SRAP标记体系优化及在茶树种质资源研究中的应用

摘要

以Me3和Em5正反向引物组合对凤凰水仙茶树品种进行了SRAP分析体系的优化.结果表明:茶树SRAP-PCR最佳反应体系为:Mgz+浓度3.0 mmol·L-1;Taq酶2.0 U;dNTPs浓度0.2 mmol·L-1;引物浓度2.0 μmol·L-1;10×Buffer 2.0μL;模板DNA 20 ng;反应总体积为25 μL.经过重复试验,确定茶树SRAP-PCR扩增程序为:94℃预变性5min;94C变性1min,35℃复性1min,72℃延伸100 s,5个循环;94C变性1 min,50℃复性1 min,72 C延伸100 s,35个循环·最后72℃延伸5 min.采用已优化的体系对30份茶树品种进行SRAP分析,经2%的琼脂糖凝胶电泳得到了清晰且重复性好的扩增谱带,说明该反应体系稳定可靠,适用于茶树种质资源的分子标记分析.