峨眉雪胆质量检验方法

摘要

本发明公开了一种检测峨眉雪胆类药品质量的检测方法，它包括任选的用于检测4‑羟甲基‑2(5H)‑呋喃酮的检测方法。本发明检测方法通过检测峨眉雪胆中4‑羟甲基‑2(5H)‑呋喃酮来评价峨眉雪胆的质量，为峨眉雪胆质量检测提供了一种新的检测方法。

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测峨眉雪胆类药品质量的质量检测方法，属于药物分析领域。

背景技术

峨眉雪胆(Hemsleya omeiensis L.T.Shen et W.J.Chang)系葫芦科雪胆属的多年生攀援草本植物，具膨大块茎，外皮淡棕黄色，花期7-9月，果期9-11月。产于四川中部地区。峨眉雪胆的块茎是其药用部位，具有清热解毒、消炎杀菌的作用。

目前主要采用性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别以及高效液相色谱法测定雪胆甲素含量的方法对峨眉雪胆质量加以控制，但上述质量控制方法均是检测雪胆类药材质量的通用方法，对峨眉雪胆类药品质量控制缺少专属性。尚缺少控制峨眉雪胆类药品质量的专用检测方法。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种检测峨眉雪胆类药品质量的检测方法。

本发明检测峨眉雪胆类药品质量的检测方法，它包括任选的用于检测4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮的检测方法。

其中，所述峨眉雪胆类药品包括峨眉雪胆药材、峨眉雪胆饮片和以峨眉雪胆为有效成分的中成药。

其中，所述检测4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮的检测方法包括：

(1)能鉴别4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮的定性检测方法；

(2)能检测4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮的定量检测方法；

(3)(1)和(2)联用后的检测方法。

进一步地，所述定性检测方法包括化学鉴别法、光谱鉴别法和色谱鉴别法。

进一步地，所述化学鉴别法包括干法鉴别和湿法鉴别。

进一步地，所述光谱鉴别法包括紫外光谱鉴别法和红外光谱鉴别法。

进一步地，所述色谱鉴别法包括薄层色谱鉴别法、高效液相色谱鉴别法、气相色谱鉴别法和纸色谱鉴别法。

进一步的，所述鉴别方法可以是上述任一种，也可以是上述两种以上鉴别法联用后的鉴别法。

其中，所述定量检测方法包括化学分析法和仪器分析法。

进一步地，所述化学分析法包括重量分析法和滴定分析法。

进一步地，所述仪器分析法包括电化学分析法、分光光度法和色谱法。

进一步地，所述检测方法可以是上述其中一种检测方法，也可以是上述两种以上检测方法联用的方法。

进一步地，所述检测方法优选为高效液相色谱法，色谱条件如下：

色谱柱：C18柱；

柱温25℃，流速为0.7ml/min，进样量为10μL；

检测波长210nm；

流动相为乙腈-0.1％磷酸水(10：90)。

其中，所述色谱柱为WondaSil C18中药分析专用色谱柱。

其中，所述色谱柱规格为4.6×250mm，5μm。

《四川省中药材标准》2010年版，收载的雪胆为葫芦科植物长果雪胆(Hemsleyadolichocarpa W.J.Chang)、(峨眉雪胆Hemsleya omeiensis L.T.Shen et W.J.Chang)或巨花雪胆(Hemsleya gigantha W.J.Chang)的干燥块根。本发明人通过前期实验发现，峨眉雪胆与长果雪胆、巨花雪胆有着显著不同，长果雪胆、巨花雪胆中雪胆甲素含量较高，而峨眉雪胆几乎不能检测出雪胆甲素含量，这不利于峨眉雪胆类药品的质量控制。本发明人通过化学成分分离，从峨眉雪胆中分离得到4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮，该成分在长果雪胆、巨花雪胆中几乎不能检出，故可作为峨眉雪胆类药品质量控制的指标性成分。因此，任何能够用于检测峨眉雪胆的方法，无论是定性的方法还是定量的方法，均可用于峨眉雪胆的检测。

本发明检测方法通过检测峨眉雪胆类药品中4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮来评价峨眉雪胆的质量，为峨眉雪胆质量检测提供了一种新的检测方法。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为结晶化合物紫外扫描图谱；

图2为结晶化合物氢谱；

图3为结晶化合物碳谱；

图4为结晶化合物单晶衍射结果；

图5为结晶化合物结构式；

图6为4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮HPLC测定图，其中，1为4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮对照品图谱；2为峨眉雪胆图谱；3为长果雪胆图谱；4为巨花雪胆图谱。

具体实施方式

实施例1 峨眉雪胆中4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮的提取分离

本发明人首次从峨眉雪胆中提取分离得到4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮，提取分离方法如下：

(1)提取：取峨眉雪胆饮片1.2kg，粉碎成粗粉，用8倍量95％乙醇加热回流提取3次，每次2小时，用200目滤布滤过，合并滤液，减压蒸馏浓缩至190ml，加入适量热水稀释至800ml，依次用石油醚(60～90℃)、二氯甲烷、乙酸乙酯及水饱和的正丁醇萃取，分别获得石油醚萃取物、二氯甲烷萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物。

(2)分离：将乙酸乙酯萃取物经硅胶柱层析，依次以石油醚-乙酸乙酯(10:1，8:1，5:1，3:1，1:1,，V∶V)溶剂系统梯度洗脱,以TLC手段检测,合并TLC检测结果相同的流份，将检测结果含有目标荧光点的流份经硅胶柱层析，依次以石油醚-乙酸乙酯(5:1，3:1)溶剂系统梯度洗脱，将TLC检测结果含有目标荧光点的流份合并浓缩，经石油醚重结晶，得到目标荧光点结晶化合物。

(3)鉴定：

将结晶化合物加无水乙醇溶解，经紫外扫描测定其最大吸收波长为210nm，紫外扫描结果见图1；

结晶化合物氢谱扫描结果见图2；

结晶化合物碳谱扫描结果见图3；

结晶化合物单晶衍射测定结果见图4。

经过上述理化参数测定，判定该结晶化合物为4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮，该结构化合物结构式见图5。该结晶化合物可作为峨眉雪胆特征化合物之一。

实施例2 峨眉雪胆、长果雪胆和巨花雪胆中4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮含量对比

1实验设备和仪器

UPH-I-10T优普超纯水器(成都超纯科技有限公司)；PS-80超声波清洗机(深圳市洁康洗净电器有限公司)；FA1204C电子天平(上海越平科学仪器有限公司)；SHZ-D(III)循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)；HHS-8S电子恒温不锈钢水浴锅(上海宜昌仪器纱筛厂)；Q-400B高速多功能粉碎机(上海冰都电器有限公司)；岛津LC-2030C3D高效液相色谱仪；色谱柱：岛津(GL Sciences)WondaSil C18 5μm for Herbal Medicine 4.6×250mm。

2试剂和试药

4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮(实验室自制,纯度>98％)；Fisher色谱乙腈(色谱纯)、Sigma色谱甲醇(色谱纯)、水(up水)，甲醇、磷酸、乙酸乙酯、乙醇。

3供试品溶液的制备：

取峨眉雪胆、长果雪胆、巨花雪胆粉末(过2号筛)各0.2g，精密加入甲醇25ml，超声50min，放冷，补足失重，过滤，取续滤液2ml，16000转离心10min，取上清液，制得供试品溶液；

4对照品溶液的制备

精密称取4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮0.01635g，置于5ml容量瓶中，加甲醇定容至5ml，制成浓度为3.27mg/ml的4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮储备液；精密吸取4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮储备液150ul至2ml的容量瓶中，加入甲醇定容至2ml，制得4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮浓度为0.24525mg/ml。

5色谱条件

色谱柱：岛津(GL Sciences)WondaSil C18 5μm for Herbal Medicine 4.6×250mm；柱温25℃，流速为0.7ml/min，进样量为10μL；检测波长210nm；流动相为乙腈-0.1％磷酸水(10：90)。

6实验结果

实验结果见表1和图6。

表1三种雪胆4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮含量测定

实验结果说明，长果雪胆、巨花雪胆中4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮含量低，峨眉雪胆中4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮含量是长果雪胆、巨花雪胆的10倍左右，因此可将4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮作为峨眉雪胆类药品质量控制的指标性成分。

《四川省中药材标准》2010年版，收载的雪胆为葫芦科植物长果雪胆(Hemsleyadolichocarpa W.J.Chang)、(峨眉雪胆Hemsleya omeiensis L.T.Shen et W.J.Chang)或巨花雪胆(Hemsleya gigantha W.J.Chang)的干燥块根。本发明人通过前期实验发现，峨眉雪胆与长果雪胆、巨花雪胆有着显著不同，长果雪胆、巨花雪胆中雪胆甲素含量较高，而峨眉雪胆几乎不能检测出雪胆甲素含量，这不利于峨眉雪胆类药品的质量控制。本发明人通过化学成分分离，从峨眉雪胆中分离得到4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮，该成分在长果雪胆、巨花雪胆中几乎不能检出，故可作为峨眉雪胆类药品质量控制的指标性成分。

本发明检测方法通过检测峨眉雪胆类药品中4-羟甲基-2(5H)-呋喃酮来评价峨眉雪胆的质量，为峨眉雪胆质量检测提供了一种新的检测方法。