無血清培地に順化したカイコ培養細胞株を用いたバキュロウイルス遺伝子発現系の開発

摘要

カイコの培養細胞系を用いたバキュロウイルス遺伝子発現系の開発のため，無血清培地KBM700（特許申請中）で培養できるカイコ培養細胞株NIAS－Bm－Kel（特許申請中）を樹立し，組換えウイルス（BmPTLNPV）が産生するルシフェラーゼ活性を指標として培養条件を明らかにした。 KBM700培地はKel細胞の増殖とBmPTLN－pvの感染に適した無血清培地であり，さらにこの培地にカイコの熱処理体液を添加することによりウイルス感染の飛躍的な向上が示された。 体液添加によるKel細胞へのウイルスの感染効果はSf9細胞へのFBS添加よりも効果が認められた。 Kel細胞は浮遊性であるため，培養規模拡大に適した樫拝培養も可能であった。 また体液をウイルス接種後24時間目に除去しても感染効果は大きく低下せず，その結果組換え遺伝子産物から体液を効果的に排除できることが示唆された。以上から新たに樹立されたカイコ培養細胞株NIAS－Bm－Kelと無血清培地KBM700並びにカイコ熱処理体液を組み合わせた培養方法により，外来遺伝子の高発現が期待できるバキュロウイルス遺伝子発現システムを新規に開発した。