重组质粒pEGFP-BMP7的构建及在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达

摘要

目的体外构建重组质粒pEGFP-BMP7,并检测其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达.方法应用RT-PCR方法从大鼠肾脏中分离、扩增目的基因片段,并进行测序,随后将所得cDNA定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1中,进行双酶切来鉴定克隆的正确性.通过脂质体介导重组pEGFP-BMP7瞬时转染大鼠骨髓间充质干细胞,确定转染效率,并通过RT-PCR、免疫细胞化学手段检测BMP7的表达.结果通过RT-PCR成功获得1.3kb的cDNA片段,该cDNA除756 bp处有一碱基从T突变成A外,其余序列与大鼠BMP7基因完全相符.重组质粒双酶切图谱显示,BMP7 cDNA被正确插入载体中.绿色荧光蛋白在大鼠骨髓间充质干细胞中早期瞬时转染效率可达33%.转染后RT-PCR和免疫细胞化学检测证实重组pEGFP-BMP7在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达.结论成功构建重组真核表达质粒pEGFP-BMP7,并在大鼠骨髓间充质干细胞中得到表达,有助于应用BMP7行基因治疗,促进牵张成骨、骨痂形成和修复颅颌面骨缺损.