南极磷虾二十八烷醇的提取及薄层层析扫描检测方法

摘要

本发明公开了一种南极磷虾二十八烷醇的提取及薄层层析扫描检测方法，具体步骤是：提取南极磷虾虾油，经过NaOH乙醇溶液加热回流、石油醚萃取和蒸除石油醚处理虾油后，得到二十八烷醇；分别制取样品液和标准液，分别点到同一块高效薄层硅胶板GF254上，展开染色，进行薄层扫描，得到二十八烷醇比移值和锋面积积分值，计算出标准液质量和峰面积积分值关系，根据得出的关系计算出样品液二十八烷醇的质量。本发明不仅可用于南极磷虾中二十八烷醇提取和检测，更重要的是可用于任何一种含二十八烷醇的原材料、产品和副产品中二十八烷醇含量的检测，在二十八烷醇开发中具有广泛、重要的应用价值。

说明书

技术领域

本发明涉及南极磷虾二十八烷醇的提取及薄层层析扫描检测方法。

背景技术

二十八烷醇是一种天然存在的一元高级醇，广泛存在于植物的根、茎、叶、壳、籽仁 的脂质中，存在于昆虫分泌的蜡质（如白蜡、虫胶蜡、蜂蜡等），广泛分布于动物的表皮、 内脏、动物脂质(如羊毛蜡、鲸蜡、鱼卵脂质和海生甲壳动物等)。

1949年美国伊利诺斯大学Cureton博士用天然的二十八烷醇和合成二十八烷醇对动物 和894名受试者进行了42个项目的试验，并取得重大进展。Cureton研究结果表明，二十 八烷醇对人体具有以下作用：①增进耐力和精力；②提高反应灵敏性；③提高应激能力； ④促进激素作用，减轻肌肉痛疼；⑤改善心肌功能；⑥降低收缩期血压；⑦提高机体代谢 率。随后有学者对二十八烷醇的毒性进行了研究，通过急性毒性试验证实白鼠半数致死剂 量LD50=18g/kg（白鼠口服），安全性比食盐高（食盐LD50=3g/kg）。

二十八烷醇在医药、化工、食品（尤其是保健品）、化妆品中应用广泛。在化妆品的主 要作用是促进血液循环、提高氧输送能、提高基础代谢率，经皮肤吸收，具有细胞赋活作 用，增进皮肤活化、消除皮肤皱纹，也用于口红、指甲油和护发素，对脱发症有明显医疗 效果等。

南极磷虾是一种生活在南极洲水域的磷虾，以群集方式生活，是南极生态系统的关键 物种，若以生物质能来说，它可能是地球上最成功的生物物种（大约有五亿吨）。蕴藏量巨 大，每年可允许捕捞量为1～1.5亿吨，全世界每年实际捕捞量为10～50万吨。但因其含氟 量高（2.4g/kg），不能直接作为食品食用。现捕捞后主要作为鱼饵料和提取加工成保健油。 若以南极磷虾为原料，开发天然药物进行综合利用，则具有广阔的开发前景。

如果证明南极磷虾含有二十八烷醇，并对其开发利用，其经济效益、社会效益会十分 显著。这之前二十八烷醇的检测多采用气相色谱、液相色谱方法，如进行结构分析，这两 种方法还要结合红外色谱、紫外、质谱和核磁共振谱联合分析。气相和液相色谱检测方法 花费大、时间长。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了南极磷虾二十八烷醇的提取及薄层层析扫描检测方 法。

本发明提供的技术方案是：

南极磷虾二十八烷醇的提取及薄层层析扫描检测方法，具体步骤是：

1)将干南极磷虾用正己烷进行提取，过滤蒸除正己烷后，得南极磷虾虾油。

2)将虾油先用浓度为10%NaOH乙醇溶液进行水浴加热回流，后再加入石油醚萃取， 萃取后的液体加入水进行分层，取出上层石油醚溶液，蒸除石油醚后得到固体二十八烷醇 提取物。

3)利用三氯甲烷溶解二十八烷醇提取物和二十八烷醇标准品（Sigma公司）分别配成样 品液和标准液。

4）不同质量的二十八烷醇标准液和单一质量的样品液分别点于同一块高效薄层硅胶板 GF254上，加入展开剂，预平衡，后将硅胶板放入展开缸，上行展开，展距达到8㎝时取出 晾干，随后染色液冲洗染色，烘干。

5)进行薄层扫描，得到二十八烷醇R_f（比移值）和峰面积积分值；由薄层色谱仪管理 软件winCATS计算出标准液质量和峰面积积分值关系，根据样品液的峰面积积分值计算出 样品液二十八烷醇的质量。

所述的步骤1），其中正己烷为南极磷虾的6倍质量体积，提取3次

所述的步骤2）中的浓度10%NaOH乙醇溶液、石油醚和水的体积比例为1:1:1。

所述的步骤4）中的不同浓度二十八烷醇标准液为5种质量梯度，分别为0.375ug,0.5ug, 0.625ug,0.75ug,1.125ug。

所述的步骤4）中的展开剂为石油醚：乙酸乙酯：甲苯，体积比例为3～5:0.5～1.5：0.05～ 0.1。

所述的步骤4）中的染色液为水：溴百里酚蓝：氢氧化钠，体积质量比例为80～110ml： 0.08～0.12g：0.6～0.8g。

二十八烷醇广泛存在于植物和动物体，本发明首次从南极磷虾中提取到了二十八烷醇， 并对南极磷虾中二十八烷醇进行了薄层层析检测，更重要的是可用于任何一种含二十八烷 醇的原材料、产品和副产品中二十八烷醇含量的检测，在二十八烷醇开发中具有广泛、重 要的应用价值。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

称取干南极磷虾60g，加360ml正己烷，提取3次，合并的提取液过滤后蒸除正己烷得 南极磷虾虾油3g。向虾油中加入120ml10%NaOH乙醇溶液，80℃水浴加热，回流反应2 小时；降温至50℃，加入120ml石油醚，70℃回流萃取40分钟；再加入120ml水，充分搅 拌20分钟，50℃下静置分层；取上层石油醚溶液，蒸除石油醚后用三氯甲烷溶解得样品液 8ml。

精密称取二十八烷醇标准品（Sigma公司）1mg，加入三氯甲烷定容至4ml，制成浓度 为0.25mg/ml的标准液。精密吸取1.5，2，2.5，3，4.5ul二十八烷醇标准液及1.5ul样品液 点于同一块高效薄层硅胶板GF₂₅₄（10cm×10cm）上，加入10ml展开剂，展开剂为石油醚： 乙酸乙酯：甲苯=4:1：0.05，预平衡20分钟，将板放入展开缸（12cm×15cm×10cm），上 行展开，展距8㎝，取出晾干，用100ml染色液冲洗染色1分钟，染色液配方为水：溴百 里酚蓝：氢氧化钠=100ml：0.1g：0.7g，50℃烘干，可见标准品和样品在同一水平上两个点 对齐且均被染成蓝色，利用Camag3型薄层扫描仪以615nm吸收波长进行薄层层析扫描， 扫描速度为20mm/s，数据分辨率为50um/step,得R_f=0.45，照射灯为钨灯进行检测计算， 以二十八烷醇标准品的质量（ng）为横坐标（X），峰面积积分值为纵坐标（Y），由薄层色 谱仪管理软件winCATS直接得到标准品与峰面积积分值关系的回归方程 Y=20.5552+10.8837X，r=0.99962，RSD=1.35%。结果表明，样品液在0.375～1.125ug线性 良好，l.5ul样品液中二十八烷醇的含量为0.59666ug,经计算8ml提取液中含二十八烷醇 3.182mg，即60g干南极磷虾中二十八烷醇的含量为3.182mg。

实施例2

与实施例1的区别在于：展开剂为15ml，展开剂为石油醚：乙酸乙酯：甲苯=5：1.5： 0.1，染色剂80ml，染色液配方为水：溴百里酚蓝：氢氧化钠=80ml：0.08g：0.6g，其他步 骤与实施例1相同，按照实施例1的线性回归方程得8ml样品液（即60g干南极磷虾）含 二十八烷醇平均为3.181mg。

实施例3

与实施例1的区别在于：展开剂为12ml，展开剂为石油醚：乙酸乙酯：甲苯=3：0.5： 0.05，染色剂110ml,染色液配方为水：溴百里酚蓝：氢氧化钠=110ml：0.12g：0.8g，其他步 骤与实施例1相同，按照实施例1的线性回归方程得8ml样品液（即60g干南极磷虾）含 二十八烷醇平均为3.183mg。