳定性差、 制剂困难等诸多问题，更适合于制剂开发。④包合工艺操作简单，重现性 好，产品质量稳定可靠，包合药物与未包合药物实现完全分离，未包合原 料药可实现完全回收，降低了生产成本。因此，本发明提供的制备一氧化 氮供体型非甾体抗炎药环糊精包合物的方法，适合于工业化生产，是开发 一氧化氮供体型非甾体抗炎药相关制剂的有效途径。

附图说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：

图1为处于临床前和临床研究阶段的一氧化氮供体型非甾体抗炎药Ⅰ；

图2为处于临床前和临床研究阶段的一氧化氮供体型非甾体抗炎药Ⅱ；

图3为萘普西诺水溶液紫外图谱；

图4为萘普西诺甲醇溶液紫外图谱；

图5为羟丙基-β-环糊精水溶液紫外图谱；

图6为羟丙基-β-环糊精甲醇溶液紫外图谱；

图7为萘普西诺-羟丙基-β-环糊精水溶液紫外图谱；

图8为萘普西诺-羟丙基-β-环糊精甲醇溶液紫外图谱；

图9为萘普西诺原料药红外吸收图谱；

图10为羟丙基-β-环糊精红外吸收图谱；

图11为萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物红外吸收图谱；

图12为萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物红外吸收图谱；

图13为包合前、包合后和物理混合物的萘普西诺的药-时曲线图；以 及

图14为包合前、包合后和物理混合物的萘普生（代谢物）的药-时曲 线图。

具体实施方式

下面通过实施例详细说明本发明，应当理解，下述实施例仅用于说明 本发明，而不以任何方式限制本发明的范围。凡基于本发明上述内容所实 现的技术均属于本发明的范围。

在下列实施例中所用的一氧化氮供体型非甾体抗炎药中，萘普西诺、 NCX-4018是油状的，NCX-4016和NCX-4060是粉末状固体。

实施例1萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物的制备

称取包合材料磺丁基醚-β-环糊精4kg，加入10L蒸馏水搅拌至完全溶 解；萘普西诺350g加入2L乙酸乙酯中，搅拌完全溶解；将上述两溶液混 合后加入四丁基溴化铵1g，据烈搅拌60min后，静置，分液；回收乙酸乙 酯层，乙酸乙酯溶液减压浓缩至干回收未包合的原料药；分离得到的水溶 液用乙酸乙酯洗涤（0.5L×3）后喷雾干燥，即得松散的萘普西诺-磺丁基醚 -β-环糊精包合物3.88kg。经HPLC法检测包合率76%。回收萘普西诺46.4g。

实施例2NCX-4060-磺丁基醚-β-环糊精包合物的制备

称取包合材料磺丁基醚-β-环糊精180g，加入200ml蒸馏水搅拌至完全 溶解，15g NCX-4060加入50ml二氯甲烷中，搅拌完全溶解；将上述两溶 液混合后加入四丁基溴化铵0.2g，据烈搅拌60min后，置入分液漏斗，静 置，分液；回收二氯甲烷层萃取液，二氯甲烷萃取液减压浓缩至干回收未 包合的原料药；分离得到的水溶液用二氯甲烷洗涤（20ml×3）后喷雾干燥， 即得松散的NCX-4060-磺丁基醚-β-环糊精包合物180.4g。经HPLC法检测 包合率86%。回收NCX-40601.1g。

实施例3NCX-4060-磺丁基醚-β-环糊精包合物的制备

称取包合材料磺丁基醚-β-环糊精15g，加入120ml蒸馏水搅拌至完全 溶解；1.5g NCX-4060加入50ml甲苯中，搅拌完全溶解；将上述两溶液混 合后加入0.1g PEG-6000，据烈搅拌60min后，移入分液漏斗，静置，分液； 回收甲苯层，甲苯溶液减压浓缩至干回收未包合的原料药；分离得到的水 溶液用甲苯洗涤（20ml×3）后喷雾干燥，即得松散的NCX-4060-磺丁基醚 --β-环糊精包合物15.2g。经HPLC法检测包合率79.2%。回收0.21g NCX-4060。

实施例4NCX-4060-磺丁基醚-β-环糊精包合物的制备

称取包合材料磺丁基醚-β-环糊精400g，加入1200ml蒸馏水搅拌至完 全溶解；30g NCX-4060加入1000ml乙酸乙酯中，搅拌完全溶解；将上述 两溶液混合后加入四丁基溴化铵0.05g，据烈搅拌60min后，移入分液漏斗， 静置分液，回收乙酸乙酯层，乙酸乙酯溶液减压浓缩至干回收未包合的原 料药；分离得到的水溶液用乙酸乙酯洗涤（200ml×3）后喷雾干燥，即得 松散的NCX-4060-磺丁基醚-β-环糊精包合物342g。经HPLC法检测包合率 76%。回收NCX-40604.2g。

实施例5NCX-4016-羟丙基-β-环糊精包合物的制备

称取包合材料羟丙基-β-环糊精20g，加入100ml蒸馏水搅拌至完全溶 解；1.5g NCX-4016加入40ml乙酸乙酯中，搅拌完全溶解；将上述两溶液 混合后加入0.1g18-冠醚-6，据烈搅拌50min后，移入分液漏斗，静置分液， 回收乙酸乙酯层，乙酸乙酯溶液减压浓缩至干回收未包合的原料药；分离 得到的水溶液乙酸乙酯洗涤（30ml×3）后冷冻干燥24小时，即得松散的 NCX-4016-羟丙基-β-环糊精包合物16.8g。经HPLC法检测包合率78.5%。 回收0.52g NCX-4016。

实施例6萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物的制备

称取包合材料羟丙基-β-环糊精15g，加入150ml蒸馏水搅拌至完全溶 解；1.5g萘普西诺加入60ml甲醇中，搅拌完全溶解；将上述两溶液混合 后加入0.05g PEG-400，据烈搅拌60min后，减压蒸干甲醇，剩余溶液移入 分液漏斗，静置，分液；回收未包合的原料药；分离得到的水溶液喷雾干 燥，即得松散的萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物15.4g。经HPLC法检测 包合率80.2%。回收0.25g萘普西诺。

实施例7NCX-4016-羟丙基-β-环糊精包合物的制备

称取包合材料羟丙基-β-环糊精15g，加入120ml蒸馏水搅拌至完全溶 解；1.5g NCX-4016加入50ml乙醇中，搅拌完全溶解；将上述两溶液混合 后加入四丁基溴化铵0.05g，据烈搅拌40min后，减压蒸干乙醇，剩余溶液 过滤，回收滤渣即为未包合的原料药；滤液喷雾干燥，即得松散的 NCX-4016-羟丙基-β-环糊精包合物14.9g。经HPLC法检测包合率83.0%。 回收0.24g萘普西诺。

实施例8萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物的制备

称取包合材料羟丙基-β-环糊精20g，加入20ml蒸馏水，加入萘普西诺 1.5g，搅拌30min；依次加入250ml蒸馏水和苄基三乙基氯化铵0.05g，剧 烈搅拌20min；然后加入50ml乙酸乙酯，搅拌10min后，移入分液漏斗， 静置，分液；回收乙酸乙酯层，乙酸乙酯溶液减压浓缩至干回收未包合的 原料药；分离得到的水溶液冷冻干燥处理48h，即得松散的萘普西诺-羟丙 基-β-环糊精包合物18.2g。经HPLC法检测包合率75%。回收萘普西诺 0.19g。

实施例9NCX-4018-羟丙基-β-环糊精包合物的制备

称取包合材料羟丙基-β-环糊精20g，加入30ml蒸馏水，加入NCX-4018 1.5g，搅拌40min；加入250ml蒸馏水搅拌20min；依次加入PEG-4000.05g 和40ml二氯甲烷，剧烈搅拌20min后，移入分液漏斗，静置，分液；回收 二氯甲烷层，二氯甲烷溶液减压浓缩至干回收未包合的原料药；分离得到 的水溶液喷雾干燥，即得松散的NCX-4018-羟丙基-β-环糊精包合物19.3g。 经HPLC法检测包合率73%。回收NCX-40180.24g。

实施例10萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物的制备

称取包合材料羟丙基-β-环糊精15g，加入50ml蒸馏水搅拌至完全溶解； 加入1.5g萘普西诺，加入PEG-4000.1g，据烈搅拌60min后，移入分液漏 斗，静置，分液，直接分离回收下层未包合的原料药；分离得到的水溶液 喷雾干燥，即得松散的萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物15.8g。经HPLC 法检测包合率76.0%。回收0.30g萘普西诺。

实施例11萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物

称取包合材料磺丁基醚-β-环糊精15g，加入50mL蒸馏水搅拌至完全 溶解；萘普西诺1.5g加入30mL乙酸乙酯中，搅拌完全溶解；据烈搅拌60min 后，静置，分液；回收乙酸乙酯层，乙酸乙酯溶液减压浓缩至干回收未包 合的原料药；分离得到的水溶液用乙酸乙酯洗涤（10mL×3）后喷雾干燥， 即得松散的萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物13.2g。经HPLC法检测包 合率52.2%。回收萘普西诺0.54g

实施例12NCX-4016-羟丙基-β-环糊精包合物的制备

称取包合材料羟丙基-β-环糊精20g，加入120ml蒸馏水搅拌至完全溶 解；2.0g NCX-4016加入50ml甲苯中，搅拌完全溶解；将上述两溶液混合 后加入四丁基溴化铵0.1g，据烈搅拌40min，静置10min后，分液，有机 层减压蒸干甲苯后回收未包合的原料药；分离得到的水溶液冷冻干燥48小 时，即得松散的NCX-4016-羟丙基-β-环糊精包合物21.2g。经HPLC法检测 包合率74.8%。回收0.34g NCX-4016。

实施例13萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物的制备

萘普西诺45g，加入丙酮180ml溶解，搅拌20min至溶解；称取包合 材料磺丁基醚-β-环糊精660g，加入4.5L蒸馏水，水浴下搅拌加热，使包 合材料完全溶解；搅拌条件下将萘普西诺丙酮溶液缓慢加入到包合材料水 溶液中，剧烈搅拌20min；于40℃减压蒸除丙酮，剩余溶液移入分液漏斗， 静置20min，直接分离并回收下层油状未包合的萘普西诺；分离得到的水 溶液冷冻干燥48h，即得松散的萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物602g。 经HPLC法检测包合率56%，有机相浓缩回收萘普西诺16.8g。

实施例14萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物的制备

萘普西诺1.45g，加入甲醇6ml，超声15min，使完全溶解；称取包 合材料羟丙基-β-环糊精20g，加入150ml蒸馏水，热水浴下搅拌加热，使 包合材料完全溶解；搅拌条件下将萘普西诺甲醇溶液缓慢加入到包合材料 水溶液中，研磨20min；于40℃减压蒸除甲醇，剩余溶液移入分液漏斗， 静置20min，直接分离并回收下层油状未包合的萘普西诺；分离得到的水 溶液冷冻干燥48h，即得松散的萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物19.8g。 经HPLC法检测包合率60%。回收萘普西诺0.36g。

实施例15萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物的制备

萘普西诺15g，加入甲醇50ml，快速搅拌30min至溶解；称取包合 材料羟丙基-β-环糊精200g，加入1500ml蒸馏水，热水浴下搅拌加热，使 包合材料完全溶解；搅拌条件下将萘普西诺甲醇溶液缓慢加入到包合材料 水溶液中，超声30min；于40℃减压蒸除甲醇，剩余溶液移入分液漏斗， 静置40min，直接分离并回收下层油状未包合的萘普西诺；分离得到的水 溶液冷冻干燥48h，即得松散的萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物207g。 经HPLC法检测包合率58.5%。回收萘普西诺5.2g。

实施例16NCX-4018-磺丁基醚-β-环糊精包合物的制备

2.0gNCX-4018，加入丙酮12ml，超声20min使溶解；称取包合材料 磺丁基醚-β-环糊精25g，加入180ml蒸馏水，水浴下搅拌加热，使包合材 料完全溶解；搅拌条件下将上述NCX-4018丙酮溶液缓慢加入到包合材料 水溶液中，剧烈搅拌20min；于40℃减压蒸除丙酮，剩余溶液移入分液漏 斗，静置30min，直接分离并回收下层油状未包合的NCX-4018；分离得到 的水溶液冷冻干燥48h，即得松散的NCX-4018-磺丁基醚-β-环糊精包合物 23.2g。经HPLC法检测包合率63.0%，回收0.52g NCX-4018。

实施例17NCX-4016-羟丙基-β-环糊精的制备

称取包合材料羟丙基-β-环糊精20g，加入120ml蒸馏水搅拌至完全溶 解；2.0g NCX-4016加入50ml甲醇中，搅拌完全溶解；将上述两溶液混合 后加入四丁基溴化铵0.2g，据烈搅拌50min，40℃减压蒸除甲醇，剩余溶 液过滤，回收滤渣，即得固体的未包合的原料药；分离得到的水溶液喷雾 干燥，即得松散的NCX-4016-羟丙基-β-环糊精包合物22.0g。经HPLC法检 测包合率78.5%。回收0.39g NCX-4016。

实施例18萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物的制备

萘普西诺8g，加入磺丁基醚-β-环糊精112g，蒸馏水40ml，连续研磨 20min，加入蒸馏水600ml，搅拌10min，加入二氯甲烷50ml，搅拌10min， 移入分液漏斗，静置20min,分液，回收二氯甲烷层，二氯甲烷溶液减压 浓缩至干回收未包合的萘普西诺，水层溶液冷冻干燥48h，即得松散的萘 普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物110.5g。经HPLC法检测包合率54.4%。 回收萘普西诺2.54g。

实施例19萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物的制备

称取2.0g萘普西诺，加入包合材料磺丁基醚-β-环糊精20g，加入120ml 蒸馏水，据烈搅拌50min，静置30min，分液后直接回收未包合的原料药； 水层喷雾干燥，即得松散的萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物20.2g。经 HPLC法检测包合率55.0%。回收0.39g萘普西诺。

实施例20NCX-4016-羟丙基-β-环糊精包合物的制备

1.2g取NCX-4016，加入55g羟丙基-β-环糊精和350ml蒸馏水，加热 至80℃剧烈搅拌30min，趁热过滤，回收滤饼得未被包合的NCX-4016 0.51g。滤液冷冻干燥48h，即得NCX-4016-羟丙基-β-环糊精包合物52.4g， 经HPLC法检测包合率46.5%。

实施例21NCX-4060-磺丁基醚-β-环糊精包合物的制备

取1.5g NCX-4060，加入55g磺丁基醚-β-环糊精和350ml蒸馏水，加 热至60℃剧烈搅拌30min，趁热过滤，回收滤饼得未被包合的NCX-4060 0.42g。滤液冷冻干燥48h，即得NCX-4060-磺丁基醚-β-环糊精包合物53.2g， 经HPLC法检测包合率52.0%。

对比例1NCX-4016-羟丙基-β-环糊精包合物的制备

取1.2g NCX-4016，加入105g羟丙基-β-环糊精和130ml蒸馏水，加热 至80℃搅拌30min，趁热滤膜过滤。滤液冷却8h，过滤，滤饼干燥即得 NCX-4016-羟丙基-β-环糊精包合物62.4g，经HPLC法检测包合率13.5%。

对比例2萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物的制备

取羟丙基-β-环糊精45g，加蒸馏水至50ml，于60℃水浴中搅拌使溶解； 取萘普西诺0.5g，用0.5ml乙醇稀释，搅拌下，缓慢滴加到热饱和的羟丙 基-β-环糊精的水溶液中，加完后，继续搅拌1.5h，微孔滤膜热过滤，待冷 却，置冰箱冷藏过夜，24h后，抽滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤两次，抽干，置 真空干燥烘箱中，45℃干燥，得到萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物12.4g。 经HPLC法检测包合率17.5%。

对比例3萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物的制备

称取经羟丙基-β-环糊精40g置研钵中，加5ml蒸馏水研磨至糊状，另 将萘普西诺0.5g，用0.5ml乙醇稀释，释缓慢滴加到糊状的环糊精中，边 加边研磨，加完后继续研磨2h，静置过夜，抽滤，滤饼用石油醚洗涤两次， 置真空干燥烘箱中，45℃干燥，得到萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物8.6g。 经HPLC法检测包合率12.5%。

对比例420NCX-4060-羟丙基-β-环糊精包合物的制备

取羟丙基-β-环糊精55g，加蒸馏水至80ml，于60℃水浴中搅拌使溶解， 搅拌器搅拌，取NCX-40601.5g，加到热饱和的羟丙基-β-环糊精的水溶液 中，加完后，继续搅拌1.5h，微孔滤膜热过滤，待冷却，置冰箱冷藏过夜， 24h后，抽滤，滤饼用乙醇洗涤两次，抽干，置真空干燥烘箱中，45℃干燥， 得到萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物16.4g。经HPLC法检测包合率7.5%。

对比例5萘普西诺与羟丙基-β-环糊精物理混合物的制备

萘普西诺1.5g和羟丙基-β-环糊精70g放入容器中，直接搅拌30min 至原料药和环糊精混合均匀，所得固体过100目筛，即得萘普西诺与羟丙 基-β-环糊精物理混合物Ⅰ21.1g。

对比例6萘普西诺与磺丁基醚-β-环糊精物理混合物的制备

萘普西诺15g和磺丁基醚-β-环糊精200g放入研钵中，直接搅拌30min 至原料药和环糊精混合均匀，所得固体过100目筛，即得萘普西诺与磺丁 基醚-β-环糊精物理混合物Ⅰ210.6g。

对比例7萘普西诺与可压性淀粉、蔗糖物理混合物的制备

萘普西诺15g与可压性淀粉200g、蔗糖30.0g放入研钵中，使用搅拌 器快速搅拌30min至原料药和辅料混合均匀，所得固体过200目筛，即得 萘普西诺与可压性淀粉、蔗糖物理混合物Ⅱ240.5g。

对比例8萘普西诺与磺丁基醚-β-环糊精物理混合物氯化钠输液

取对比例6制备的萘普西诺与磺丁基醚-β-环糊精物理混合物200g加 蒸馏水800ml搅拌溶解，加入氯化钠8-9g，用0.05N盐酸和0.05N氢氧化 钠溶液调pH至5.5-6.5，补充蒸馏水至10L,加入2.5g活性炭，搅拌30min。 溶液脱炭灌装（100ml/瓶）,115℃30min热压灭菌即得。

试验例1萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物验证（结构表征）

A紫外分光光度法

①取萘普西诺适量，加入50倍体积蒸馏水，超声20min,静置分液， 水层紫外测定，结果见图3。

②萘普西诺适量，配制成甲醇溶液，紫外测定，结果见图4。

③羟丙基-β-环糊精适量配制成水溶液，紫外测定，结果见图5。

④羟丙基-β-环糊精适量配制成甲醇溶液，紫外测定，结果见图6。

⑤萘普西诺-羟丙基-β-环糊精（由实施例14制备）适量，配制成含萘 普西诺4μg/ml的水溶液，以相同羟丙基-β-环糊精水溶液为空白， 紫外测定，结果见图7。

⑥萘普西诺-羟丙基-β-环糊精（由实施例14制备）适量，配制成含萘 普西诺4μg/ml的甲醇溶液，以相同羟丙基-β-环糊精甲醇溶液为空 白，紫外测定，结果见图8。

结果分析：

萘普西诺原料药脂溶性强，呈油状，将其与水混合后成油珠状沉降在 水中，将水分出后测定水层紫外吸收发现无明显吸收峰（图3），说明萘普 西诺在水中溶解性很差；

萘普西诺在甲醇中有一定溶解度，因此其甲醇溶液可反映其紫外特征， 由图4可知萘普西诺的甲醇溶液在232nm处有最大吸收；

图7显示萘普西诺-羟丙基-β-环糊精（包合物）的水溶液在232nm处有 最大吸收，图8显示萘普西诺-羟丙基-β-环糊精（包合物）的甲醇溶液在 232nm处有最大吸收，两者紫外吸收特征与萘普西诺原料药在甲醇中的紫 外吸收特征（图4）相似。上述实验结论说明萘普西诺与羟丙基-β-环糊精 形成了包合物并增大了萘普西诺在水中的溶解度。

B红外分光光度法

①取0.2g KBr，压成片，在上面滴一滴萘普西诺丙酮溶液（5%），红 外灯下烤干，红外测定，结果见图9。

②取0.2g KBr，取10mg羟丙基-β-环糊精，混匀压成片，红外测定， 结果见图10。

③取0.2g KBr，取10mg萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物（由实施 例14制备），混匀压成片，红外测定，结果见图11。。

④取0.2g KBr，取10mg萘普西诺-羟丙基-β-环糊精物理混合物，混 匀压成片，红外测定，结果见图12。

结果分析：红外图谱显示，萘普西诺原料药在3050-2850cm^-1，1650-750 cm^-1有明显吸收峰，在1735cm^-1处有强吸收（如图10所示）。萘普西诺-羟 丙基-β-环糊精包合物形成后，原3050-2850cm^-1，1650-750cm^-1吸收峰基本 消失，1735cm^-1的羰基峰吸收度明显下降，说明包合物形成（如图12所示）。

试验例2其它实施例制备的一氧化氮供体型非甾体抗炎药环糊精包 合物的结构表征

按照试验例1的方法，对其它实施例制备的一氧化氮供体型非甾体抗 炎药环糊精包合物进行了结构表征，同时以物理混合物作为对照（物理混 合物的制备方法参照对比例4和5），结果见表1。

表1

注释：红外吸收强度S表示强吸收，M表示中等吸收，W表示弱吸收

结论：紫外检测结果显示上表中的包合物的水溶液的紫外吸收特征与 原料药在甲醇中的紫外吸收特征相似（相同的最大吸收波长），说明上述药 物与β-环糊精衍生物形成了包合物并增大了其在水中的溶解度；红外分析 表明原料药和包合物直接使用溴化钾压片有明显吸收峰，包合物形成后原 原料药图谱中的吸收峰均明显下降或基本消失，说明包合物形成。

试验例3萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物载药量测定

反相高效液相色谱法测定包合物中萘普西诺的含量：

色谱条件：C18反相色谱柱；流动相A：甲醇，流动相B：水（含有 0.1%的甲酸），等度洗脱（65:35，v/v）；检测波长：232nm。

对照品溶液的配制：精密称取萘普西诺对照品适量，用流动相溶解并 稀释制备0.1mg/mL的溶液作为对照品溶液。

样品溶液的制备：精密称取萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物适量， 用流动相溶解并稀释制备相当于萘普西诺0.1mg/mL的供试品溶液。

外标法计算耐普西诺的含量，带入下式计算包合率和载药量：

包合率（%）=最终包合物中含萘普西诺的量/萘普西诺加入量×100%

载药量（%）=最终包合物中含萘普西诺的量/最终得到产品量×100%。

结果：按上述方法测定实施例1、实施例13和实施例18的载药量结果 见表2。

试验例4萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物载药量测定

反相高效液相色谱法测定包合物中萘普西诺的含量：

色谱条件：C18反相色谱柱；流动相A：甲醇，流动相B：水（含有 0.1%的甲酸），等度洗脱（65:35，v/v）；检测波长：232nm。

对照品溶液的配制：精密称取萘普西诺对照品适量，用流动相溶解并 稀释制备0.1mg/mL的溶液作为对照品溶液。

样品溶液的制备：精密称取萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物（由实施 例3制备）适量，用流动相溶解并稀释制备相当于萘普西诺0.1mg/mL的 供试品溶液。

外标法计算耐普西诺的含量，带入下式计算包合率和载药量：

包合率（%）=最终包合物中含萘普西诺的量/萘普西诺加入量×100%

载药量（%）=最终包合物中含萘普西诺的量/最终得到产品量×100%。

结果：按上述方法测定实施例8、实施例14和实施例15的载药量结果 见表2。

参照试验例3和4的方法可测定其它所有实施例和对比例的一氧化氮 供体型非甾体抗炎药β-环糊精及其衍生物包合物载药量，结果见表2

表2

结论：

（1）对比例1-4为通用的水饱和溶液法、研磨法，这些方法所得的包合物 包合率和载药量均过低，无法适用于药物制剂，且没有实现未包合原料药 的回收。

（2）实施例1-21为按本专利方法制备的一氧化氮供体型非甾体抗炎药-β- 环糊精衍生物包合物，与对比例相比，本专利方法操作简便，载药量和包 合率显著提高，完全适合工业化制剂要求，而且实现了未包合原料药的回 收套用，有利于降低成本。

（3）实施例添加包合助剂的包合率达到70%以上，载药量5%以上，高于 未添加包合助剂的实验实例，因此包合助剂更有利于包合物包合率和载药 量的提高，制备工艺优选添加包合助剂方法。

试验例5萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物生物利用度测定

对实施例15制备的萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物进行生物利用度 评价。

制备萘普西诺原料及萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物的灌胃液，先后 （间隔7天）口服给予6只比格犬，LC-MS/MS法分别测定不同取血点的 萘普西诺及其主要代谢物萘普生的血药浓度，绘制药-时曲线（图13、14）， 比较药动参数，萘普西诺及萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物的药代动力学 参数参见表3。

样品预处理：精密吸取待测血浆200μL，置于5mL EP管中，加入20μL 内标溶液（甲醇稀释至0.5μg/mL）、20μL甲醇、1mL乙酸乙酯涡旋3min， 8000r/min离心10min，取上清液氮气吹干，加100μL80%甲醇，涡旋5min， 14000r·min^-1离心10min，80μL于进样小瓶。

色谱条件：C18反相色谱柱；流动相A：甲醇，流动相B：水（含有 0.1%的甲酸），等度洗脱（72:28，v/v）。

质谱条件：电喷雾离子源（ESI源），正离子模式，源温度为650℃。 源喷射电压为5.5kV，雾化气和加热气分别为60和65psi，气帘气为25psi， 接口处加热，采用多反应监测模式（MRM）。萘普西诺、萘普生的解簇电 压（DP）、碰撞能量（CE）和监测离子对分别为：萘普西诺40V，15eV， 348.2/302.2，萘普生37V，19eV，231.1/185.1。

表3包合前后母药和代谢物非房室模型统计矩参数

注：物理混合物由对比例6制备

结果：与包合前比，

（1）包合后母药（萘普西诺）和代谢物（萘普生）的AUC（药-时曲 线下面积）均明显增加，说明药物生物利用度增加；

（2）包合后母药和代谢物的MRT（平均滞留时间）和t_1/2（消除半衰 期）均增加，说明药物需要更长的时间被消除；

（3）包合后母药与代谢物的T_max（达峰时间）不变，说明药物达到 最高浓度的时间基本不变；

（4）包合后母药V（表观分布容积）基本不变，代谢物明显减小，说 明母药的分布基本不变，而代谢物的血药浓度升高；

（5）包合后母药和代谢物的CL（清除率）均明显降低，说明药物消 除减慢；

（6）包合后母药和代谢物的C_max（峰浓度）均大幅增加，说明母药与 代谢物的吸收增强。

结论：萘普西诺-羟丙基-β-环糊精包合物生物利用度明显高于萘普西诺 原料药

试验例6萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物稳定性研究

本实施例采用高效液相色谱法对实施例1制备的萘普西诺-磺丁基醚- β-环糊精包合物的稳定性进行了考察，并与萘普西诺原料药和对比例7制 备的萘普西诺与可压性淀粉、蔗糖物理混合物进行了对比，结果见表4、表 5。

A长期稳定性实验

表4萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物的长期稳定性试验数据

长期稳定性试验结果表明：萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物比原 料药萘普西诺和物理混合物更稳定。

B加速试验

表5萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物的加速试验数据

加速试验试验结果表明：萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物比原料药 萘普西诺和物理混合物更稳定。

结论：萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物稳定高于萘普西诺原料和 其制剂辅料混合物。

试验例7萘普西诺与其β-环糊精衍生物包合物制剂性能对比实验

以实施例13、14制备的萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物为例，比 较了其与原料药及对比例7制备的萘普西诺与可压性淀粉、蔗糖物理混合 物的制剂性能，见表6。

表6萘普西诺β-环糊精衍生物包合物与萘普西诺原料药参数对比

结论：萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物和萘普西诺-羟丙基-β- 环糊精包合物水溶性高于原料药萘普西诺，且水溶液澄明度好可用于液体 制剂的制备，原料药萘普西诺和其制剂辅料物理混合物在配置水溶液过程 中出现明显的浑浊，经较长时间放置发现为原料药油滴，因此不适于制作 液体制剂。

实施例22萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物制备片剂

取实施例1制备的萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物（载药量6.85%） 100g，加可压性淀粉100g，蔗糖25g，硬脂酸镁2.5g，混合均匀，粉末 直接压片，制成500片，包薄膜衣。

实施例23萘普西诺与磺丁基醚-β-环糊精物物理混合物制备片剂

取对比例6制备的萘普西诺与磺丁基醚-β-环糊精物理混合物90g，加 可压性淀粉110g，蔗糖25g，硬脂酸镁2.5g，混合均匀，粉末直接压片， 制成500片，包薄膜衣。

实施例24萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物氯化钠输液

A氯化钠输液制备工艺

取实施例13制备的萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精250g（载药量4.19%） 加蒸馏水1000ml搅拌溶解，加入氯化钠9-10g，用0.05N盐酸和0.05N氢 氧化钠溶液调pH至5.5-6.5，补充蒸馏水至10L,加入2.5g活性炭，搅拌 30min。溶液脱炭灌装（100ml/瓶）,115℃30min热压灭菌即得。

B血管刺激性实验

取家兔8只分为实验组和对照组两组，实验组由兔耳缘静脉缓慢滴注 上述氯化钠输液40ml，滴速1.5ml/min，连续给药3天；对照组给予10% 冰醋酸，在对侧兔耳滴注0.9%氯化钠输液注射液为阴性对照，连续给药3 天。

结果：试验组连续给药3天，局部未见异常，与对侧注射0.9%氯化钠 注射液一样，而注射10%冰醋酸后可见局部充血、变厚、渗出。表明本发 明的包合物对动物的血管刺激性小，适合于将该包合物制备成注射型。

C溶血试验

方法：新西兰兔一只，取血10ml，按常规方法制备血球，并用生理盐 水稀释成2%的混悬液供测试用。

判断标准：全溶血（溶液澄明红色，管底无细胞残留部分）；溶血（溶 液澄明红色或褐色，管底有少量红细胞残留）；无溶血（红细胞全部下沉， 上层液体无色澄明）；聚集（虽不溶血，但出现红细胞聚集，振摇后不能分 散）。

结果：血球在上述萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物氯化钠输液中， 水浴37℃保温3h，不溶血，也不发生凝集。

D毒性试验

方法：取健康小鼠10只，雌雄兼用，体重18～22g，上述氯化钠输液 经小鼠尾静脉注射本品0.5ml。

结果：48h内，未见死亡和任何中毒症状现象。

E过敏试验

方法：取白色豚鼠18只，体重280～350g，雌雄各半。分为三组（萘 普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物氯化钠输液、生理盐水及卵蛋白液组）， 每组6只，按常规方法进行试验。

结果：豚鼠在首次注射后14天和21天，萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精 包合物氯化钠输液和生理盐水对照组无过敏反应，阳性对照卵蛋白组有过 敏反应，表明萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物氯化钠输液不会引起豚鼠 过敏反应。

实施例25萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物葡萄糖输液

A葡萄糖输液制备工艺

取注射用葡萄糖500g，加注射用水搅拌溶解至1000ml，加入1g活 性炭，加热微沸15min，脱炭。取实施例1制备的萘普西诺-磺丁基醚-β-环 糊精250g（载药量6.85%)加蒸馏水1000ml搅拌溶解后，倒入葡萄糖液中， 搅拌均匀，补水至8L，用0.05N盐酸和0.05N氢氧化钠溶液调pH至4.5-5.5， 补水至10L，搅拌20min，分别使用过滤器和砂滤棒进行粗滤和精滤，灌 装（100ml/瓶），115℃30min热压灭菌即得。

B血管刺激性实验

方法：取家兔8只分为实验组和对照组两组，实验组由兔耳缘静脉缓 慢滴注上述葡萄糖输液40ml，滴速1.5ml/min，连续给药3天；对照组给 予10%冰醋酸，在对侧兔耳滴注5%葡萄糖注射液为阴性对照，连续给药3 天。

结果：试验组连续给药3天，局部未见异常，与对侧注射5%葡萄糖注 射液一样，而注射10%冰醋酸后可见局部充血、变厚、渗出。表明本发明 的包合物对动物的血管刺激性小，适合于将该包合物制备成注射型。

C溶血试验

方法：新西兰兔一只，取血10ml，按常规方法制备血球，并用生理盐 水稀释成2%的混悬液供测试用。

判断标准：全溶血（溶液澄明红色，管底无细胞残留部分）；溶血（溶 液澄明红色或褐色，管底有少量红细胞残留）；无溶血（红细胞全部下沉， 上层液体无色澄明）；聚集（虽不溶血，但出现红细胞聚集，振摇后不能分 散）。

结果：血球在上述葡萄糖输液中水浴37℃保温3h，不溶血，也不发生 凝集。

D毒性试验

方法：取健康小鼠10只，雌雄兼用，体重18～22g，上述葡萄糖输液 经小鼠尾静脉注射本品0.5ml。

结果：48h内，未见死亡和任何中毒症状现象。

E过敏试验

方法：取白色豚鼠18只，体重280～350g，雌雄各半。分为三组（萘普 西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物葡萄糖输液、生理盐水及卵蛋白液组），每 组6只，按常规方法进行试验。

结果：豚鼠在首次注射后14天和21天，萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精 包合物葡萄糖输液和生理盐水对照组无过敏反应，阳性对照卵蛋白组有过 敏反应，表明萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物葡萄糖输液不会引起豚鼠 过敏反应。

试验例8输液稳定性研究

以对比例8制备的萘普西诺与磺丁基醚-β-环糊精物理混合物输液为 对照，考察了实施例25制备的萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物葡萄糖 输液常温下12个月的长期稳定性，以及12个月加速稳定性。结果见表7。

表7长期稳定性试验数据

表8加速试验数据

结论：输液稳定性研究表明：萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物输 液稳定性良好，长期稳定性试验数据和加速试验中，随时间的延长外观澄 清未出现浑浊、乳化等现象。输液纯度变化不大，符合质量标准（纯度≥ 99%）。萘普西诺与磺丁基醚-β-环糊精物理混合物输液，长期稳定性试验 数据和加速试验中，随时间的延长外观出现浑浊至乳化，并且纯度下降快， 说明其稳定性差，有效成分降解快，不适于开发液体制剂。

试验例9片剂质量研究

分别考察了实施例22和23制备的片剂的相关性能参数，结果见表9 和表10。

表9两种片剂的累积溶出百分率

表10均匀度和有关物质检测结果

样品 水分（n=3） 含量均匀度（n=10） 含量/标示量%（n=4） 有关物质%（n=2） 实施例22 3.18±0.01 4.58 99.0±0.4 0.08±0.0 实施例23 6.18±0.01 17.12 93.5±18.2 1.08±0.0

结论：片剂质量研究表明，萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包合物制备 的片剂在溶出百分率、水分、含量均匀度、含量/标示量%和有关物质%方面 均高于物理混合物制备的口服片剂。

物理混合物制备的片剂累积溶出百分率过低，造成生物利用度低下， 不符合制剂要求，并且其制备的口服片剂均匀度差，这与原料药粘度大， 在制剂辅料中无法完全混匀有关，因此，萘普西诺-磺丁基醚-β-环糊精包 合物更适于口服片剂的制备。

以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员 可以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属 于本发明所附权利要求的范围。