一种通过点突变提高大片段嗜热脂肪地芽孢杆菌DNA聚合酶活性的方法及应用

摘要

本发明公开一种通过点突变提高大片段嗜热脂肪地芽孢杆菌DNA聚合酶活性的方法及应用，属于基因工程领域的基因重组表达技术领域。酶的基因来源于嗜热脂肪地芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus)。通过基因重组获得大片段Bst DNA聚合酶质粒。将大片段Bst DNA聚合酶的第310位氨基酸G突变为L或A，或将510位氨基酸D突变为E，突变位点氨基酸均为保守氨基酸。结果显示与野生型Bst DNA聚合酶相比，突变体G310L、G310A和D540E的聚合效率均有显著提高，且都高于商业化Bst DNA聚合酶，具有较大的应用价值，为Bst DNA聚合酶国产化提供便利。