АФФИННАЯ МОДИФИКАЦИЯ ДНК-ПОЛИМЕРАЗЫ ИЗ THERMUS THERMOPHILUS И ДНК-МАТРИЦЫ С ПОМОЩЬЮ ФОТОРЕАКЦИОННОСПОСОБНЫХ ПРОИЗВОДНЫХ dCTP

摘要

Изучены субстратные свойства аналогов dCTP: N~4-[2-(4-азидотетрафторбензоиламино)-этил]-2'-дезоксицитидин-5'-трифосфата (FABdCTP), 5-^-(4-азвдотетрафторбеюоил)-3-амино-тртнс-пропенил-1]-2'-дезоксицитидин-5'-трифосфата (AlFABdCTP) и ^[2Ч2-нитро-5-азидобензоиламино)-этал]-2'-дезоксицитидин-5'-трифосфата(N ABdCTP) в реакции синтеза ДНК, катализируемой ДНК-полимеразой из экстремально термофильной бактерии Thermus thermophilus В 35 (Tte ДНК-пол). Проведена фотоаффинная модификация этого фермента с использованием указанных производных dCTP, причем N~4-[2-(2-нитро-5-азидобензоиламино)-этил]-2'-дезоксицитидин-5'-трифосфат (N ABdCTP) был использован впервые. Проведена комплементарно адресованная модификация ДНК-матрицы фотоактивным праймером,синтезированным in situ Tte ДНК-поле использованием N~4-[2-(4-азидотстрафторбензоиламино)-этил]-2'-дезоксицитидин-5'-трифосфата (FABdCTP) и 5-[N-(4-азидотетрафторбензоил)-3-амино-транс-пропенил-1]-2'-дезоксицитидин-5'-трифосфата (AlFABdCTP). Показано, что эффективность модификации ДНК-матрицы зависитот типа используемой фотоактивной группы.